iGEM Chiba 2009 E. Coli Time Manager Since 2008 ‘０９CHIBAは流れと精確性のある 時間差スイッチをつくる！ ’08Chiba 他チーム周期時計 ・別々の入力であるため、 同一系内での時間の流れ を表現することができない。 ・１通りの時間差しか生み出 せていない。 ・周期を系全体であわせるため、シンク ロシステムを考える必要がある。 ・Paris/NYMU/Melbourne どのiGEM チームもデバイスができていない。 シンクロシステムが必要ない’08Chibaタイマーの 計れる時間の種類・正確性を増すことができれば、 周期時計を使わなくとも時間の流れを表現できる！ 時限装置の集合で流れを作る 並列型 直列型 並列・直列の精確性面の特徴 並列型 ・順番を追い越す。 ・入力が全てのスイッチに入らな ければ、全てのスイッチが動くと いうことはない。 ・初めの入力で全てのスイッチを 起動することができれば、出力の 時間間隔は一定の時間を保つ事 ができる。 ・逆に初めの入力で全てのスイッ チを起動できなかった場合、出力 の時間感覚は一定の値を保つこ とができない。 直列型 ・順番を追い越さない ・１部分に入力が入ることで全て のスイッチが連動する。 ・全てのスイッチを初めに起動さ せる必要がないので、出力の時 間間隔が、最初の入力によって 左右されることがない。 並列型 ：LuxR Mutant Σ①！ ◎→ pLac-LuxI pTet-LuxR pLux-GFP Σ②！ pTet-LuxR pLux-GFP ◎→ Σ①！ ◎→ Σ②！ 並列型：Mutant parts 作成 ◎→ Σ①！ ◎→ Σ②！ ↑ Wild type よりも30分以上蛍光強度上昇の様子が早まった or遅れたモノだけ PCRでbiobrick仕様の制限酵素サイトを つけ、p15Aのプラスミドにのせる。 P15A LuxR mutant ◎→Σ①！→Σ②！ 直列型： ◎→ pLac-LuxI Lux-Lasカスケード Σ①！→ pTet-LuxR pLux-LasI-RFP Σ②！ pTet-LasR pLas-GFP ◎→Σ①！→Σ ②！ 直列型：Las Check ↑ 昨年度動作を確認していないLasのCheckをします。 K091118 : 千葉にあります Plac LasI K091118 : 注文中です LasR plas GFP ◎→Σ①！→Σ②！ 直列型： パーツ作成実験 ◎ : LuxI(Sender) plac BBa_K084012 を使用。 LuxI ① : LuxR(Receiver ) + Reporter + LasI(Sender) ptet LuxR plux 作成が 必要。 GFP LasI ②: LasR(Receiver) + Reporter ptet LasR plas GFP LasI 作成が 必要。 ◎→Σ①！→ Σ②！ パーツ① LuxR-pLux-RFP-LasI 直列型： ↑ 初号機 : LuxR(Receiver ) + Reporter + LasI(Sender) ptet LuxR plux RFP LasI I731012 : 注文中です ptet LuxR C0178 plux RFP LasI 1, T9002からPCRでターミネーターを取り除く。（Reverseプライマーデザイン必要） 2, C00178を作成して完成 パーツ② LasR-pLas-GFP 直列型： 弐号機 : LasR(Receiver) + Reporter ptet R0040 pTet LasR plas GFP K091118 : 注文中です LasR 1, R0040をつなげる。 plas GFP ◎→Σ①！→Σ②！ ↑ ほしいデータ デモンストレーション • 野澤＆山本がホワイトボードで説明します。 優先順位 1, LuxR Mutant 選別/データーとり 1, LasI-LasR稼働実験 3, MutantのBiobrick化/データとり 4, デモンストレーション用データとり 4, 直列型作成 各種〆切日 09/18 ・Jamboree attendance fee due ・Request for variance due ・Track selection due ・Project abstracts due ・Team rosters due 10/21 ・Project and part documentation due ・BioBrick Part DNA needs to be received ・Judging form due ・Wiki FREEZE 具体的なスケジュール 画面切り替えます
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