brochure & inscriptions (462 Ko) - Communauté d`Agglomération du

ETABLISSEMENT HOSPITALIER & UNIVERSITAIRE
1ER NOVEMBRE – ORAN
FACULTÉ DE MÉDECINE, UNIVERSITÉ D’ORAN
TECHNIQUES SPECIALES
EN ANATOMIE
PATHOLOGIQUE
DR M. HACHEM
TECHNIQUES SPÉCIALES
•
Microscopie électronique
•
Histoenzymologie
•
Immunohistochimie
•
Biologie moléculaire
•
Cytométrie en flux
•
Télépathologie
NOTIONS HISTOLOGIQUES
DES TUMEURS

Tumeur épithéliale maligne:

Tumeur conjonctive maligne:

Tumeur lymphoïde maligne:

Notion de différenciation tumorale
CARCINOME
SARCOME
LYMPHOME
IMMUNOHISTOCHIMIE ET
IMMUNOCYTOCHIMIE
Méthode de détection d’une protéine sur coupe
tissulaire (immunohistochimie) ou plus
rarement sur un étalement cytologique
(Immunocytochimie).
I- DÉFINITION
Révélation in situ, sur coupe histologique,
par réaction antigène-anticorps, la présence
de récepteurs antigéniques cellulaires
intranucléaires, membranaires
cytoplasmiques ou bien extracellulaires
(matrice)
II- LES ANTICORPS UTILISÉS
Définition de l’anticorps: immunoglobuline
produite par les cellules du système
immunitaire des mammifères en réponse à
l’introduction d’un élément étranger dans
l’organisme. Les anticorps se fixent
spécifiquement et avec une affinité variable sur
les motifs antigéniques.
II 1- ANTICORPS POLYCLONAUX (1)
S’obtiennent par immunisation d’un animal.
Avantages:

facilité de production

peu coûteux

Bonne avidité car plusieurs épitopes sont
reconnus
II 2- ANTICORPS MONOCLONAUX
S’obtiennent par culture cellulaire.
Avantages: plus spécifique (grande spécificité
d’épitope)
Inconvénient: manque d’avidité (ne reconnaît
qu’un épitope de l’antigène)
III- FIXATION DES PRÉLÈVEMENTS (1)

Formol +++

Congélation (mais mauvaise analyse
morphologique)

Bouin +/-
FIXATION DES PRÉLÈVEMENTS
(2)
Importance de la fixation ++ (source de faux
négatifs)

« Sur fixation »: masquage des antigènes

« Sous fixation »: diffusion des antigènes

Mauvais fixateur: Bouin
IMMUNOHISTOCHIMIE
•
Techniques
–
Materiel
•
–
Mode de visualisation
•
•
•
coupes en paraffine ou coupes en congélation
Immunofluorescence (UV)
Immunoenzymatique (peroxydase ou phosphatase
alcaline - lumière blanche)
Interpretation
–
–
batteries d’anticorps
témoins intrinsèques, réactivité croisée
IMMUNOHISTOCHIMIE
1 = Antigène
2 = Anticorps primaire
3 = Anticorps secondaire couplé au complexe avidinebiotine péroxydase
4 = Révélation par substrat de la peroxydase
V- INDICATIONS DE L’IH
A- CANCÉROLOGIE
1.
Diagnostic ++
2.
Recherche d’un cancer primitif
3.
Recherche de facteurs pronostiques
4.
Recherche de facteurs prédictifs de la
réponse au traitement.
INDICATIONS DE L’IH
1- DIAGNOSTIC

Aide au diagnostic ++, dans 5-10% des cas

Classification des cancers indifférenciés:
indication essentielle de l’IH

Diagnostic entre lésion bénigne et cancer:
rare
INDICATIONS DE L’IH
2- RECHERCHE PRIMITIF

Ganglion métastatique prévalent sans
primitif connu

Différentier une métastase d’un cancer
connu d’un cancer primitif (poumon ++), cas
clinique n°3
INDICATIONS DE L’IH
3- FACTEURS PRONOSTIQUES (1)

Anticorps dirigés contre des protéines
nucléaires exprimées lors de la prolifération
cellulaire: activité proliférative des tumeurs
(ex: Ki-67)
Molécules de résistance à la chimiothérapie
 Valeur pronostique démontrée de Cerb2
dans le cancer du sein

INDICATIONS DE L’IH
4- FACTEURS THÉRAPEUTIQUES (1)
Caractère hormono-sensible de certaines
tumeurs (cancer du sein ++)
Récepteurs oestrogène
INDICATIONS DE L’IH
4- FACTEURS THÉRAPEUTIQUES (2)

Lymphome: CD20

Tumeur stromale: CD117

Cancer du colon: REGF

Cancer ORL: REGF
V- INDICATIONS DE L’IH
B- AGENTS INFECTIEUX

Cytomégalovirus

Herpès virus

Papillomavirus

Virus d’Epstein Barr

Pneumocystis carinii

Toxoplasme

Leishmaniose

Autres
IMMUNOHISTOCHIMIE
•
Applications
–
pathologie hémolymphatique
–
–
–
pathologie tumorale
–
–
–
–
–
–
Dg lymphomes/ infiltrats lymphoïdes réactionnels
classification des lymphomes
identification des tumeurs malignes
indifférenciées
substance spécifique de certaines tumeurs
expression des R hormonaux
évaluation de la croissance tumorale
recherche cibles thérapeutiques
pathologie non tumorale
–
–
–
pathologie rénale : glomérulopathies
pathologie cutanée bulleuse
pathologie inflammatoire (ex: agent pathogène)
IMMUNOHISTOCHIMIE
•
Applications
–
pathologie hémolymphatique
–
–
–
pathologie tumorale
–
–
–
–
–
–
Dg lymphomes/ infiltrats lymphoïdes réactionnels
classification des lymphomes
identification des tumeurs malignes
indifférenciées
substance spécifique de certaines tumeurs
expression des R hormonaux
évaluation de la croissance tumorale
recherche cibles thérapeutiques
pathologie non tumorale
–
–
–
pathologie rénale : glomérulopathies
pathologie cutanée bulleuse
pathologie inflammatoire
Ag HbS
IMMUNOHISTOCHIMIE
•
Applications
–
pathologie hémolymphatique
–
–
–
pathologie tumorale
–
–
–
–
–
–
Dg lymphomes/ infiltrats lymphoïdes réactionnels
classification des lymphomes
identification des tumeurs malignes indifférenciées
substance spécifique de certaines tumeurs
expression des R hormonaux
évaluation de la croissance tumorale
recherche cibles thérapeutiques
pathologie non tumorale
–
–
–
pathologie rénale : glomérulopathies
pathologie cutanée bulleuse
pathologie inflammatoire
IMMUNOHISTOCHIMIE
Exemple
utilisation des anticorps monoclonaux dans le diagnostic
des tumeurs malignes sur coupes en paraffine
Tumeurs
KL1
AntiPS100
-
HMB45
+
Anti-LCA
(CD45)
-
Carcinome
Lymphome
-
+
-
-
Sarcome
-
-
+/-
-
Mélanome
-
-
+
+
-
IMMUNOHISTOCHIMIE
•
applications
Ganglion médiastinal HE
Ganglion médiastinal HE
Ganglion médiastinal IHC anti-CD45
Ganglion médiastinal IHC KL1
•
•
KL1+
Anti-CD45-
Métastase ganglionnaire
d’un carcinome
Tumeur cutanée
indifférenciée
Tumeur cutanée
indifférenciée:
IHC KL1
Tumeur cutanée
indifférenciée:IHC HMB45
Tumeur cutanée
indifférenciée:
IHC anti-protéine S100
•
•
•
KL1HBM45+
Anti-PS100+

Mélanome
IMMUNOHISTOCHIMIE
•
Applications
–
pathologie hémolymphatique
–
–
–
pathologie tumorale
–
identification des tumeurs malignes indifférenciées
–
substance spécifique de certaines tumeurs
–
–
–
–
Dg lymphomes/ infiltrats lymphoïdes réactionnels
classification des lymphomes
expression des R hormonaux
évaluation de la croissance tumorale
recherche cibles thérapeutiques
pathologie non tumorale
–
–
–
pathologie rénale : glomérulopathies
pathologie cutanée bulleuse
pathologie inflammatoire
Ganglion cervical métastatique, HE
Ganglion cervical métastatique:
IHC anti-thyroglobuline
Métastase d’un
adénocarcinome
thyroïdien
IMMUNOHISTOCHIMIE
•
Applications
–
pathologie hémolymphatique
–
–
–
pathologie tumorale
–
identification des tumeurs malignes
indifférenciées
substance spécifique de certaines tumeurs
expression des R hormonaux
évaluation de la croissance tumorale
–
recherche micrométastases
–
–
–
–
Dg lymphomes/ infiltrats lymphoïdes réactionnels
classification des lymphomes
pathologie non tumorale
–
–
–
pathologie rénale : glomérulopathies
pathologie cutanée bulleuse
pathologie inflammatoire
Mélanome et ganglion sentinelle:
recherche de micrométastase par
immunohistochimie avec HMB45, non
décelable sur H&E
Ganglion sentinelle + = Curage ganglionnaire
TECHNIQUES SPÉCIALES
•
Microscopie électronique
•
Histoenzymologie
Immunohistochimie
•
Biologie moléculaire
•
Cytométrie en flux
•
Télépathologie
•
hybridation in situ
PCR
BIOLOGIE MOLÉCULAIRE
•
Hybridation in situ
–
Techniques
•
•
Coupes en paraffine ou coupes en congélation
Sondes froides (= non radio-actives)
•
•
–
Chromogéniques (CISH)
Fluorescentes (FISH)
Applications
•
•
Détection du génome de certains virus
Détection de translocations chromosomiques,
d’amplification génique
HPV
Détection par
FISH d’une fusion
entre les
chromosomes 17
et 22 dans une
lésion cutanée
Utilité diagnostique:
Sarcome de Darier-Ferrand
Détection par FISH d’une amplification du gène HER2 dans
un carcinome mammaire
DuoCISH™, Dako
HER2 / Cen17
Non amplifié
Amplifié
Utilité thérapeutique
Prescription d’un inhibiteur de Erb-2
BIOLOGIE MOLÉCULAIRE
•
PCR (Polymerase Chain Reaction)
–
Rappel de son principe
–
Technique
–
Applications
2/ PRINCIPALES ÉTAPES DE LA
TECHNIQUE
3/ APPLICATIONS EN ANATOMIE
PATHOLOGIQUE
Anomalies géniques
-Mutation
-Translocations chromosomiques
Mise en évidence de la clonalité lymphoide
Mutation
Ex: mutation du gène BRAF dans le mélanome
métastatique
Séquençage du
produit PCR
correspondant à
l’amplification de la
zone du gène où se
situe la mutation
Intéret thérapeutique (prescription d’un
inhibiteur de BRAF)
Translocation chromosomique
Détection par PCR à l’aide de deux amorces encadrant la zone
réarrangée
CHR 2
Gène A
CHR 5
Amorce B
Gène B
Amorce A
Intérêt diagnostique (translocation
spécifique de tumeur)
Intérêt pronostique (ex: recherche de la
maladie résiduelle après traitement d’un
lymphome porteur de cette translocation)
Polyclonalité et monoclonalité lymphoide
Prolifération polyclonale
bénigne
Prolifération monoclonale
maligne
Comment établir le caractère clonal ou polyclonal ?
Identité ou non-identité du récepteur à l’Ag qui
caractérise un lymphocyte donné
Ig pour lymphocyte B
Intérêt diagnostique
TCR pour lymphocyte T
Etablissement de
clonalité par PCR
V
D
J
Polyclonal
V
D
J
Monoclonal
APPLICATIONS
Maladies infectieuses :
Virus (HPV : non cultivable,CMV: rejet de greffe
rénale, VIH...), bactéries (à croissance lente :
mycobactéries)…
Anomalies géniques
- Mutation
- Translocation chromosomique
détection de la t(14;18) par PCR: amplification de
la zone jonctionnelle, variable d’un clone à l’autre.
t(2 ;5) et lymphomes anaplasiques à grandes cellules
CHR 2
-
amorce
CHR 5
amorce
Etablissement de la clonalité lymphoïde

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