県内で初確認された B 群及び C 群ロタウイルスによる牛ロタウイルス病 中央家畜保健衛生所 村山和範 会田恒彦 田中健 介 福留 静 樋口良平 中田 はじめに ロタウイルスは、レオウイルス科ロタウイ ルス属に分類され、主に幼若なヒトや動物で 篠川有理 稔 食欲低下が認められた。その後、数頭ずつ徐 々に下痢を発症し、約2週間でほぼ全頭に下痢 が認められた。 下痢を起こす代表的なウイルスである。ロタ 材料及び方法 ウイルスはウイルス粒子を構成する内殻タン パク質であるVP6の群抗原性によりA群からG群 ウイルス学的検査は、材料として糞便3戸20 の7群に分類されており、ウシではA群、B群及 頭分を用いた。下痢症関連ウイルス特異遺伝 び C群 ロ タ ウ イ ル ス （ GAR、 GBR、 GCR） が 検 出 子 検 出 は 、 E-MEM（ 日 水 製 薬 ， 日 本 ） で 10%糞 さ れ て い る (1)。 GARは 子 牛 の 下 痢 の 原 因 ウ イ 便乳剤を作製し、その遠心上清からHigh Pure ルスとして重要なことが知られていたが、近 Viral RNA kit（ロ シ ュ ， 日本 ） を 用 いて ウ 年 、 GBR及 び GCRが 搾 乳 牛 の 伝 染 性 下 痢 の 原 因 イルス核酸を抽出し、PrimeScript One Step ウイルスとなることが報告され、国内でも数 RT-PCR kit ver.2（タカラ，日本）を用いてR 例の発生が報告されている[1,2,5,6]。 T -PCR法 に よ り 牛 コ ロ ナ ウ イ ル ス （ BCV ）、 牛 今 回 、 平 成 23年 か ら 平 成 24年 に か け て 県 内 ト ロ ウ イル ス （ BoTV ）、 GAR、 GBR、 GCR及び 牛 の酪農場3戸で発生した伝染性下痢について病 ウ イ ル ス 性 下 痢 ウ イ ル ス （ BVDV） に つ い て 行 性鑑定を行った結果、県内で初めてGBR及びGC った[4,9]。ロタウイルス特異遺伝子が検出さ Rによる牛ロタウイルス病と診断されたことか れた材料については、ロタウイルスの群抗原 ら、その概要について報告する。 性 に 関 わ る VP6及 び 中 和 抗 原 性 に 関 わ る VP7の 遺伝子解析を動物衛生研究所に依頼して行っ 発生概要 た。ウイルス分離は、ロタウイルスを標的と 中央家畜保健衛生所（家保）管内の農場1で してMA104細胞を、その他ウイルスを標的とし は 、 平 成 23年 12月 17日 に 下 痢 が 認 め ら れ 、 数 てMDBK-SY細胞及びHRT-18/Aichi細胞を用いて 日の経過で搾乳牛に下痢がまん延した。群全 行った[3,7]。 体の発症率は68％（50/73頭）であった。便性 ウイルス抗体検査は、ペア血清3戸20頭分を 状は泥状下痢が主体で、水様性下痢を示す個 用 い て 行 っ た 。 GAR及 び GCRは 間 接 蛍 光 抗 体 法 体はごく一部であった。また、発症個体には （ 島 根 株 及 び 新 得 株 ）、 BVDV1型 、 BVDV2型 及 食欲低下が認められた。 びBoTVは中和試験（Nose株、KZ-91-cp株及びA 上越家保管内の農場2では、平成24年5月9日 ichi/2004株 ）、 BCVは HI試 験 （ 掛 川 株 ） に よ に搾乳牛、育成牛及び子牛で軟便から水様性 り行った。また、GBRは動物衛生研究所に依頼 下 痢 を 呈 す る 個 体 が 認 め ら れ 、 14日 ま で に 牛 してELISA法により行った[8]。 群内で急速に下痢がまん延した。下痢は約2週 細 菌 学 的 検 査 は 、 羊 血 液 寒 天 培 地 、 MLCB培 間 で 回 復 し 、 発 症 率 は 約 70％ （ 54頭 飼 養 ） で 地及びDHL培地を用いて37℃24時間、好気培養 あ っ た 。 発 症 個 体 で は 、 食 欲 低 下 や 39℃ 前 後 を行った。寄生虫卵検査は、ショ糖遠心浮遊 の発熱を伴うもの認められた。 法により行った。 中央家保管内の農場3では、平成24年10月30 新潟県内の伝染性下痢症の発生状況調査と 日に搾乳牛、育成牛及び子牛で水様性下痢と し て 、 BoTV、GBR及 び GCRの 検 査 を 開 始 し た 平 成19年4月から平成24年12月までの期間を対象 に、搾乳牛で発生した下痢症のうち病性鑑定 課で実施した検査成績について、検出された 病原体別に集計を行った。 表1 農場 No. 1 検査成績 (1)ウイルス抗原検索 農場1でGCR特異遺伝子が6頭中5頭、農場2と 2 農場3でGBR特異遺伝子が7頭中6頭または7頭中 5頭 で 検 出 さ れ た （ 表 1 ）。 そ の 他 下 痢 症 関 連 ウイルスの特異遺伝子は検出されなかった。 また、ウイルス分離は検査を行ったすべての 3 検体で陰性であった。 (2)ウイルス抗体検査 GCR特 異 遺 伝 子 が 検 出 さ れ た 農 場 1で は 、 発 症時点で既に6頭中5頭がGCR抗体を保有してい 個体 No. 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4 5 6 7 た 。 ま た 、 2週 間 後 に 採 材 し た 後 血 清 で は 6頭 ウイルス抗原検索成績 GAR GBR GCR － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ － － － － － － － － － － － － － － BCV BoTV BVDV － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － － NT － NT － NT － NT － NT － NT － NT － NT － NT － NT － NT － NT － NT － NT NT：検査未実施 全頭でGCR抗体の有意な上昇が認められた。GB R 特 異 遺 伝 子 が 検 出 さ れ た 農 場 2 及 び 農 場 3で 表2 は 、 14頭 中 7頭 が 発 症 時 点 で GBR抗 体 を 保 有 し ていた。また、後血清では9頭中6頭でELISA抗 体の陽転もしくはELISA値の上昇が認められた （ 表 2 ）。 な お 、 そ の 他 の 下 痢 症 関 連 ウ イ ル ス 抗体については、抗体価の有意な上昇は認め られなかった。 (3)遺伝子解析 農 場 1で 検 出 さ れ た GCRの 塩 基 配 列 を 元 に し た相同性解析の結果、今回検出されたGCRは、 過去の牛由来国内株である新得株、山形株、 富 山株 と比 較し て VP6で 95%以 上 、 VP7で 93%以 上の高い一致率を示した。また、分子系統樹 解 析か らVP6は I3型 、 VP7は G3型 の 遺 伝 子 型 に 分類され、いずれも過去の牛由来国内株と同 一の遺伝子型に分類された（図1 ）。 農場2および農場3で検出されたGBRについて ウイルス抗体検査成績 農場 No. 1 個体 GBR（ELISA） GCR（IFA） No. Pre Post Pre Post 1 NT NT <20 1280 2 NT NT 80 ≧2560 3 NT NT 20 320 4 NT NT 40 1280 5 NT NT 40 320 6 NT NT 80 640 2 1 0.002 0.613 NT NT 2 0.006 0.601 NT NT 3 0.006 0.784 NT NT 4 0.549 0.136 NT NT 5 0.566 ・ NT NT 6 0.819 0.580 NT NT 7 0.003 ・ NT NT 3 1 0.768 0.642 NT NT 2 0.157 0.753 NT NT 3 0.036 0.000 NT NT 4 0.829 NT NT NT 5 0.799 NT NT NT 6 NT NT NT NT 7 0.341 0.693 NT NT ・：検体なし NT：検査未実施 GBR-ELISA：0.2以上を陽性 は、相同性解析の結果、今回検出されたGBRは 農場2と農場3の塩基配列が一致せず 、VP6で91. 5%、 VP7で 93.4%で あ っ た 。 一 方 、 過 去 の 牛 由 来国内株である根室株との比較では、2株とも VP6で 93%以 上 、 VP7で 94%以 上 の高 い 一 致率 を 示した 。また 、分子系統樹解析からVP6はI2型 、 VP7はG3型の遺伝子型に分類され、牛由来国内 株と同一の遺伝子型に分類された（図2 ）。 (4)細菌学的検査及び寄生虫卵検査 細菌学的検査では、検査を行った全ての検 体でサルモネラ等の有意菌は分離されなかっ た。また、寄生虫卵検査でも、検査を行った 全ての検体で虫卵は認められなかった。 100 99 100 100 I2 Human GCRs 100 93 Porcine GCR_Cowden Bovine GCR_Niigata1 Bovine GCR_Shintoku 100 Human GBRs I3 BovineGCR_Toyama 79 I1 Rat GBR_IDIR Bovine GCR_Yamagata 0.02 0.05 GCR VP6系統樹 GBR VP6 系統樹 94 100 Human GCRs 84 G11-16, G18-20 Porcine GBRs G4 100 Porcine GCR_134/04-18 Porcine GCR_Cowden Porcine GCR_34/04-2 Porcine GCR_HF Bovine GCR_Toyama 100 Bovine GCR_Shintoku 94 100 100 98 100 G2 100 Bovine GCR_Niigata1 0.05 GCR VP7系統樹 100 0.1 図1 平成19年4月から平成24年12月末までに実施 し た 伝 染 性 下 痢 の 病 性 鑑 定 事 例 は 35例 あ り 、 今回GBR及びGCRが検出された3例が伝染性下痢 症 全 体 に 占 め る 割 合 は 8.7%で あ っ た 。 ま た 、 最 も 検 出 頻 度 が 高 い も の は BCVで 22例 （ 62.2 % ）、次いでBoTVで5例（14.3%）であった。 Porcine GBRs Bovine GBR_DB180 Bovine GBR_DB101 Bovine GBR_DB176 Bovine GBR_WD653 Bovine GBR_Niigata3 100 Bovine GBR_Nemuro Bovine GBR Cow-wt/MN10-1/2010/G3PX Bovine GBR_Niigata2 Bovine GBR_Mebus Bovine GBR_ATI Human group B rotavirus G8 G5 G3 G2 GBR VP7 系統樹 図2 GCR分子系統樹 (5)搾乳牛における伝染性下痢症の発生状況 G4,6,7,9 Porcine GBRs G5 G1 G6 G3 Bovine GCR_Yamagata 77 I2 Bovine GBR_Niigata3 Bovine GBR_Niigata2 Bovine GBR_Nemuro I1 Bovine GCR_WD534tc 100 Bovine GBR_RUBV282 Bovine GBR_RUBV226 Bovine GBR_DB176 GBR分子系統樹 点で既に抗体を保有する個体が認められた。 こ の こ と か ら 、 GBR及 び GCRは 今 回 の 発 生 以 前 に当該農場に浸潤していたと考えられた。 遺伝子解析の結果、農場2と農場3のGBRは塩 基配列が一致しなかった。今回GBRによる牛ロ タウイルス病が発生した2農場については発生 時期が異なることや、地理的に遠く疫学関連 がないこと等から、それぞれ異なる伝播経路 まとめ及び考察 今回、搾乳牛の伝染性下痢症の病性鑑定を 行 っ た 結 果 、 GBR及 び GCRに よ る 搾 乳 牛 の 牛 ロ タウイルス病が県内で初めて確認された。病 性 鑑 定 成 績 か ら 、 今 回 の 3事 例 は い ず れ も GBR もしくはGCR単独による下痢症と判断された。 平 成 25年 1月 末 時 点 で 、 3農 場 と も 牛 ロ タ ウ イ ルス病の再発生は認められていない 。しかし 、 GBRについては同一株により数年おきに流行を 繰り返した事例が報告されていることから [2]、発生農場では今後も注意が必要と考えら れた。 抗 体 検 査 の 結 果 、 GBRお よ び GCRと も 発 症 時 によりウイルスが農場に侵入したと考えられ た。 GBRお よ び GCRに よ る 下 痢 症 で は 、 搾 乳 牛 が 主に発症し、育成牛や子牛などの若い個体で 発症が認められなかった事例が報告されてい る [1,8]。 今 回 の 事 例 で は GCRが 検 出 さ れ た 農 場1の子牛で発症が認められなかったものの、 GBRが検出された農場2および3では子牛と育成 牛でも発症が認められた。便性状は、全ての 事例で泥状から水様性下痢と様々であった。G BR及びGCRによる下痢症で血便を認めた報告は なく、本県の事例においても血便は認められ な か っ た 。 乳 量 低 下 は 、 全 体 で 10～ 20％ 低 下 したとする報告が多く[1,4,7,8]、今回の事例 で も 10～ 15％ の 低 下 が 認 め ら れ た 。 ま た 、 農 衛生研究所ウイルス・疫学研究領域の鈴木亨 場2では発症直後から最大40％乳量が低下した 主任研究員を始め、研究室の皆様に深謝致し 個体も認められた。 ます。 一方、これまでの国内発生例では報告の無 い症状として、農場2で複数の発症個体に39℃ 参考文献 前後の発熱が認められた。今回の事例では発 (1) 熱の有無と食欲低下や乳量低下の有無に関連 研究会編，第1刷，150-154，緑書房，東京(20 性は見出されなかったが、ヒトのロタウイル 09) ス感染症では、一般に発熱と下痢が伴って認 (2) められることから(2)、今回認められた発熱は 9版，427-434，医学書院，東京(2006) GBRが関与している可能性が示唆された。 [1] 鑑別診断が必要となるBCVと比較した場合、 恒光裕：子牛の科学，日本家畜臨床感染 中込治：標準微生物学，平松啓一編，第 葛城粛仁，恒光裕：日獣会誌，59，254- 258(2009) 血便や呼吸器症状がないなど症状は軽度な傾 [2] 向がみられた。しかし、BCVでも症状の程度は 畜保健衛生業績発表会集録，27-31(2005) 様々であることから、臨床症状のみでは他の [3] ウイルス性下痢症との鑑別は困難と考えられ 57(3), 423-431(2012) た 。 平 成 19年 以 降 に 行 っ た 搾 乳 牛 の 伝 染 性 下 [4] 痢症の病性鑑定35例のうち、8.8%からGBRもし 157(6), 1063-1069(2012) く は GCRが 検 出 さ れ 、 BCV以 外 の 下 痢 症 関 連 ウ [5] イルスは全体の約1/4例で検出されている。搾 332(2001) 乳牛の下痢症は乳量低下を伴う場合が多く、 [6] 経済的被害も大きいことから、伝染性下痢の Sci, 66(7), 887-890(2004) 原 因 ウ イ ル ス と し て GBR及 び GCRの 監 視 を 今 後 [7] も継続し、病態をより明らかにしていく必要 iol, 29, 2609-2613(1991) があると考えられた。 [8] 林みち子，長井誠：平成17年度石川県家 Aita T, Tsunemitsu H：Arch Virol, 1 Fukuda M, Tsunemitsu H：Arch Virol, Hayashi M, Nagai M：Vet Rec, 15, 31Mawatari T, Tsunemitsu H：J Vet Med Tsunemitsu H, Saif LJ：J Clin Microb Tsunemitsu H, Kamiyama M：J Gen Viro l, 86, 2569-2575(2005) 謝 辞 各種検査を行って頂いた独立行政法人動物 [9] 994) Vilcek S：Arch Virol, 136, 309-323(1
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