HPLCによる柑橘類の防カビ剤（防ばい剤）の分析 - ジーエルサイエンス

LC Technical Note
HPLCによる柑橘類の防カビ剤（防ばい剤）の分析
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GL Sciences Inc.
今回は、蛍光検出（FL）及び紫外吸収検出（UV）高速液体クロマトグ
ラフィー（HPLC）を用いた柑橘類中の防カビ剤の分析をご紹介します。
防カビ剤は、80年代、青果類の長期間保存のために使用されるポス
トハーベスト農薬として社会的に大きく取り上げられました。90年代に
入ってからは、輸入割り箸からも検出され問題となっています。現在で
も、食品を安全に輸入するために防カビ剤の使用が認められており、
その残留基準が定められています。
防カビ剤分析として衛化第15号通知法に基づき、イマザリル（IMZ）の
個別分析、オルトフェニルフェノール（OPP）、チアベンダゾール（TBZ）
およびジフェニル（DP）の3成分一斉分析を行いました。
－柑橘類における各基準値－
・イマザリル
個別分析
：5mg/kg －
UV検出
・ｵﾙﾄﾌｪﾆﾙﾌｪﾉｰﾙ
：10mg/kg
一斉分析
・チアベンダゾール：10mg/kg
・ジフェニル
蛍光検出
：70mg/kg
UV検出器によるイマザリル標準液の測定例
IMZ : 0.4mg/L CV=5.5％（N=5）
HPLC条件
mAU
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4
カラム
溶離液
N
流量
カラム温度
検出
注入量
N CH2 CH O CH2 CH CH2
Cl
Cl
IMZ
800000
: Inertsil ODS-3
(5μm, 250 x 4.6 mm I.D.)
: A) CH3OH
B) H2O
A/B = 75/25, v/v
（gradient mixer）
: 1.0 mL/min
: 40 ℃
: UV 230 nm
: 10 μL
y = 72261x - 6118.8
R2 = 1
700000
600000
A rea
500000
400000
300000
200000
100000
0
0
10
Time (min)
0
20
1
2
3
4
5
6
濃度（mg/L）
7
8
9
10
イマザリルの検量線
蛍光検出器によるオルトフェニルフェノール、チアベンダゾール、ジフェニル標準液の測定例
OPP
: 0.05mg/L CV =1.5％（N=5）
HPLC条件
TBZ
: 0.01mg/L CV =1.7％（N=5）
カラム
CV =1.0％（N=5)
溶離液
60
DP
: 0.5mg/L
: Inertsil ODS-3
(5μm, 250 x 4.6 mm I.D.)
: CH3CN ： CH3OH : H2O
= 5 ： 60 : 35 , v/v
10mM SDSを添加しリン酸でpH2.5
: 1.0 mL/min
: 40 ℃
: FL Ex.285nm Em.325nm
: 10 μL
OH
DP
OPP
FLU
40
流量
カラム温度
検出
注入量
120000000
N
OPP
y = 2E+08x + 2E+06
R2 = 0.9987
TBZ
y = 5E+07x + 14111
R2 = 1
DP
y = 1E+07x + 139946
R2 = 1
100000000
S
HN
80000000
Area
TBZ
20
N
60000000
40000000
0
20000000
0
0
10
20
30
Time (min)
40
0
1
2
3
4
5
濃度(mg/L)
6
7
8
検量線
※食安輸発第0331002号通知法にある割り箸中のIMZ,OPP,TBZ,DPの各分析法も前処理は変わりますが、上記と同じ分析条件です。
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レモン中のイマザリル
前処理法：
試料 10g
有機層
－5M NaOH水溶液 2mL
－無水硫酸ナトリウム 40g
水層
－0.0025M H2SO4水溶液
撹拌
50mL×2回撹拌
－酢酸エチル 50mL×2回
ホモジナイズ（3min）
水層
遠心分離（3000rpm,5min）
有機層
－5M NaOH水溶液 5mL
－酢酸エチル25mL×2回撹拌
上澄液
残留物
－5%炭酸Na水溶液 50mLで洗浄
有機層
水層
－無水硫酸ナトリウム 10g
－減圧乾固
有機層
水層
定容
－メタノール・水（75：25） 5mL
－水 50mLで洗浄
HPLC-UV
標準添加試料のクロマトグラム
基準値の1/10以下の濃度で検出が可能であり、良好なクロマトグラムが得られます。
添加濃度
IMZ
2
mAU
4
IMZ : 2.0mg/L （1..0mg/kg）
0
2
4
6
8
Time (min)
10
12
14
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レモン中のオルトフェニルフェノール、チアベンダゾール、ジフェニル
前処理法：
試料 20g
－無水酢酸ナトリウム 2g
－無水硫酸ナトリウム 30g
－酢酸エチル 80mL
ホモジナイズ（5min）
遠心分離（2000rpm,10min）
減圧濃縮
酢酸エチル層
残渣
－1-ブタノール 5mL添加
減圧濃縮（40℃以下）
－酢酸エチル 80mL
ホモジナイズ（5min）
遠心分離（2000rpm,10min）
酢酸エチル層
定容
－移動相で20mLにメスアップ
※必要に応じてろ過
残渣
HPLC-FL
標準添加試料のクロマトグラム
基準値の1/10以下の濃度においても夾雑成分と良好に分離しており、定量が可能です。
OPP
: 0.05mg/L （0.05mg/kg）
TBZ
: 0.01mg/L （0.01mg/kg）
DP
: 0.5mg/L （0.5mg/kg）
DP
0
20
TBZ
40
OPP
FLU
60
80
添加濃度
0
10
20
Time (min)
30
40
GL Sciences LC Technical Note
残留農薬分析におけるイマザリル試験法について
食安発第0124001号通知法に準拠した
残留農薬としてのイマザリルの分析法
をご紹介します。
標準液の測定例
IMZ : 5.0mg/L
HPLC条件
2.0
ＩＭＺ
1.0
0.0
: Inertsil ODS-3
(5μm, 250 x 4.6 mm I.D.)
溶離液
: A) CH3CN
B) 10 mM KH2PO4
A/B = 70/30, v/v
（gradient mixer）
流量
: 0.7 mL/min
カラム温度 : 40 ℃
検出
: UV 230 nm
注入量
: 10 μL
mAU
カラム
0
2
4
6
Time (min)
8
10
12
使用装置
1
カラム
4
Inertsil ODS-3 250mm×4.6mm 5μm
Cat.No. 5020-01732
2
HPLC装置：GL-7400 シリーズ
番号
品名
1
カラムオーブン
2
UV検出器
3
蛍光検出器
4
キャリアリザーバー
5
オートサンプラー
6
ポンプ
型番
GL-7430
GL-7450
GL-7453
GL-7480
GL-7420
GL-7410
5
3
6
ジーエルサイエンスでは、分析ノウハウときめこまやかなフォローもお付けしたシステム提案を行っております。
お近くの営業所やカスタマーサポートセンターまでお気軽にお問い合わせください。
※尚、各試験法は、変更される場合がありますので、分析の前にご確認されることをお薦めします。
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