高吸着・高分離型精製用担体(TOYOPEARL)

高吸着・高分離型精製用担体（TOYOPEARL）
用いたタンパク質の分離
を
東ソー(株)
バイオサイエンス事業部
開発部セパレーションセンター
主任研究員
Tosoh Corporation, Bioscience division
久保雄二
第65回日本生物工学会大会ランチョンセミナー
1
バイオ医薬品の製造プロセス
培養液
キャプチャー工程
Capture step
中間精製工程
Intermediate step
最終精製工程
Polishing step
ゲルの粒子サイズ
大型カラム
粗精製
高流速
100-300 μm
主な不純物の除去
50-150 μm
微量不純物や
凝集体の除去
20-50 μm
高純度製品(純度; 99.9 - 99.99%)
Tosoh Corporation, Bioscience division
第65回日本生物工学会大会ランチョンセミナー
2
プロセスクロマトグラフィー用充填剤
TOYOPEARL® ＆ TSKgel®
バイオ医薬品精製用充填剤
•
•
Protein, peptide, nucleotide, saccharide, API, food additives
IgG, mAb, Factor VIII, insulin, oligoDNA, etc.
プロセススケール用充填剤
•
TOYOPEARL はラージスケールカラムで使用可能（200cmI.D.)
高分離
•
•
TOYOPEARL 粒子サイズ 20～200 μm
TSKgel 粒子サイズ 20～30 μm
分離モード
•
SEC, IEC, HIC, AFC, Mixed-mode
高耐久性（化学的、物理的に安定）
FDA（DMF）登録済
Tosoh Corporation, Bioscience division
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3
TOYOPEARL & TSKgel 主要ラインアップ
ターゲットプロセス
Capture Intermed. Polishing
主な用途
OΟΟ
O
OΟΟ
ΟΟ
OΟΟ
OΟΟ
Ο
ΟΟ
ΟΟ
ΟΟ
OΟΟ
ΟΟ
ΟΟ
OΟΟ
Ο
ΟΟΟ
Ο
ΟΟ
Ο
Ο
ΟΟ
Protein, IgG
Protein, oligoDNA
Protein, Pro-insulin, Factor VIII
Small protein, oligoDNA
Protein
Protein
Factor VIII
75
35
75
100
35, 65, 100
35, 65, 100
200
OΟΟ
O
OΟΟ
OΟΟ
Ο
Ο
OΟΟ
ΟΟ
ΟΟ
ΟΟ
ΟΟ
OΟΟ
OΟΟ
Ο
ΟΟΟ
Ο
Protein, IgG
Protein, IgG, Insulin
Protein, IgG
Small protein, peptide
Protein
PEG protein, peptide
Insulin
アニオン交換
アニオン交換
カチオン交換
カチオン交換
20, 30
20, 30
20, 30
30
Ο
Ο
Ο
Ο
ΟΟ
ΟΟ
ΟΟ
ΟΟ
OΟΟ
OΟΟ
OΟΟ
OΟΟ
タイプ
粒子径
(μm)
カチオン交換&
疎水性
75
タイプ
粒子径
(μm)
®
TOYOPEARL GigaCap Q-650M
TOYOPEARL GigaCap® Q-650S
TOYOPEARL GigaCap® DEAE-650M
TOYOPEARL® SuperQ-650
TOYOPEARL® Q-600C AR
TOYOPEARL® QAE-550C
TOYOPEARL® DEAE-650
アニオン交換
アニオン交換
アニオン交換
アニオン交換
アニオン交換
アニオン交換
アニオン交換
75
35
75
35, 65, 100
100
100
35, 65, 100
®
TOYOPEARL GigaCap S-650M
TOYOPEARL GigaCap® S-650S
TOYOPEARL GigaCap® CM-650M
TOYOPEARL® SP-550C
TOYOPEARL® SP-650
TOYOPEARL® CM-650
TOYOPEARL® MegaCap II SP-550EC
カチオン交換
カチオン交換
カチオン交換
カチオン交換
カチオン交換
カチオン交換
カチオン交換
®
TSKgel DEAE-5PW
TSKgel ® SuperQ-5PW
TSKgel ® SP-5PW
TSKgel ® SP-3PW
イオン交換体
ミックスモード
TOYOPEARL® MX-Trp-650M
アフィニティーモード
TOYOPEARL® AF-rProtein A-650F
タイプ
アフィニティー
新製品
Tosoh Corporation, Bioscience division
粒子径
(μm)
45
ΟΟ
ΟΟ
Protein
OligoDNA
PEG protein
Insulin
ターゲットプロセス
Capture Intermed. Polishing
主な用途
ΟΟΟ
Protein, IgG
OΟΟ
Ο
ターゲットプロセス
Capture Intermed. Polishing
OΟΟ
主な用途
IgG
※ SEC, HIC は省略
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4
新商品① 高吸着容量型イオン交換体
グレード
TOYOPEARL GigaCap DEAE-650M
TOYOPEARL GigaCap Q-650S
TOYOPEARL GigaCap S-650S
官能基
-R-CH2CH2N(CH2CH3)2
-R-N(CH3)3+Cl-R-SO3-Na+
＜特長 TOYOPEARL GigaCap DEAE-650M＞
1. キャプチャー工程、中間精製工程用充てん剤
2. ジエチルアミノエチル基を有する
3. 高流速でも高い吸着容量を有する
＜特長 TOYOPEARL GigaCap S-650S, Q-650S＞
1. 中間精製工程、最終精製工程用充てん剤
2. 高吸着容量で高分離能を有する
Tosoh Corporation, Bioscience division
第65回日本生物工学会大会ランチョンセミナー
5
TOYOPEARL GigaCap DEAE-650Mの基本性能
DEAEタイプゲル
TOYOPEARL GigaCap DEAE-650M
TOYOPEARL GigaCap Q-650M
TOYOPEARL DEAE-650M
Brand A (agarose, DEAE)
Brand B (graft type, DEAE)
(eq/L)
動的吸着容量
（DBC）
(g/L-gel)
回収率
（DBC）
(%)
0.23
0.17
0.11
0.29-0.35
-
165
172
25
140
-
100
97
97
96
-
粒子径
イオン交換容量
(μm)
50-100
50-100
40-90
90(median)
40-90
静的吸着容量
(g/L-gel)
179
191
30
143
52
＜動的吸着容量測定条件＞
動的吸着容量は10％破過曲線から計算した
カラムサイズ： 6 mm I.D. x 4 cm
吸着緩衝液： 0.05 mol/L Tris-HCl 緩衝液 (pH 8.5)
溶出緩衝液： 0.05 mol/L Tris-HCl 緩衝液 (pH 8.5) + 0.5 mol/L NaCl
負荷線速度： 212 cm/hr
検出： UV (280 nm)
サンプル： BSA (1 g/L)
＜静的吸着容量測定条件＞
吸着緩衝液：0.05 mol/L Tris-HCl 緩衝液 (pH8.5)
タンパク質濃度10 g/L, 負荷タンパク質量; BSA 210 g/L-gel
TOYOPEARL GigaCap DEAE-650Mは、高い吸着容量を示します
Tosoh Corporation, Bioscience division
第65回日本生物工学会大会ランチョンセミナー
6
0.5 mol/L NaOHによるCIP耐久性（DEAE タイプ）
180
160
DBC (g/L)
140
120
100
80
60
40
20
TOYOPEARL GigaCap DEAE-650M
0
0
20
40
60
80
CIP cycle (times)
100
120
CIP 条件
アルカリ洗浄溶媒: 0.5 mol/L NaOH
洗浄緩衝液: 0.05 mol/L Tris-HCl (pH8.5) + 0.5 mol/L NaCl, 洗浄速度: 0.5 mL/min.
アルカリ洗浄量: 27 CV / cycle, 洗浄時間: 1 hr
緩衝液洗浄量: 10 CV / cycle
動的吸着容量測定条件
カラムサイズ : 6 mm I.D. X 4 cm
吸着緩衝液: 0.05 mol/L Tris-HCl (pH 8.5)
サンプル : BSA (1 g/L), 負荷流速: 1 mL/min. 検出 : UV (280 nm)
TOYOPEARL GigaCap DEAE-650Mは、高い化学的安定性を示します
Tosoh Corporation, Bioscience division
第65回日本生物工学会大会ランチョンセミナー
7
タンパク質の分離選択性（DEAE タイプ）
180
TOYOPEARL GigaCap DEAE-650M
160
TOYOPEARL GigaCap Q-650M
140
TOYOPEARL DEAE-650M
Brand A (agarose, DEAE)
120
mV
100
2
80
1
60
3
40
20
0
-20
0
10
20
30
40
Retention time (min.)
50
60
測定条件
カラムサイズ: 7.5 mm I.D. x 7.5 cm
緩衝液 A: 0.05 mol/L Tris-HCl (pH 8.5)
緩衝液 B: 0.05 mol/L Tris-HCl + 1.0 mol/L NaCl (pH 8.5)
グラジエント条件: 緩衝液A 100% から緩衝液B 100%まで120分リニア―グラジエント
流速: 1.0 mL/min, 検出: UV (280nm)
サンプル: 1. トランスフェリン (2.9 g/L), 2. オブアルブミン (6.5 g/L), 3. 大豆トリプシンインヒビター(10.0 g/L)
インジェクション量: 100 µL
Tosoh Corporation, Bioscience division
第65回日本生物工学会大会ランチョンセミナー
8
カラム圧力損失（DEAE タイプ）
0.30
Brand A (agarose, DEAE)
Column pressure (MPa)
0.25
0.20
0.15
TOYOPEARL GigaCap DEAE-650M
0.10
0.05
0.00
0
200
400
600
800
1000
1200
1400
1600
Linear Velocity （cm/hr）
カラムサイズ: 22 mm I.D. x 20 cm
溶媒 : 0.1 mol/L NaCl 水溶液
Tosoh Corporation, Bioscience division
第65回日本生物工学会大会ランチョンセミナー
9
＜まとめ＞
TOYOPEARL GigaCap DEAE-650M
• ＤＥＡＥタイプの高吸着容量型弱アニオン交換体
• 潜在的用途: Factor VIII、Pro-insulin分離精製など
• 従来のTOYOPEARL DEAE-650Mより、保持力はやや強い
• TOYOPEARL GigaCap Q-650Mより、保持力は弱い
2013年5月発売
Tosoh Corporation, Bioscience division
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10
TOYOPEARL GigaCap Q-650Sの基本性能
アニオン交換体
TOYOPEARL GigaCap Q-650S
TOYOPEARL GigaCap Q-650M
Brand C ( agarose, Q )
Brand D ( agarose, Q )
回収率
(DBC)
静的吸着容量
(eq/L)
動的吸着容量
（DBC）
(g/L-gel)
(%)
(g/L-gel)
0.20
0.17
0.15
0.12
191
172
81
40
99
97
99
100
200
191
114
92
粒子サイズ
イオン交換容量
(μm)
20-50
50-100
24-44
36-44 (median)
＜動的吸着容量測定条件＞
動的吸着容量は10％破過曲線から計算した
カラムサイズ： 6 mm I.D. x 4 cm
吸着緩衝液： 0.05 mol/L Tris-HCl 緩衝液 (pH 8.5)
溶出緩衝液： 0.05 mol/L Tris-HCl 緩衝液 (pH 8.5) + 0.5 mol/L NaCl
負荷線速度： 212 cm/hr
検出： UV (280 nm)
サンプル： BSA (1 g/L)
＜静的吸着容量測定条件＞
吸着緩衝液：0.05 mol/L Tris-HCl 緩衝液 (pH8.5)
タンパク質濃度10 g/L, 負荷タンパク質量; BSA 210 g/L-gel
TOYOPEARL GigaCap Q-650Sは、高い吸着容量を示します
Tosoh Corporation, Bioscience division
第65回日本生物工学会大会ランチョンセミナー
11
0.5 mol/L NaOHによるCIP耐久性（Q タイプ）
200
180
160
DBC (g/L)
140
120
100
80
60
40
TOYOPEARL GigaCap Q-650S
20
0
0
20
40
60
80
100
120
CIP cycle (times)
CIP 条件
アルカリ洗浄溶媒: 0.5 mol/L NaOH
洗浄緩衝液: 0.05 mol/L Tris-HCl (pH8.5) + 0.5 mol/L NaCl, 洗浄速度: 0.5 mL/min.
アルカリ洗浄量: 27 CV / cycle, 洗浄時間: 1 hr
緩衝液洗浄量: 10 CV / cycle
動的吸着容量測定条件
カラムサイズ : 6 mm I.D. X 4 cm
吸着緩衝液: 0.05 mol/L Tris-HCl (pH 8.5)
サンプル : BSA (1 g/L), 負荷流速: 1 mL/min. 検出 : UV (280 nm)
TOYOPEARL GigaCap Q-650Sは、高い化学的安定性を示します
Tosoh Corporation, Bioscience division
第65回日本生物工学会大会ランチョンセミナー
12
タンパク質の分離選択性（Q タイプ）
690
2
1
3
590
TSKgel DEAE-5PW (30)
490
・TOYOPEARL GigaCap Q-650Sは
Mグレードとほぼ同じ選択性を有し
ピークは、よりシャープです
・他のゲルに比べ保持が強い
TOYOPEARL DEAE-650S
390
mV
TSKgel Super Q-5PW (30)
290
測定条件
カラムサイズ: 7.5 mm I.D. x 7.5 cm
緩衝液 A: 0.05 mol/L Tris-HCl (pH 8.5)
緩衝液 B: 0.05 mol/L Tris-HCl + 1.0 mol/L NaCl (pH 8.5)
グラジエント条件: 緩衝液A 100% から緩衝液B 100%まで
120分リニア―グラジエント
流速: 1.0 mL/min, 検出: UV (280nm)
サンプル: 1. トランスフェリン (2.9 g/L)
2. オブアルブミン (6.5 g/L)
3. 大豆トリプシンインヒビター(10.0 g/L)
インジェクション量: 100 µL
TOYOPEARL Super Q-650S
190
Brand D (agarose, Q)
TOYOPRAL GigaCap Q-650M
90
TOYOPRAL GigaCap Q-650S
-10
0
10
20
30
40
Retention time (min.)
Tosoh Corporation, Bioscience division
50
60
第65回日本生物工学会大会ランチョンセミナー
13
ウシ血清アルブミンの分離（Q タイプ）
450
400
pH 8.5 , 120 min.
350
TOYOPEARL DEAE-650S
【測定条件】
カラムサイズ: 7.5 mm I.D. x 7.5 cm
＜分離条件-1＞
緩衝液 A: 0.02 mol/L Bis-Tris (pH 6.0)
緩衝液 B: 0.02 mol/L Bis-Tris
+ 1.0 mol/L NaCl (pH 6.0)
＜分離条件-2＞
緩衝液 A: 0.05 mol/L Tris-HCl (pH 8.5)
緩衝液 B: 0.05 mol/L Tris-HCl
+ 1.0 mol/L NaCl (pH 8.5)
＜分離条件-3＞
緩衝液 A: 0.02 mol/L ピペラジン (pH 9.5)
緩衝液 B: 0.02 mol/L ピペラジン
+ 1.0 mol/L NaCl (pH 9.5)
グラジエント(1): 緩衝液A 100% から緩衝液B 100%
まで120分リニア―グラジエント
グラジエント(2): 緩衝液A 100% から緩衝液B 100%
まで240分リニア―グラジエント
流速: 1.0 mL/min, 検出: UV （280nm）
サンプル:. BSA (7.1 g/L)
インジェクション量: 100 µL
300
pH 8.5 , 120 min.
mV
250
TOYOPEARL Super Q-650S
200
150
pH 6.0 , 120 min.
pH 8.5 , 120 min.
Brand C (agarose, Q)
100
TOYOPEARL GigaCap Q-650S
50
pH 6.0 , 120 min.
pH 8.5 , 120 min.
aggregate
pH 9.5 , 240 min.
0
-50
0
20
40
60
80
100
Retention time (min.)
Tosoh Corporation, Bioscience division
第65回日本生物工学会大会ランチョンセミナー
14
TOYOPEARL GigaCap S-650Sの基本性能
カチオン交換体
TOYOPEARL GigaCap S-650S
TOYOPEARL GigaCap S-650M
Brand E (agarose, SP)
Brand F (agarose, S)
(eq/L)
動的吸着容量
（DBC）
(g/L-gel)
回収率
(DBC)
(%)
0.24
0.16
0.15
0.12
164
145
65
27
99
98
100
100
粒子サイズ
イオン交換容量
(μm)
20-50
50-100
24-44
36-44 (median)
静的吸着容量
(g/L-gel)
177
156
105
89
＜動的吸着容量測定条件＞
動的吸着容量は10％破過曲線から計算した
カラムサイズ: 6 mm I.D. x 4 cm
吸着緩衝液: 0.05 mol/L 酢酸緩衝液 (pH 4.7)
溶出緩衝液: 0.05 mol/L 酢酸緩衝液 (pH 4.7) + 0.5 mol/L NaCl
負荷線速度: 212 cm/hr, 検出: UV (280 nm)
サンプル: gamma-Globulin (1 g/L)
＜静的吸着容量測定条件＞
吸着緩衝液: 0.05 mol/L 酢酸緩衝液 (pH4.7)
TOYOPEARL GigaCap S-650Sは、高い吸着容量を示します
Tosoh Corporation, Bioscience division
第65回日本生物工学会大会ランチョンセミナー
15
0.5 mol/L NaOHによるCIP耐久性（S タイプ）
200
180
160
DBC (g/L)
140
120
100
80
60
40
TOYOPEARL GigaCap S-650S
20
0
0
20
40
60
80
100
120
CIP cycle (times)
CIP 条件
アルカリ洗浄溶媒: 0.5 mol/L NaOH
洗浄緩衝液: 0.05 mol/L 酢酸緩衝液 (pH4.7) + 0.5 mol/L NaCl, 洗浄速度: 0.5 mL/min.
アルカリ洗浄量: 27 CV / cycle, 洗浄時間: 1 hr
緩衝液洗浄量: 10 CV / cycle
動的吸着容量測定条件
カラムサイズ : 6 mm I.D. X 4 cm
吸着緩衝液: 0.05 mol/L 酢酸緩衝液 (pH 4.7)
サンプル : gamma-Globulin (1 g/L), 負荷流速: 1 mL/min. 検出 : UV (280 nm)
TOYOPEARL GigaCap S-650Sは、高い化学的安定性を示します
Tosoh Corporation, Bioscience division
第65回日本生物工学会大会ランチョンセミナー
16
タンパク質の分離選択性（S タイプ）
3
380
1
330
2
・TOYOPEARL GigaCap S-650Sは
Mグレードとほぼ同じ選択性を有し
ピークは、よりシャープです
・他のゲルに比べ保持が強い
280
230
mV
TSKgel SP-5PW (20)
180
TOYOPEARL SP-650S
130
Brand F (agarose, S)
80
Brand E (agarose, SP)
30
TOYOPEARL GigaCap S-650M
TOYOPEARL GigaCap S-650S
-20
0
10
20
Retention time (min.)
Tosoh Corporation, Bioscience division
30
測定条件
カラムサイズ: 7.5 mm I.D. x 7.5 cm
緩衝液 A: 0.02 mol/L リン酸緩衝液 (pH 7.0)
緩衝液 B: 0.02 mol/L リン酸緩衝液
+ 1.0 mol/L NaCl (pH 7.0)
グラジエント: 緩衝液A 100% から緩衝液B 100%
まで60分リニア―グラジエント
流速: 1.0 mL/min
検出: UV （280nm）
サンプル:1. リボヌクレアーゼ A (9.8 mg/mL)
2. チトクローム C (3.6 mg/mL)
3. リゾチーム (6.4 mg/mL)
インジェクション量: 20 µL
40
第65回日本生物工学会大会ランチョンセミナー
17
カラム圧力損失（S, Q タイプ）
3.0
3.0
TOYOPEARL GigaCap S-650S
2.5
2.5
Column pressure (MPa)
Colum pressure (MPa)
Brand C (agarose, Q)
2.0
1.5
Brand E (agarose, SP)
1.0
2.0
1.5
1.0
0.5
0.5
0.0
0.0
0
200
400
600
Flow linear velocity (cm/hr)
800
1000
TOYOPEARL GigaCap Q-650S
0
100
200
300
400
500
600
700
Flow linear velocity (cm/hr)
カラムサイズ: 22 mm I.D. x 20 cm
溶媒 : 0.1 mol/L NaCl 水溶液
Tosoh Corporation, Bioscience division
第65回日本生物工学会大会ランチョンセミナー
18
800
＜まとめ＞
TOYOPEARL GigaCap Q-650S
TOYOPEARL GigaCap S-650S
• 高吸着容量型／高分離能イオン交換体，微粒子（35 μm)
• 高純度精製、最終精製（ポリッシング）に適しています
• リニアグラジエント分離に適しています
2013年5月発売
Tosoh Corporation, Bioscience division
第65回日本生物工学会大会ランチョンセミナー
19
新商品② ミックスモードTOYOPEARL
O
OCH2CNH
H
C
COONa
Weak cation exchange
CH2
TOYOPEARL
Hydrophobic
N
H
製品名: TOYOPEARL MX-Trp-650M
リガンド : トリプトファン
粒子径分布: 50-100 µm
Tosoh Corporation, Bioscience division
第65回日本生物工学会大会ランチョンセミナー
20
TOYOPEARL MX-Trp-650Mの基本性能
充填剤
TOYOPEARL MX-Trp-650M
TOYOPEARL GigaCap CM-650M
TOYOPEARL GigaCap S-650M
Brand M (Agarose Multi-mode resin)
(eq/L)
動的吸着容量
*1
(g/L-gel)
回収率
*1
(%)
動的吸着容量
*2
(g/L-gel)
回収率
*2
(%)
0.12
0.24
0.16
0.069
95
18
2
14
97
86
48
0
0
11
96
85
粒子径
イオン交換
容量
(μm)
50-100
50-100
50-100
75 (median)
＜動的吸着容量測定条件＞
動的吸着容量は10％破過曲線から計算した
カラムサイズ: 6 mm I.D. x 4.0 cm
吸着緩衝液 *1: 0.05 mol/L 酢酸緩衝液 (pH 4.7) + 0.10 mol/L 塩化ナトリウム
吸着緩衝液*1 の伝導度は、およそ12 mS/cm
吸着緩衝液 *2: 0.05 mol/L 酢酸緩衝液 (pH 4.7) + 0.15 mol/L 塩化ナトリウム
吸着緩衝液*2 の伝導度は、およそ17 mS/cm
溶出緩衝液: 0.1 mol/L Tris-HCl 緩衝液 (pH 8.5) + 0.3 mol/L 塩化ナトリウム
負荷線速度: 212 cm/hr, 検出: UV (280 nm)
サンプル: ポリクローナルヒト IgG (1 g/L)
TOYOPEARL MX-Trp-650Mは、高塩濃度でも高い吸着容量を示します
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21
動的吸着容量の塩濃度耐性（MX-Trp-650M）
120
Human IgG DBC (g/L)
100
80
0.00
0.10
0.15
0.20
60
mol/L
mol/L
mol/L
mol/L
NaCl
NaCl
NaCl
NaCl
40
20
0
3.5
4
4.5
5
5.5
Loading buffer pH
6
6.5
＜動的吸着容量測定条件＞
動的吸着容量は10％破過曲線から計算した
カラムサイズ: 6 mm I.D. x 4.0 cm
吸着緩衝液:
0.05 mol/L 酢酸緩衝液 (pH 4.0, 4.3, 4.7, 5.0, 5.5, 6.0) + 塩化ナトリウム(0.0, 0.1, 0.15, 0.2 mol/L)
溶出緩衝液:
0.1 mol/L Tris-HCl 緩衝液 (pH 8.5) + 0.3 mol/L 塩化ナトリウム
負荷線速度: 212 cm/hr, 検出: UV (280 nm)
サンプル: ポリクローナルヒト IgG (1 g/L)
高塩濃度下でも、pHを下げることにより高い吸着容量を維持
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22
モノクローナルIgGの精製例（MX-Trp-650M）
900
1000
mAb/CHO Cell Protein Breakthough curve
800
DBC loading solutrion
700
mAb DBC = 93 g/L
Yield 96%
600
400
600
200
500
mV
mV
DBC elution fraction
800
0
0
20
40
60
80
100
120
monoclonal antibody
400
140
-200
Time(min.)
動的吸着容量測定条件
カラムサイズ: 6 mm I.D. x 4.0 cm
吸着緩衝液: 0.05 mol/L 酢酸緩衝液 (pH 4.7) + 0.1 mol/L 塩化ナトリウム
溶出緩衝液: 0.1 mol/L Tris-HCl 緩衝液 (pH 8.5) + 0.3 mol/L 塩化ナトリウム
負荷流速: 1.0 mL/min.(212 cm/h), 溶出流速: 2.0 mL/min.
検出: UV (280 nm)
負荷サンプル: 0.05 mol/L 酢酸緩衝液 pH 4.7 + 0.1 mol/L 塩化ナトリウムの
緩衝液へCHO Cell culture とモノクローナルIgGを溶解させた溶液
モノクローナル IgG の濃度: 1 g/L
負荷サンプル溶液の伝導度: 12 mS/cm
300
200
100
0
0
5
10
Retention time (min.)
15
20
溶出フラクションのSEC分析条件
カラム: TSKgel G3000SWXL, 7.8 mm I.D. X 30 cm
溶離液: 0.1 mol/L リン酸緩衝液 + 0.3 mol/L 塩化ナトリウム (pH 7.0)
流速: 1.0 mL/min, 検出: UV (280 nm)
サンプル: 左図の分離で得られた各フラクション
インジェクション量: 100 µL
※精製mAb中の残存HCP量は今後ELISAで確認予定
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モノクローナル抗体の凝集体分離（MX-Trp-650M）
120
200
B%
monomer
180
160
140
80
120
mV
100
aggregate (HMW)
100
80
60
aggregate (Dimer)
60
40
40
20
Buffer B (%)
220
20
0
1
-20
0
2 3 4 5 6 7
20
8 910 11
40
60
80
Retention time (min.)
12
13
100
0
120
カラムサイズ: 7.5 mm I.D. x 7.5 cm
緩衝液 A： 0.04 mol/L リン酸 + 0.03 mol/L シュウ酸 + 0.2 mol/L 塩化ナトリウム (pH 4)
緩衝液 B：緩衝液 A + 0.3 mol/L 塩化ナトリウム (pH 7)
流速：1mL/min.
検出：UV (280nm)
サンプル：モノクローナル抗体 5.6 g/L （50℃で1hインキュベーションした抗体を一部含む）
インジェクション量：200μL
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モノクローナル抗体の凝集体分離
（溶出フラクションのSEC分析-1 MX-Trp-650M）
45
13
monoclonal antibody original sample solution
40
35
monomer
30
9
20
mV
mV
25
aggregate (HMW)
aggregate (dimer)
15
7
5
10
3
5
1
0
Fraction-2
Fraction-3
Fraction-4
Fraction-5
Fraction-6
-1
-5
0
5
10
15
Elution time (min.)
20
0
25
5
10
15
Elution time (min.)
20
25
0.5
5
4
0.4
monomer
Fraction-3
3
0.2
Fraction-5
1
Fraction-8
0.1
Fraction-6
0
monomer
0.3
Fraction-4
2
dimer
mV
mV
monomer
11
Fraction-9
0
Fraction-10
-0.1
-1
0
5
10
15
Elution time (min.)
20
25
0
5
10
15
Elution time (min.)
20
25
カラム: TSKgel G3000SWXL, 7.8 mm I.D. X 30 cm
溶離液: 0.1 mol/L リン酸緩衝液 + 0.2 mol/L アルギニン (pH 6.8)
流速: 1.0 mL/min, 検出: UV (280 nm)
サンプル: スライド1の分離で得られた各フラクション
インジェクション量: モノクローナル抗体オリジナルサンプル溶液7.5 µL , 各フラクション100 µL
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モノクローナル抗体の凝集体分離
（溶出フラクションのSEC分析-2 MX-Trp-650M）
45
2
monoclonal antibody original sample solution
40
35
1.5
monomer
30
HMW
1
20
aggregate (HMW)
15
mV
mV
25
aggregate (dimer)
0.5
10
5
Fraction-13
0
0
-5
-0.5
0
5
10
15
Elution time (min.)
20
25
0
5
10
15
20
25
Elution time (min.)
カラム: TSKgel G3000SWXL, 7.8 mm I.D. X 30 cm
溶離液: 0.1 mol/L リン酸緩衝液 + 0.2 mol/L アルギニン (pH 6.8)
流速: 1.0 mL/min, 検出: UV (280 nm)
サンプル: スライド1の分離で得られた各フラクション
インジェクション量: モノクローナル抗体オリジナルサンプル溶液7.5 µL , 各フラクション100 µL
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＜まとめ＞
TOYOPEARL MX-Trp-650M
• 高塩耐性／高吸着容量型カチオン交換ミックスモード充填剤
• キャプチャー、中間精製工程に利用可能
• 潜在的用途：抗体精製（キャプチャー工程、凝集体除去）
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■連絡先
東ソー株式会社バイオサイエンス事業部
東京本社営業部
大阪支店バイオサイエンスG
名古屋支店バイオサイエンスG
福岡支店
山口営業所
カスタマーサポートセンター
(03) 5427-5180
(06) 6209-1948
(052) 211-5730
(092) 781-0481
(0834)63-9888
(0120)17-1200
開発部セパレーションセンター
(0834)63-9864， FAX (0834)63-9879
〒746-8501 山口県周南市開成町4560
〒105-8623
〒541-0043
〒460-0008
〒810-0001
〒746-0015
〒252-1123
東京都港区芝3-8-2
大阪市中央区高麗橋4-4-9
名古屋市中区栄1-2-7
福岡市中央区天神1-13-2
山口県周南市清水1-6-1
神奈川県綾瀬市早川2743-1
■ホームページ
http://www.separations.asia.tosohbioscience.com/
■お問合せe-mail
[email protected]
◆御清聴ありがとうございました◆
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