ホットスタート Taq の PCR ミックス Good Taq HS Master Mix Cat No. CR-17-02, CR-17-10 【使用方法】 【目的・用途】 Good Taq HS Master Mix は、2x 濃度に調製された Ready-to-Use の PCR ミッ クスです。本試薬は PCR に必要な成分のうちプライマーとテンプレート以外 ● 一般的な反応液組成（50μL 反応系の場合） （Good Taq Polymerase、バッファー、Mg2+、dNTPs）を含んでいるため、 試薬 セットアップが簡便に行うことができます。 バッファーは、特異性が向上するように最適化しているため、特に GC リッ 2x Master Mix チな標的配列や、低コピー配列、複雑な二次構造を持つゲノム DNA の増幅 Forward Primer, 10μM 等にも効力を発揮します。 Reverce Primer, 10μM 容量 《Good Taq HS とは･･･》 Good Taq HS は、室温ではポリメラーゼ活性を持たないよう改変を加えた Taq Polymerase です。この特性により、非特異的なミスプライミングやプ ライマーダイマーの発生を防ぐことが可能です。本酵素は 5ʼ→3ʼ DNA ポリ メラーゼ活性と、5ʼ→3ʼエキソヌクレアーゼ活性を持ちます。PCR 産物の 3ʼ 末端側には A（アデニン）が付加されるため、そのまま TA クローニングが 可能です。 1x 2μL 0.4μM 2μL Template DNA < 1μg PCR グレード水 終濃度 25μL 0.4μM < 1μg/50μL Up to 50μL 《Note》 1) プライマーの終濃度はそれぞれ 0.1〜1.0μM ずつ程度をお勧めします。 プライマー濃度を上げると増幅効率が上昇し、プライマー濃度を下げ るとバックグラウンドの低い PCR 産物を得る事ができます。 2) Mg2+の終濃度 1.5〜3mM をお勧めします。 ● 一般的な PCR 反応条件 【特徴】 1）プライマー・テンプレート・水を加えるだけの簡単セットアップ 温度 時間 サイクル数 熱変性 95℃ 10 min 1x 3）GC リッチ配列、低コピー配列の増幅にも最適 熱変性 95℃ 30 sec 4）特異性の高い増幅が可能 アニーリング 2）室温では活性を持たないよう改変したホットスタート Taq Polymerase 【キット内容】 30 sec 72℃ 60 sec 伸⻑反応 72℃ 5 min CR-17-02 CR-17-10 2x Master Mix 1mL×2 本 1mL×10 本 PCRグレード水 1mL×2 本 1mL×10 本 【使用期限】 ・−20℃保存にて１年間（1 週間程度なら 2-8℃保存可能） ※ 凍結融解を繰り返さないようにしてください。 【本品以外に準備が必要な試薬】 • プライマー（Forward, Reverse） 鋳型 DNA 1x 1) アニーリング温度は、プライマーの Tm 値−5℃ に設定します。エキ ストラバンドが多く見られた場合はアニーリング温度を上げてくださ い。また、PCR 産物の収量が低い場合はアニーリング温度を下げてく ださい。 2) 伸⻑反応の時間は増幅する断⽚の⻑さによって変わります。 Good Taq HS の伸⻑速度は 1kb/min です。 • 30〜40 x 《Note》 Good Taq HS Master Mix 内容 55〜65℃ 伸⻑反応
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