Vettore di espressione per cellule di mammifero Inizio trascrizione resistenza alla Ampicillina per selezione nel batterio resistenza al G418 (Neo) per selezione nelle cellule animali termine trascrizione Vettore = 5700 bp. cDNA = 2850 bp OK ! 500 bp 8050 bp Taglio con B 2350 bp B E Sbagliato ! B 500 bp E 2350 bp 2850 bp (taglio con E) E = EcoRI B = BamHI 6200 bp 5700 bp RILASSATO SUPERCOILED Plasmidi con l’inserto di cDNA Contaminazione da DNA genomico ELETTROFORESI Vettore + inserto, linearizzato Forma rilassata Forma supercoiled Vettore linearizzato Inserto di cDNA Aequorea victoria GFP Green Fluoresvent Protein Martin Chalfie, Osamu Shimomura, and Roger Y. Tsien Were awarded the 2008 Nobel Prize in Chemistry Enhanced GFP Vettore di espressione per cellule di mammifero Inizio trascrizione resistenza alla Ampicillina per selezione nel batterio resistenza al G418 (Neo) per selezione nelle cellule animali termine trascrizione Jurkat ANIMALI TRANSGENICI per EGFP Fig 2 RECETTORI EFRINICI: è la più numerosa famiglia di RTK (Receptor Tyrosine Kinases), composta da 16 membri. RECETTORI NON SOLUBILI: Proteine di membrana di un’altra cellula RECETTORI EFRINICI: è la più numerosa famiglia di RTK ( 16 membri) Proteina normale Dominanti negativi Capaci di legare la efrina Ma inattivi come kinasi deltaCyto DN KD RECETTORI EFRINICI La loro over‐espressione o iper‐fosforilazione (pTyr) è associata al fenotipo tumorale. STUDIO DEGLI EFFETTI FENOTIPICI CAUSATI DALLA OVER‐ESPRESSIONE DEL RECETTORE Eph o dalla espressione di recettori KINASE‐DEAD IN CELLULE IN COLTURA C CCC Fig 3 CAPACITA’ INVASIVA Wound‐healing CCC CCC CCC
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