INFORMAZIONI SUL PRODOTTO Cellule endoteliali di vena ombelicale umana (HUVEC) al passaggio iniziale, da pool di donatori Codice prodotto: ZHC-2301 (crioconservate) Presentazione Ogni flaconcino di HUVEC al passaggio iniziale crioconservate contiene un minimo di 500 000 cellule da donatori multipli, garantite vitali al 70% dopo lo scongelamento. Le cellule vengono congelate dopo coltura secondaria in un terreno contenente crioprotettivo. Terreni e integratori raccomandati Confezione con terreno di crescita per cellule endoteliali di grandi vasi umani: ZHM-2953 Contiene: terreno base per cellule endoteliali di grandi vasi umani, 500 ml Integratore di crescita per cellule endoteliali di grandi vasi umani, 10 ml Integratore antibiotato (amfotericina B/gentamicina) concentrazione 1000x, 0,5 ml Densità di semina raccomandata 2500 cellule vitali per cm2 Capacità di proliferazione Le cellule umane normali hanno durata in vitro limitata. Quando le cellule sono coltivate usando i nostri reagenti e procedimenti raccomandati, Cellworks garantisce 10 raddoppi di popolazione. Conservazione e mantenimento delle cellule Le cellule crioconservate vengono spedite congelate su ghiaccio secco, e se la semina non avviene immediatamente, vanno trasferite nella fase gassosa di un serbatoio di stoccaggio azoto liquido. N.B. Lo stoccaggio continuo su ghiaccio secco oppure a -80 °C NON è appropriato. Per linee guida rapide sulla coltura delle cellule prodotte da Cellworks, vedere a tergo. Cellworks, una divisione di Caltag Medsystems ● Whiteleaf Business Centre ● 11 Little Balmer ● Buckingham ● MK18 1TF ● Regno Unito Tel +44 (0)1280 827460 Fax +44 (0)1280 827466 e-mail [email protected] Sito Web www.cellworks.co.uk Partita IVA: GB 765 6661 89 Numero registrato nel Regno Unito: 4162330 Sede legale: Whiteleaf Business Centre, 11 Little Balmer, Buckingham, MK18 1TF. ZHC-2301 v1 May14 Linee guida rapide per la coltura delle cellule prodotte da Cellworks Avvio delle colture proliferanti da cellule crioconservate 1. Preparare il terreno nel numero richiesto di matracci per coltura, e pre-equilibrare a 37 °C in incubatrice umidificata con CO2 al 5%. N.B. Si raccomanda l’uso di 15 ml di terreno nei matracci T75, e 6 ml di terreno nei matracci T25. 2. Preparare un bagnomaria a 37 °C. 3. Rimuovere il flaconcino contenente le cellule dall’azoto liquido e mettere in ghiaccio secco (oppure in un vaso dewar con azoto liquido). Allentare leggermente il tappo per rilasciare la pressione e stringere di nuovo. 4. Tenere la metà inferiore del flaconcino criogenico in bagnomaria a 37 °C, verificando che il tappo non sia sommerso. Agitare delicatamente per 1-2 minuti finché non resta solo un piccolo pezzo di ghiaccio. 5. Pulire immediatamente il flaconcino e il tappo con etanolo, e mettere sotto la cappa. 6. Pipettare immediatamente le cellule di ogni matraccio per coltura formando un arco sulla superficie del terreno, e mescolare delicatamente quest’ultimo in modo da disperdere le cellule e ottenere una crescita uniforme. 7. Esaminare le cellule al microscopio prima del trasferimento nell’incubatrice a CO2. Lasciare che le cellule attecchiscano nottetempo senza disturbare il processo. 8. Dopo un massimo di 24 ore, esaminare le colture al microscopio per verificare che la semina sia riuscita, e sostituire il vecchio terreno con terreno fresco pre-equilibrato usando 6 ml per T25 oppure 15 ml per T75. Fare attenzione a colare il terreno su una superficie acellulare del matraccio, e mai sopra lo strato cellulare, poiché questo può causare il distacco delle cellule. 9. Rimettere le cellule nell’incubatrice, e rialimentare con terreni di crescita freschi ogni 48 ore. 10. Mettere in sottocoltura quando le cellule raggiungono una confluenza del 60-80%, mentre stanno ancora dividendosi attivamente. Attenzione Solo per uso sperimentale, non per uso terapeutico o diagnostico. Trattare tutte le cellule umane come potenzialmente a rischio biologico e smaltire nel modo appropriato. Cellworks, una divisione di Caltag Medsystems ● Whiteleaf Business Centre ● 11 Little Balmer ● Buckingham ● MK18 1TF ● Regno Unito Tel +44 (0)1280 827460 Fax +44 (0)1280 827466 e-mail [email protected] Sito Web www.cellworks.co.uk Partita IVA: GB 765 6661 89 Numero registrato nel Regno Unito: 4162330 Sede legale: Whiteleaf Business Centre, 11 Little Balmer, Buckingham, MK18 1TF. ZHC-2301 v1 May14
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