トランスジェニックの遺伝子改変マウス事業では、 実績・品質・安心 のサービスを提供しております。 実績 熊本大学 山村研一 教授 が開発された可変型遺伝子トラップ法を用いて、大規模・ 網羅的にノックアウトマウス系統を樹立し、その数は 『 約2700系統 』 に達しました。 それらは、樹立済みノックアウトマウスライブラリーとして、「TG Resourse Bank®」 に てご利用可能です。 品質 新潟大学 脳研究所 﨑村建司 教授 が開発されたC57BL/6純系、高GT率を誇る 『 高品質ES細胞 』 を導入しております。大規模ノックアウトマウス作製で培ったES 細胞培養・生殖工学に関連する技術と合わせ、ターゲティング法による「ノックアウト マウス作製受託サービス」を実施しております。 安心 ノックアウトマウスを作製 ・ 使用等する場合には、『 相同遺伝子組換法 』 に関する 特許のライセンスが必要になります。当社は、日本で唯一、正式にライセンス許諾を 受けておりますので、ご安心してお使いいただけます。 ご存知ですか？ ノックアウトマウスに関する基本特許 Homologous recombination特許 特許第3059481号 特許第3298842号 特許第3298864号 -1- 遺伝子改変マウス事業 ノックアウトマウス提供サービス比較 樹立済み ノックアウトマウス 作製受託 TG Resource Bank DeltaOne 破壊遺伝子 ランダム (約2,600遺伝子) GPCR、チャネルなど (約900遺伝子) ご希望の遺伝子 作製方法 可変型遺伝子 トラップ法 ターゲティング法 ターゲティング法 ES細胞 TT2 129由来 C57BL/6由来＊ 納期 3ヶ月 3ヶ月 1年 提供形態 使用権許諾 使用権許諾 受託作製 ＊129/sv, BALB/c 由来にも対応可能です CONTENTS ◇ 遺伝子改変マウス作製受託サービス ・ KOマウス作製 ・ Tgマウス作製 ・ SPF化・増産、凍結胚・精子作製 3 5 6 ◇ 樹立済みノックアウトマウス（TG Resource Bank®） 7 ◇ 樹立済みノックアウトマウス（DeltaOneTM） ◇ 表現型解析データ（DeltaOne®） 9 10 ◇ 表現型解析受託サービス 11 ◇ スピードコンジェニック 13 ◇ マウス凍結胚、生殖工学マニュアル 14 -2- 遺伝子改変マウス作製受託 KOマウス作製 z 750系統のノックアウトマウス樹立実績 z 高品質ES細胞（C57BL/6純系、高GT率）使用 z 相同遺伝子組換法に関する特許のライセンス許諾取得 技術指導 熊本大学 山村研一 教授 大規模ノックアウトマウス作製 『 マウス750系統 ES細胞2000系統 』 実績 品質 安心 『 高品質ES細胞 』 高GT率 C57BL/6純系 RENKA株 ＥＳ開発 新潟大学 脳研究所 﨑村建司 教授 -3- 日本企業で唯一 『 相同遺伝子組換法 』 ライセンス取得 受託作製 ■ 標準作業内容 工程 ベクター 構築 内容 ベクターのデザイン NCBIゲノムデータベースを基にデザイン を決定する arm領域の作製 PCRにより Long arm / Short arm に相当 するゲノム配列を増幅する サザン解析条件の検討 設計したProbeを作製し、サザンブロット 解析条件を決定する ベクターの構築 各armをターゲティングベクターに組込む ESクローンの樹立・解析 エレクトロポレーションにてベクターをES 細胞に導入し、G418による選択培養後、 最大350クローンを解析する（３クローン の陽性株確認時点で解析終了） ESクローン 樹立 相同組換えクローンの作製 陽性クローンを必要量スケールアップ培 養し、Feeder細胞の除去を行う（最大３ク ローン樹立） キメラマウスの作製 マイクロインジェクション法/アグリゲー ションによりキメラマウスを作製する（最 大３クローン使用） GTの確認 キメラ率上位３匹を交配させて得られた F1産仔のゲノムを用い、サザン解析によ りジャームライントランスミッション（GT）を 確認する ヘテロ欠損マウスの作製 ヘテロ欠損マウスを作製し、微生物検査 後、ご依頼者へ送付する（2ブリーディン グペア） キメラマウス 作製 ヘテロマウス 作製 ※ ※ ※ ※ ※ ※ 詳細内容 標準 期間 成果物 4ヶ月 ・構築図 ・制限酵素データ ・サザン条件図 4ヶ月 ・コロニー数 ・サザン解析データ 2ヶ月 ・キメラ産仔データ ・サザン解析データ 3ヶ月 ・ヘテロ欠損マウス 使用ES細胞は、129/sv, BALB/c 由来にも対応可能です 一部工程のみの作業もお請け致します（ただし、特許の保護を受けられない場合もございます） コンディショナルノックアウトマウスも作製致します 価格につきましては、別途お問い合わせください 納品にかかわる輸送費・微生物検査などは実費を頂きます 上記作業期間は標準的なもので、作業状況により変動することもございますこと、予めご了承ください -4- 遺伝子改変マウス作製受託 Tgマウス作製 z KOマウス作製で裏付けられた実績と高い成功確率 z 追加インジェクション無償実施保証つき ■ サービス内容 ご用意 作業内容 納品物 納期 保証項目 プラスミドDNA 1) プラスミドDNAの線状化および精製 2) 受精卵（C57BL/6系統） 100個へのインジェクション 3) ファウンダーマウスのゲノムDNA抽出 ファウンダーマウスのゲノムDNA トランスジェニックマウス 5ヶ月 100個へのインジェクションにてファウンダーマウスが得られ なかった場合、100個への追加インジェクションを無償実施 ※ 価格につきましては、別途お問い合わせください ※ 解析はお客様にてお願い致します（当社での実施の場合、別途費用が必要となります） ※ 納品にかかわる輸送費・微生物検査などは実費を頂きます -5- 受託作製 マウスSPF化および増産 ■ サービス内容 ご用意 作業内容 納品物 納期 雄マウス2～3匹 1) 提供された雄マウスからの精子採取 2) 未受精卵（C57BL/6系統） を用いて体外受精 3) 得られた受精卵の仮親への移植・帝王切開および飼育 SPF化マウス 4ヶ月 ※ 価格につきましては、別途お問い合わせください ※ 事前に微生物検査成績書の提出をお願い致します（内容によりお断りさせていただく場合もあります） ※ 納品にかかわる輸送費・微生物検査などは実費を頂きます 凍結胚・精子作製 ■ サービス内容 ご用意 作業内容 納品物 納期 雄マウス2～3匹 1) 提供された雄マウスからの精子採取 2) 未受精卵（C57BL/6系統） を用いて体外受精 精子凍結 3) 得られた受精卵の仮親への移植・帝王切開および飼育 凍結胚（クライオチューブ）・精子（ストロー） 1ヶ月 ※ 価格につきましては、別途お問い合わせください ※ 事前に微生物検査成績書の提出をお願い致します（内容によりお断りさせていただく場合もあります） ※ 納品にかかわる輸送費・微生物検査などは実費を頂きます -6- トランスジェニック社 ノックアウトマウス TG Resource Bank® z 約 750 系統の樹立済みノックアウトマウス z 約 2000 系統の樹立済みノックアウトESクローン ■ 樹立済み系統一例 Dst / Glrx5 / Elovl5 / Elovl6 / Acot8 / Metap1 / B3bp / Rnf111 / Nup210 Ube2j2 / Tead3 / Rassf3 / Hip1 / Smad2 / Jarid2 / Aldoa …etc ※ その他系統の検索は、下記ウェブサイトにてご確認いただけます ※ 遺伝子名をご教示いただけましたら、当社でもお調べいたします http://www.transgenic.co.jp/jp/products/mice/ -7- 樹立済みマウス ■ 遺伝子トラップ法 遺伝子トラップベクター マーカー (β-geo) Stop Poly A プロモーター Poly A Stop マーカー (β-geo) プロモーター トラップベクターの挿入により、転写が停止し、 遺伝子の破壊が引き起こされます。 Poly A Poly A 転写を阻害 トラップベクター自身にはプロモーターが含まれていないため、 内在性プロモーターの直下に挿入された場合のみ マーカー遺伝子の発現が起こり、クローンとして取得されます。 遺伝子破壊 5’RACEによる 破壊遺伝子の同定 ■ ご提供内容 契約形態 非独占・無期限の使用権許諾 納品物 2ブリーディングペア（ヘテロ） 納期 成果 （知的財産権） 使用範囲 返金 品質保証項目 マウス系統 3ヶ月（凍結胚の準備～マウス納品） ＥＳ細胞系統 6ヶ月（ES細胞の準備～マウスの樹立～納品） ご依頼所に帰属 ご依頼者ならびに同研究グループの方々 （第三者への供与・販売等は不可） 自社提示情報に誤りがあった場合 挿入ベクター構造 5’-RACE配列 ※ 費用は別途お問い合わせください -8- デルタジェン社 ノックアウトマウス DeltaOneTM z 約 900 系統の樹立済みノックアウトマウス z 創薬ターゲット (GPCR、イオンチャネル など）にフォーカス z 数多くの製薬企業・研究機関での使用実績あり GPCRs Other Nuclear Hormone Receptors Kinases Protease Inhibitors Protein Degradation Pathways Phosphatases Ion Channels Proteases Transporters ■ ご提供内容 契約形態 納品物 納期 成果 （知的財産権） 使用範囲 ライセンス期間 Deltagen社との使用権許諾契約 2ブリーディングペア（ヘテロ） 契約締結後、3～4ヶ月 ご依頼所に帰属 ご依頼者ならびに同研究グループの方々 （第三者への供与・販売等は不可） （リサーチライセンス） マウス到着後3年間 （コマーシャルライセンス） 無期限 ※ 費用は別途お問い合わせください -9- 樹立済みマウス DeltaBase® z 約 750 系統のノックアウトマウス表現型データ z 創薬ターゲットの効率的な遺伝子機能解析に有用 z ノックアウト遺伝子ごとに約 20,000 のデータを収載 ■ 収載データ一例 ホモ 胚および胎生致死評価 遺伝子発現評価 一般状態 病理組織学的評価 血液学&血液生化学的評価 行動評価 高週齢マウスの一般状態 & 病理組織学的評価 ※ 詳細は別途お問い合わせください -10- 表現型解析受託サービス 血液学的検査 血液学的検査 コース コース 組織検査 組織検査 コース コース 血液学的検査 コース 組織検査 コース 白血球数 赤血球数 血色素量 ①体重測定（剖検日当日） 血小板数 ヘマトクリット値 平均赤血球容積 平均赤血球血色素量 平均赤血球色素濃度 ②剖検 ③器官重量測定（10器官）＊1 ④HE染色スライド作製＊2 ・本検査は、マウス生体の納入が必要となります ・生体を納入、1週間馴化飼育の後に剖検し、血 液を採取します ・マウスの輸送費、微生物検査費用は、実費をご 負担頂きます ⑤病理組織学的検査（所見） ⑥病理組織写真（CD収録） ⑦飼育管理 ⑧報告書作成 血液生化学検査 血液生化学検査 簡易コース 簡易コース ⑨解剖・組織採取・ホルマリン固定 血液生化学検査 簡易コース 総タンパク質 アルブミン A/G比 総ビリルビン グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ ＊1 測定部位 脳、胸腺、肺、心臓、肝臓、腎臓、 脾臓、副腎、下垂体、精巣or卵巣 ＊2 作製部位 脳、脊髄、下垂体、下顎部リンパ節、 心臓、肺、肝臓、胸腺、脾臓、腎臓、 膵臓、副腎、腸間膜リンパ節、精嚢、 精巣、精巣上体、前立腺、子宮、膣、 卵巣、胸骨、乳腺、大動脈、大腿骨 γ-グルタミルトランスペプチダーゼ ・本検査は、マウス生体の納入が必要となります ・マウスの輸送費、微生物検査費用は、実費をご 負担頂きます アルカリフォスファターゼ 中性脂肪（トリグリセライド） 総コレステロール グルコース 尿素窒素 クレアチニン 無機リン カルシウム 固定した組織を既にお持ちの方は、上記④、 固定した組織を既にお持ちの方は、上記④、 ⑤、⑥、⑧のみご依頼頂けます。 ⑤、⑥、⑧のみご依頼頂けます。 ・サンプルはヘパリン血漿、または血清を、－20℃ でお送りください。 ※ 解析は、各試験群（対照群含む）につきn数=3以上からお請け致します ※ 価格・納期につきましては、ご要望の検査項目・解析数を基に御見積させていただきます ※ 詳しくは当社ウェブサイト、もしくはお電話にてお問い合わせください -11- 受託解析 腎機能 腎機能 簡易測定コース 簡易測定コース 代謝系 代謝系 簡易測定コース 簡易測定コース 腎機能 簡易測定コース 代謝系 簡易測定コース クレアチニン 血液生化学 検査 尿酸 総コレステロール 尿素窒素 血液生化学 検査 総タンパク 中性脂肪 電解質 湿重量 湿重量 剖検、腎臓 病理 HDLコレステロール 剖検、肝臓、心臓 病理 腎臓（PAS染色） 血糖 膵臓（HE）、肝臓（HE）、心臓（HE） ・本検査は、マウス生体の納入が必要となります ・マウスの輸送費、微生物検査費用は、実費をご 負担頂きます ・本検査は、マウス生体の納入が必要となります ・マウスの輸送費、微生物検査費用は、実費をご 負担頂きます 肝機能 肝機能 簡易測定コース 簡易測定コース 免疫・炎症 免疫・炎症 簡易測定コース 簡易測定コース 肝機能 簡易測定コース 免疫・炎症 簡易測定コース グルタミン酸オキザロ酢酸 トランスアミナーゼ グルタミン酸ピルビン酸 トランスアミナーゼ 血液学的 検査 γ-グルタミルトランス ペプチダーゼ 血液生化学 検査 湿重量 乳酸脱水素酵素 病理 コリンエステラーゼ アルブミン アンモニア 病理 血小板数 ヘマトクリット値 平均赤血球容積 剖検、胸腺、脾臓 胸腺（HE）、脾臓（HE） ・本検査は、マウス生体の納入が必要となります ・マウスの輸送費、微生物検査費用は、実費をご 負担頂きます A/G比 湿重量 血色素量 平均赤血球色素濃度 ロイシンアミノペプチダーゼ 直接ビリルビン 赤血球数 平均赤血球血色素量 アルカリフォスファターゼ 総ビリルビン 白血球数 剖検、肝臓 肝臓（HE）、胆嚢（HE） ・本検査は、マウス生体の納入が必要となります ・マウスの輸送費、微生物検査費用は、実費をご 負担頂きます -12- その他マウス関連 スピードコンジェニック z 129系統 ⇒ C57BL/6系統 へのコンジェニック系統の作製 z 交配回数は5回 z 1世代ごとにゲノムマーカー解析結果をご報告 129系統 ♂ C57BL/6系統 ♀ PCR-SSLPマーカーによる解析 自然交配 or 体外受精 により産子取得 C57BL/6系統 ♀ 置換率の高い個体を選別 レシピエント系統の遺伝子型が99％ の純度に達するまで行う（約5世代） 従来法のバッククロスでは、最低12世代（3年～5年）の交配が必要となります。スピードコンジェニッ ク法では、マイクロサテライトマーカーを用いて遺伝子置換をモニタリングすることによって、約5世 代（約1.5年）でコンジェニック系統を樹立します。 ■ サービス内容 ご用意 作業内容 納品物 納期 解析するマウスのゲノムDNAおよびドナー系統のゲノムDNA PCR-SSLPマーカーによる解析 ゲノムマーカー解析報告書 1世代につき約3週間 ※ 価格につきましては、別途お問い合わせください -13- その他 マウス凍結胚 動物種 マウス 種類 未受精卵、前核期胚、2細胞期胚、8細胞期胚 凍結方法 簡易ガラス化法※ 保存方法 液体窒素中で凍結用チューブにて保存 販売単位 100 embryos 保存液組成 DMSO：5μl・DAP213：45μl/vial 用途 遺伝子改変マウス作製、培養液のロットチェック、等 ※ Nakao K, Nakagata N, Katsuki M : Exp. Anim. 46(3):231-234, 1997 品名 品番 形態 価格 保存 マウス８細胞期胚（ICRマウス由来）（100個/バイアル） EE-001 バイアル ¥ 40,000（税別） 液体窒素中 z z z z 上記製品は、コスモバイオ・フナコシより販売しています。 その他製品も受注生産で販売を行っておりますので、お問い合わせください。 本製品は、ドライシッパー（輸送用液体窒素凍結保存容器）にて、当社より直接お客様にお届けいたします。 当該納品に使用したドライシッパーは、同梱の着払い伝票にて、お客様より当社へのご返送をお願いいたします。 生殖工学技術マニュアル マウス版 マウスの精子・胚凍結保存における標準法を確立された熊本大学 生命資源研究・支援センター（CARD）の中潟直己 教授の制作・監修によるHTML形式で閲覧できる電子マニュアルです。実体顕微鏡下での細かい操作などを動画・イ ラスト・写真を豊富に用いて解説されています。 内容 ・ガラスキャピラリーの作製 ・体外受精 ・胚の凍結保存、融解 ・卵巣の採取と凍結保存および移植 ・精子の凍結保存、融解 ・透明帯切開術 ・精管結紮雄の作製 ・卵管の低温輸送 ・卵管灌流（2細胞期胚の採取） ・経卵管壁卵管内胚移植 ・共培養法によるキメラマウスの作製 ・子宮内胚移植 ・帝王切開 ・受容雌および産子の観察 ・培地組成表 ・参考文献 品名 品番 形態 価格 保存 生殖工学技術マニュアル マウス版（日本語版） RETM-J CD-ROM ¥ 5,000（税別） - 生殖工学技術マニュアル マウス版（英語版） RETM-E CD-ROM ¥ 5,000（税別） - -14- 代理店 神戸研究所 〒650-0047 神戸市中央区港島南町7-1-14 【お問い合わせ先】 企画部 TEL:078-306-0295 FAX:078-306-0296 URL：http://www.transgenic.co.jp
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