Imagination at work illustraシリーズに新しい仲間登場 1細胞の全ゲノムDNAをわずか3時間＊1で増幅！ Single Cell GenomiPhi DNA増幅試薬 ● Phi29 DNA ポリメラーゼを利用し、1 ∼ 1,000 細胞のゲノム DNA 増幅に至適化 ● 1 fg の DNA からも増幅可能 ● 増幅 DNA の収量は 4 ∼ 5 µg ＊ 2 ＊1 バクテリアの場合はプロトコールおよび反応時間が異なります＊2 5個のJurkat 細胞を用いて増幅反応を行った場合の収量です ※ 増幅産物は、 PCR、STR解析、CGH（Comparative genomic hybridization）解析、次世代シークエンシングなど、さまざまなアプリケーションで使用可能 Whole exome sequencing Whole exome sequencing The percentage of sequencing data matching the human The percentage of sequencing dataamplified matchingusing the human genome from human cell samples Single genome from human cell samples amplified using Cell GenomiPhi DNA Amplification Kit is equivalent Single to the Cell GenomiPhi DNA Amplification Kit is equivalent to the percentage produced from unamplified gDNA control percentage produced from unamplified gDNA control samples (Fig 9). This indicates that no contaminants are samples (Figand 9). This indicates thatthe noworkflow. contaminants are introduced amplified during introduced and amplified during the workflow. を増幅微量のサンプルから、速くかつ均一にゲノムDNA 12000 ヒト培養細胞（5個） Cells ヒト培養細胞（5個） Cells 10000 Cells ヒト培養細胞（5個）精製済みヒトgDNA（30 pg） 30 pg 8000 RFU Percent of data matching thethe whole genome Percent of data matching whole genome Real-time amplification kinetics of human cell samples 14000 30 pg 精製済みヒトgDNA（30 pg） 6000 No NTCTemplate Control （DNAを添加しないコントロール） 4000 2000 0 0 50 100 150 Time (min) 200 250 5個のヒト培養細胞の増幅カイネティクス本キットを用いて、ヒト培養細胞 5 個、精製済みヒトgDNA 30 pg（細胞約 5 個に相当）、DNAを添加しないコントロールのDNA 増幅反応を行いました。サンプルにSYBR Green Iを添加し蛍光プレートリーダーで増幅の過程を、継時的にモニターしました。ヒト培養細胞 5 個と精製済みヒトgDNA 30 pgの増幅カイネティクスは、非常に類似していることがわかります。本キットでは、至適化された細胞溶解条件を採用しているので、細胞の完全な溶解と、gDNAの均一な変性が促進され精製済みgDNAを出発材料とした場合と同様の結果を得ることができます。 www.gelifesciences.co.jp Percent of data matching the whole genome Percent of data matching the whole genome Concl Conclu Single C Single Cell GenomiPhi Single Cell (replicate 1) GenomiPhi (replicate 1) Single Cell GenomiPhi Single Cell (replicate 2) GenomiPhi (replicate 2) Unamplified Unamplified control control Unamplified Unamplified (replicate control 1) (replicate control 2) (replicate 1) (replicate 2) percentage of on-target exome sequence coverage, as shown in Figure 10. shown in Figure 10. ＊ョンのclean-up stepを行うことをおすすめします。 3 必要に応じてオプシ取扱店 100 100 80 80 60 60 40 40 20 20 0 0 Fig 10. gD Fig gDN in a10. high p in a high p sequencin sequencin Fig 9. Greater than 98% of gDNA amplified from human cell samples using 増幅産物の全エクソームシークエンシング Fig 9. Greater than 98% of gDNA amplified human cell samples using Single Cell GenomiPhi DNA Amplification Kitfrom matches human genome. 本キットを用いてト培養細胞から増幅したと、精製済みヒトgDNA 5個のヒ gDNAthe Single GenomiPhi DNA Amplification Kit matches the human genome. This isCell equivalent to unamplified control samples. （非増幅コントロール）の全エクソームシークエンシングを行いヒトゲノムのタン This is equivalent to unamplified control samples. パク質コーディング領域を調べました。いずれも、ヒトゲノムの配列データと98%以上一致しています。本キットで増幅 Single Cell GenomiPhi amplified gDNA produces a high は、非増幅コントロールと同等の結果を示しており、した gDNA Single Cell GenomiPhi amplified gDNA produces a増幅の過程で high percentage of ョンが生じていない on-target exome ＊3 sequence coverage, as ことがわかります。 DNAコンタミネーシ RFU = Relative Fluorescence Units ※ この増幅反応では、4∼5 µgのgDNAが得られました。 100 100 80 80 60 60 40 40 20 20 0 0 % of bases withwith > 10× coverage %target of target bases > 10× coverage ● 3 時間＊ 1 で増幅が完了 Single Ce and rob and robu sensitive sensitive which is which is effective effective coverag coverag DNA wa DNA wa Generat Generat Order Order Product Product illustra Si illustra Sin 25 reac 25 reac illustra Si illustra Sin 100 rea 100 rea コンポーネント Colour of cap Code No. 25 reactions 100 reactions 29-1081-07 29-1080-39 1 × 100 µl 1 × 200 µl -20℃ -20℃ 保存温度 Lysis Buffer Black Neutralization Buffer White 1 × 100 µl 1 × 200 µl Blue 1 × 25 µl 1 × 100 µl -20℃ Green 1 × 275 µl 1 × 1.1 ml -20℃ Red 1 × 100 µl 1 × 100 µl -20℃ Yellow 1 × 25 µl 1 × 100 µl -70℃ Amplification Mix Reaction Buffer DTT Enzyme Mix ※ 保存温度：Enzyme Mixは-70℃で、他のコンポーネントは-20℃で保存してくださいプロトコールの流れ Cell sample in PBS Lysis Buffer Neutralization Bufferを添加を添加 Reaction Master Mixを添加 65°Cで 10分間増幅された全ゲノムDNA 30°Cで2時間インキュベート（バクテリアの場合は4時間）インキュベート ■ご注文情報製品名 Single Cell GenomiPhi 25rxn kit NEW Single Cell GenomiPhi 100rxn kit NEW 包装コード番号 25 反応 100 反応 29-1081-07 29-1080-39 価格（円） 59,600 214,400 ■関連製品製品名 illustra GenomiPhi V2 Kit, 100rxns illustra GenomiPhi V2 Kit, 500rxns illustra Ready-To-Go GenomiPhi V3 DNA Amplification Kit, 24rxns illustra GenomiPhi HY Kit, 100rxns illustra GenomiPhi HY Kit, 1000rxns illustra Ready-To-Go GenomiPhi HY DNA Amplification Kit, 24rxns 包装コード番号価格（円） 100 反応 500 反応 24 反応 100 反応 1,000 反応 24 反応 25-6600-31 25-6600-32 25-6601-24 25-6600-20 25-6600-25 25-6603-24 67,600 297,000 33,000 245,000 2,300,000 104,000 ゲノムDNA増幅についてのさらに詳しい情報はこちら ▲▲▲ www.gelifesciences.co.jp/genomic_amp www.gelifesciences.co.jp e-mail で最新情報をお届けしています。お申込みは上記 Web サイト右上の「メール会員登録」から掲載されている価格は 2015 年 3 月現在の希望小売価格です（表示価格には消費税は含まれておりません）。希望小売価格は単なる参考価格であり、弊社販売代理店が自主的に設定する販売価格を何ら拘束するものではありません。掲載されている製品は試験研究用以外には使用しないでください。掲載されている内容は予告なく変更される場合がありますのであらかじめご了承ください。掲載されている社名や製品名は、各社の商標または登録商標です。 8 71-3712-23