Double-Dye プローブカスタム合成受託サービスリアルタイム定量 PCR に最適!! は FRET（蛍光エネルギートランスファー）で受け取ったエ EclipseTM Dark Quencher による修飾や、配列中にRNA ネルギーを熱として放出するため、バックグラウンドが低減を挿入したキメラ Double-Dyeプローブの合成など、各します。また、長波長側の広いスペクトル（400∼650 nm）種修飾に対応!! の蛍光を効率よくクエンチングできるので、さまざまな蛍光色素（FAM、TET、TAMRA、ROX など）と組み合わせるリアルタイム PCR による発現量解析やジェノタイピングに、ことができ、複数の標的配列を同時に検出するプローブ系 Double-Dyeプローブを用いる方法が急速に普及しています。を組み立てることができます。それをサポートするために、タカラバイオでは Double-Dye 他の Dark Quencher である DABCYL に比べても有利です。プローブのカスタム合成サービスを承っております（表1）。注）Eclipse は Epoch Biosciences社の登録商標です。 ■ EclipseTM Dark Quencher ■サイクリングプローブ法リアルタイム PCR では、蛍光色素（F）とクエンチャー（Q）キメラ Double-Dye プローブと RNase H の組み合わせにで両末端を標識した Double-Dyeプローブがよく用いられよる高感度検出法であり、リアルタイム PCR による発現量ます。F と Q が近い距離にある場合には F の蛍光は Q に解析や SNPs タイピングなどの一塩基置換の検出に最適なよって消光され、F と Q の位置が離れると Q の影響が解除方法です（BIO VIEW 42 号 1∼10 ページ、本号 24 ページされ、F が蛍光を発します。プローブが標的配列とハイブ参照）。リッドを形成すると、F と Q の位置が離れ、F が蛍光を発すこの方法では、配列中に RNA 部分をもつキメラプローブるように工夫されたシステムがいくつか開発されています。（サイクリングプローブ）を使用します。増幅産物中の相補一般的な Double-Dyeプローブでは、5′ 端にレポーター色鎖とハイブリッドを形成すると、RNase H によりRNA 部分素（FAM など）、3′ 端にクエンチャーとして通常 TAMRA なが切断されて、強い蛍光を発するようになります。プローブどの蛍光色素が用いられます。両者が近い距離にある場合中の RNA 部分がミスマッチであれば RNase H により切断は、FAM の蛍光が TAMRA に吸収され、TAMRA が蛍光をされることはないので、 1 塩基の違いも認識・検出できます。発するとともに FAM は消光します。そのため、TAMRA のタカラバイオでは、サイクリングプローブのカスタム合成蛍光がバックグラウンドとして現れます。サービスのほかにも、プライマー、サイクリングプローブの TM 設計および反応条件の至適化、定量解析などのリアルタイム TM PCR 受託サービスも行っております。この問題を解決するために、クエンチャーとして Eclipse Dark Quencher を用いることを推奨しています。Eclipse 表1 Double-Dye プローブカスタム合成受託サービス＊種類長さ保証量 5′ 修飾 3′ 修飾価格納期キメラプローブ 11-25 mer 1 OD FAM TAMRA ¥30,000 2 ∼ 3 週間キメラプローブ 11-25 mer 1 OD FAM EclipseTM ¥50,000 2 ∼ 3 週間 TM 2 ∼ 3 週間キメラプローブ 11-25 mer 0.5 OD FAM Eclipse ¥30,000 DNA プローブ 15-35 mer 1 OD FAM TAMRA ¥25,000 ＋塩基数× ¥180 2 週間 ¥45,000 ＋塩基数× ¥180 2 週間 DNA プローブ 15-35 mer 1 OD FAM Eclipse ＊：その他の修飾については、弊社カスタムサービスセンターにお問い合わせください。 40 ● BIO VIEW No.45 TM