15. Article Pseudo JRSUL corrigé et complété du

J. Rech. Sci. Univ. Lomé (Togo), 2014, Série D, 16(1) : 157-162
ASPECTS PHENOTYPIQUES DE LA RESISTANCE AUX ΒLACTAMINES DES SOUCHES DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA
ISOLEES AU LABORATOIRE DE BACTERIOLOGIE MEDICALE
DU CHU SYLVANUS OLYMPIO (CHU SO) DE LOME, TOGO.
SALOU M.1, 2,*, DOSSIM S.1, 2, EKOUEVI DK.2, NYASENU T.1,2, LACK F.1,2,
LOKO K.1, TIGOSSOU S.1, PRINCE-DAVID M.1,2, DAGNRA A. Y.1,2
1- Laboratoire de Microbiologie CHU SO Lomé-TOGO
2- Département des sciences fondamentales et de Santé publique, faculté des sciences de la santé,
Université de Lomé BP 1515, Lomé-Togo
(*) Auteur correspondant : Salou Mounerou
E-mail : [email protected]
Conflit d’intérêt : Nous ne déclarons aucun conflit d’intérêt.
Ce travail est une œuvre personnelle des auteurs
(Reçu le 27 décembre 2013 ; Révisé le 22 janvier 2014 ; Accepté le 03 Mars 2014)
RESUME
Objectif : Décrire les phénotypes de résistance aux bèta-lactamines des souches de
Pseudomonas aeruginosa par la technique de l’antibiogramme en milieu gélosé
Matériel et méthode : Il s’agit d’une étude transversale réalisée du 1er septembre 2011
au 29 février 2012 sur des souches de Pseudomonas aeruginosa isolées au laboratoire
de bactériologie médicale du CHU Sylvanus OLYMPIO. L’antibiogramme par la
technique de diffusion en milieu gélosé a été réalisé pour la détermination des
phénotypes de résistance. Les disques « Ticarcilline + acide clavulanique(TCC) »
Céfotaxime, Ceftazidime, Cefsulodine, Ticarcilline, Aztréonam et Imipénème ont été
testés. L’interprétation de l’antibiogramme s’est faite selon les recommandations du
Comité Antibiogramme de la société française de Microbiologie. L’identification des
phénotypes de résistance a été opérée selon la table proposée par Vedel et al.
Résultats : Vingt-huit (28) isolats de Pseudomonas aeruginosa ont été obtenus. Ces
souches provenaient des pus et des urines. Parmi elles 16 (57,1%) étaient d’origine
communautaire et 12 (42,9%) étaient d’origine hospitalière. Dix huit (64,3%) étaient de
phénotype sauvage, 5 (17,9%) étaient de phénotype complexe, 2 (7,1%) étaient de
phénotype BLSE, 2 (7,1%) étaient de phénotype céphalosporinases hyperproduites et 1
(3,6%) était de phénotype "imperméabilité spécifique à l’Imipenème ».
Conclusion: L’identification des phénotypes de résistance de P.aeruginosa par la
technique d’antibiogramme en milieu gélosé constitue une alternative pour les
laboratoires de bactériologie médicale dans les pays aux ressources limitées comme le
Togo, où les techniques de biologie moléculaire ne sont pas disponibles pour la
surveillance de la résistance aux antibiotiques et la prévention des infections
nosocomiales.
Mots clés : Antibiotiques, Phénotypes, Pseudomonas aeruginosa, résistance.
ABSTRACT
Phenotypes Pattern of susceptibility to β-lactam of Pseudomonas aeruginosa
isolated in the bacteriology medical laboratory of CHU Sylvanus Olympio (CHU
SO) of Lome, Togo
Objective: Describe phenotypes pattern of susceptibility to beta-lactamines of clinicals
strains of Pseudomonas aeruginosa by using agar plate method.
Methods: It is a cross-sectional study lead from 1st September 2011 to 29 February 2012
on clinicals strains of Pseudomonas aeruginosa isolated at the laboratory of medical
157
SALOU M. & al.
bacteriology CHU Sylvanus Olympio. The susceptibility test to antibiotics (Ticarcilline
+ clavulanic acid (TCC) » Céfotaxime, Ceftazidime, Cefsulodine, Ticarcilline,
Aztreonam and Imipenem) were determined using paper disk diffusion method in well
agar. The results were assessed using the " Comité Antibiogramme de la société
française de Microbiologie"’recommandations. Identification of phenotype was made
by using the table proposed by Vedel and al.
Results: Twenty-eight (28) Pseudomonas aeruginosa clinicals strains were obtained
during six months. Among them 16 (57.1%) were isolated from the community and 12
(42.9%) were nosocomial strains. Eighteen (64.3%) were wild-type phenotype, 5
(17.9%) were complex phenotype, 2 (7.1%) were ESBL phenotypes, 2(7.1%) were
phenotype high level cephalosporinase and 1 (3.6%) was a phenotype with
impermeability to imipenem.
Conclusion: Antibiotics susceptibility testing by using agar plate method can be use in
resources setting countries like Togo to survey bacteria resistance and to prevent
nosocomial infection due to Pseudomonas aeruginosa.
Keywords: Antibiotics, phenotype, Pseudomonas aeruginosa, susceptibility.
INTRODUCTION
l’antibiogramme sur gélose Mueller-Hinton.
P
METHODE
seudomonas aeruginosa (P. aeruginosa)
est une bactérie ubiquitaire fréquemment
rencontrée en milieu hospitalier. En Occident,
Pseudomonas aeruginosa était responsable de
10% de l’ensemble des infections nosocomiales
dans les établissements de santé (Cholley 2010)
et il occupait la troisième place, tous sites
confondus, dans la survenue d’infections
nosocomiales après Escherichia coli et
Staphylococcus aureus (Cavallo et Mérens
2008; Reunes et al., 2011). Au Togo en 2001,
Pseudomonas aeruginosa représentait 10,32%
des isolats en bactériologie médicale
(Hounogbe, 2001). L’émergence des bactéries
multirésistantes et la difficulté pour l’industrie
pharmaceutique de mettre sur le marché de
nouveaux antibiotiques rendent problématiques
le traitement des infections (Cholley 2010). Il
est donc important de connaître les mécanismes
de résistance des microorganismes aux antiinfectieux afin de lutter contre eux. Ces
mécanismes peuvent être détectés par la mise
en évidence de gène de résistance ou par la
détermination de leur phénotype. L’analyse
génotypique est une méthode coûteuse et
lourde à mettre en œuvre, alors que l’analyse
phénotypique peut se faire au moyen de
techniques simples comme l’antibiogramme
disponibles dans les laboratoires de
bactériologie des pays aux ressources limitées.
Cette étude a été initiée pour décrire les
phénotypes de résistance des souches de
Pseudomonas aeruginosa isolées au laboratoire
de bactériologie médicale du CHU Sylvanus
OLYMPIO (CHU SO) de Lomé à l’aide de
Il s’est agi d’une étude transversale qui a porté
sur les antibiogrammes de l’ensemble des
souches de P. aeruginosa isolées entre le 1er
Septembre 2011 et le 29 Février 2012 au
laboratoire de bactériologie médicale du CHU
SO.
- Collecte des souches
Tout bacille à Gram négatif, identifié comme
Pseudomonas aeruginosa dans les différentes
unités de traitement des prélèvements du
laboratoire et reçu à la salle d’antibiogramme a
été sélectionné. Nous avons procédé au
contrôle de l’identification de la bactérie par la
réalisation d’un test prouvant la présence d’une
oxydase à l’aide d’un disque en papier
imprégné de diméthylparaphényl-diamine qui
devient violet lorsqu’il s’agit de bactéries du
genre Pseudomonas.
Le diagnostic d’espèce a été réalisé à l’aide du
test au chloroforme qui montre une pyocyanine
soluble dans ce solvant organique qui se teinte
en bleu en présence de P. aeruginosa. Le
diagnostic de P. aeruginosa a été complété par
le test de sensibilité à la Kanamycine et à la
colistine. Si la Kanamycine est résistante et la
Colistine est sensible : il s’agit de
Pseudomonas aeruginosa.
- Réalisation de l’antibiogramme
Au cours de la phase pré analytique, après la
préparation des milieux Mueller Hinton (MH),
stérilisés à l’autoclave à 121°C pendant 15
minutes puis distribués en boîte de Pétri de 90
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J. Rech. Sci. Univ. Lomé (Togo), 2014, Série D, 16(1) : 157-162
Aspects phénotypiques de la résistance aux β-lactamines des souches de pseudomonas
aeruginosa isolées au laboratoire de bactériologie médicale du CHU Sylvanus Olympio
(CHU SO) de Lomé, Togo.
mm de diamètre de sorte à obtenir une
épaisseur de 4 mm. Ces milieux sont conservés
au réfrigérateur entre 2 à 8°C jusqu’à l’emploi.
Dans la phase analytique, nous avons à J1
ensemencé une colonie isolée obtenue après
24 heures de culture dans un tube à hémolyse
stérile contenant le bouillon Eau Peptonée
Saline (EPS) puis incuber à 37°C pendant 24
heures. A J2, à partir du bouillon EPS de 24
heures réaliser une suspension bactérienne
homogène dans 10 ml d’eau physiologique
stérile. Cette suspension est à comparer à
l’étalon d’opacité 0,5 ml de l’échelle de MAC
Farland. Cet inoculum a ensemencé la gélose
MH par inondation puis aspiration et séchage à
37°C pendant 10 minutes. A l’aide d’une pince
stérile, nous avons déposé le disque de la
Ticarcilline + acide clavulanique (TCC) au
centre de la boîte et l’avons entouré par ceux de
Céfotaxime,
Ceftazidime,
Cefsulodine,
dTicarcilline, Aztréonam et d’Imipénème tout
en respectant une distance de 30 mm centre à
centre entre les disques et 15 mm de la bordure
de la boîte. Le tout a été pré-incubé pendant 10
minutes à la température du laboratoire puis
incubé en plaçant la boîte à l’étuve pendant 18
à 24 heures à 37°C. A J3, nous avons observé
les boîtes à la recherche d’une image de
synergie entre le disque de la Ticarcilline +
acide clavulanique et ceux des C3G et ou
Aztréonam, d’une résistance contacte autour
des éventuels disques et d’une image
d’antagonisme entre l’Imipénème et la
Cefsulodine. Les diamètres de la zone
d’inhibition de chaque disque sont mesurés à
l’aide d’un double décimètre appliqué au revers
de la boîte de Pétri contenant la gélose. Ainsi,
l’identification des phénotypes a été faite selon
la description de Vedel et al. (Vedel 1994).
Le phénotype sauvage correspond :
⋅ à l’absence d’image de synergie entre le
disque de la Ticarcilline + acide
clavulanique et ceux des C3G et/ou
Aztréonam ;
⋅ à la présence d’image d’antagonisme entre
l’Imipénème et la Cefsulodine ;
⋅
au diamètre de la zone d’inhibition autour
de la Cefsulodine est sensiblement égal au
diamètre de la zone d’inhibition autour de
l’Aztréonam.
Le phénotype BLSE correspond :
⋅ à l’absence d’une image de synergie entre
le disque de la Ticarcilline + acide
clavulanique et ceux des C3G et/ou
Aztréonam ;
⋅ à la résistance contacte autour des disques
de la Ticarcilline et ceux des C3G et de
l’Aztréonam ;
⋅ à une diminution de diamètre de sensibilité
autour de Ceftazidine (diamètre ≤ 22 mm)
et/ou Aztréonam (diamètre ≤ 27 mm).
Le phénotype céphalosporinase hyperproduite:
Dans le cas de la dérépression partielle
correspond :
⋅ à l’absence d’une image de synergie entre
le disque de la Ticarcilline + acide
clavulanique et ceux des C3G et/ou
Aztréonam ;
⋅ à la présence d’une image d’antagonisme
entre l’Imipénème et la Cefsulodine ;
⋅ au diamètre de la zone d’inhibition autour
de la Ceftazidine est inférieur au diamètre
de la zone d’inhibition autour de
l’Aztréonam ;
⋅ au diamètre de la zone d’inhibition du
disque de Cefsulodine est intermédiaire ou
résistant.
Dans le cas de dérépression totale correspond :
⋅ à l’absence d’une image de synergie entre
le disque de la Ticarcilline + acide
clavulanique et ceux des C3G et/ou
Aztréonam ;
⋅ à l’absence d’une image d’antagonisme
entre l’Imipénème et la Cefsulodine ;
⋅ au diamètre de la zone d’inhibition autour
de la Ceftazidine est inférieur ou égal au
diamètre de la zone d’inhibition autour de
l’Aztréonam ;
⋅ au diamètre de la zone d’inhibition du
disque de la Cefsulodine est résistant.
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J. Rech. Sci. Univ. Lomé (Togo), 2014, Série D, 16(1) : 157-162
SALOU M. & al.
Le phénotype à l’imperméabilité spécifique à
l’Imipénème correspond :
⋅ à l’absence d’image de synergie entre le
disque de la Ticarcilline + acide
clavulanique et ceux des C3G et/ou
Aztréonam ;
⋅ à la présence d’image d’antagonisme entre
l’Imipénème et la Cefsulodine ;
Tableau I: Répartition des souches de
Pseudomonas aeruginosa isolées par service
Services
⋅
au diamètre de la zone d’inhibition autour
de la Cefsulodine est sensiblement égal au
diamètre de la zone d’inhibition autour de
l’Aztréonam ;
⋅ à la résistance de l’Imipénème.
Le phénotype complexe :
L’interprétation du phénotype complexe est
difficile.
RESULTATS
Vingt-huit
souches
de
Pseudomonas
aeruginosa ont été isolées au cours des six
mois de l’étude.
Données épidémiologiques
Les prélèvements étaient issus de 17 hommes
et de 11 femmes. Seize sur 28 souches de P.
aeruginosa isolées, provenaient de patients non
hospitalisés, et 12 provenaient des patients
admis en hospitalisation. (Tableau I). Les pus
(n=25) et les urines (n=3) ont été les deux types
de produits pathologiques analysés.
Effectif
Externes
16
Traumatologie
5
Pneumologie
2
Pédiatrie
2
Pavillon Militaire
1
Gynécologie
1
Chirurgie viscérale
Total
1
28
Données biologiques
Phénotype
Dix-huit souches de Pseudomonas aeruginosa
isolées étaient de phénotype sauvage (Figure 1)
et 10 étaient des phénotypes résistants (Figures
2, 3, 4, 5 ; Tableau II).
Parmi les phénotypes sauvages, 11 provenaient
de prélèvements de ville. Cinq sur les 12
souches isolées de patients hospitalisés,
provenaient du service de traumatologie
(Tableau III). La moitié (n=5) des souches
exprimant des phénotypes de résistance aux
béta
lactamines
était
des
souches
communautaires. (Tableau III).
Tableau II: Répartition des phénotypes des souches
de Pseudomonas aeruginosa isolés
Phénotypes isolés
Phénotypes sauvages
Effectif
18
Phénotypes complexes
05
BLSE
02
Céphalosporinases hyperproduites
02
Imperméabilité spécifique à l’Imipenème
01
Total
28
160
J. Rech. Sci. Univ. Lomé (Togo), 2014, Série D, 16(1) : 157-162
Aspects phénotypiques de la résistance aux β-lactamines des souches de pseudomonas
aeruginosa isolées au laboratoire de bactériologie médicale du CHU Sylvanus Olympio
(CHU SO) de Lomé, Togo.
Tableau III : Répartition des phénotypes selon le service demandeur
Phénotype
sauvage
Phénotype
complexe
BLSE
Céphalosporinase hyperproduite
Imperméabilité
spécifique à
l’Imipénème
Total (%)
Externe
11
02
01
01
01
16 (57,14)
Traumatologie
04
01
00
00
00
05 (17,86)
Pneumologie
01
00
00
01
00
02 (7,14)
Pédiatrie
01
01
00
00
00
02 (7,14)
Pavillon
militaire
Gynécologie
00
00
01
00
00
01 (3,57)
01
00
00
00
00
01 (3,57)
Chirurgie
00
01
00
00
00
01 (3,57)
Total (%)
18 (64,29)
05 (17,86)
02 (7,14)
02 (7,14)
01 (3,57)
28 (100)
DISCUSSION
La majorité des isolats était retrouvées dans le
pus (25/28), ce qui confirme le caractère
pyogène de la bactérie. Ces pus provenaient
aussi bien des patients externes qu’hospitalisés.
Maïmoussa à Niamey au Niger a retrouvé une
proportion
similaire
de
91,66%
de
Pseudomonas aeruginosa isolés dans les pus en
2009 (Maimoussa 2009). Parmi les souches
isolées au cours des six mois, le phénotype
sauvage était majoritaire (64,3%) soit environ
deux tiers des souches humaines n’ayant pas
mutées et donc sensibles aux antibiotiques
anti-pyocyaniques et à l’imipenème. Nous
avons retrouvé en proportions similaires aussi
bien dans la communauté qu’à l’hôpital autant
d’isolats à phénotype de résistance. Parmi les
isolats résistants, cinq (5) étaient des
phénotypes complexes dont deux (2)
provenaient de prélèvements non hospitaliers, 2
phénotypes BLSE dont 1 de source
communautaire, 2 phénotypes céphalosporinases hyperproduites dont 1 de souche non
hospitalière et 1 seul cas de phénotype à
l’imperméabilité spécifique à l’Imipenème qui
provenait d’un prélèvement non hospitalier. Ce
phénomène est alarmant car de façon classique,
les souches résistantes se retrouvent par
excellence en milieu hospitalier et non en
milieu communautaire. Les raisons seraient la
consommation anarchique des antibiotiques par
l’automédication
(Bignandi,
2005)
et
l’utilisation des biocides (Faure, Kipnis, et
Gueri 2008) dont un grand nombre se retrouve
en ventre libre sur les marchés trottoirs dans la
majorité des pays sous développés notamment
le Togo. De plus, il faut signaler l’inondation
du marché des pays du tiers monde par des
antibiotiques, provenant des nouveaux pays
émergents d’Afrique et d’Asie, qui ne sont pas
toujours pré-qualifiés par l’organisation
mondiale de la santé (OMS). Cette situation
pose la problématique de la qualité de ces
antibiotiques fabriqués sous licence. Il est
important de rappeler que cette catégorie de
médicaments dits "moins chers". est cependant
abondamment prescrite car étant plus
accessible pour les consommateurs. Très
souvent, les populations des pays pauvres ne
recourent à l’hôpital qu’après l’échec d’une
première thérapie auto administrée faite
souvent
d’un
cocktail
d’antibiotiques,
d’antalgiques
et
d’anti
inflammatoires
(Bignandi 2008). L’émergence des souches
multi résistantes est inquiétante car elle
représente un sérieux problème thérapeutique
et épidémiologique surtout avec l’apparition
des souches de Pseudomonas aeruginosa
résistantes de phénotype complexe ou de
phénotype résistant à l’action de l’imipenème
qui est une molécule de choix pour le
traitement des infections à bactéries multi
résistantes aux beta lactamines (Ait El Kadi et
al. 2006). Il est donc nécessaire de mettre en
place un système de surveillance de
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J. Rech. Sci. Univ. Lomé (Togo), 2014, Série D, 16(1) : 157-162
SALOU M. & al.
l'environnement microbien hospitalier et
d'appliquer les mesures strictes d'hygiène et le
respect des normes de prescription et de prise
des antibiotiques.
CONCLUSION
L’identification des phénotypes de résistance
de P. aeruginosa par la technique d’antibiogramme en milieu gélosé constitue une
alternative
pour
les
laboratoires
de
bactériologie médicale dans les pays aux
ressources limitées comme le Togo. Cette
technique peu onéreuse, en l’absence des
techniques de biologie moléculaire, peut
permettre de suivre la circulation hospitalière
du bacille pyocyanique dans un contexte
d’hygiène hospitalière et de prévention des
infections nosocomiales.
REFERENCES
1. AIT El KADI M., AGHROUCH M.,
SEFFAR M., J. El HARTI A., BOUKLOUZE
Y., CHERRAH K., SOULY et ZOUHDI M.,
2006. « Prévalence des souches d’Acinetobacterbaumannii et de Pseudomonas aeruginosa résistantes à l’imipeneme par
production
de
metallo-beta-lactamases ».
Médecine et maladies infectieuses, 36, 7, 386389.
2. BIGNANDI A., 2005. « Vente illicite du
médicament ». Lomé: Faculté Mixte de
Médecine et de Pharmacie.
3. CAVALLO J-D et MERENS A., 2008.
« Pseudomonas aeruginosa et beta-lactamines à
l’heure de l’Europe ». Pathologie-biologie, 56,
7-8, 435-438.
4. CHOLLEY P., 2010. « Analyse génétique
des souches multi-résistantes de Pseudomonas
aeruginosa dans l’Est de la France, apport
prédictif potentiel sur le risque infectieux ».
Faculté de Médecine et de Pharmacie de
Besançon: Université de Franche-Comté.
5. FAURE K, KIPNIS E. et GUERI B., 2008.
Prise en charge des pneumonies à
Pseudomonas aeruginosa, 2, 1, 1-8.
6. HOUNOGBE A.S. 2001. Etude du
comportement de souches bactériennes vis-àvis des antibiotiques testés à l’Institut National
d’Hygiène de Lomé : à propos de 18128
germes isolés de 1993 à 2001, Lomé: ESTBA.
7. MAIMOUSSA C. H. Z., 2009. Prévalence
des souches de Pseudomonas aeruginosa
productrices de BLSE isolées des produits
biologiques provenant des patients hospitalisés
entre le 25 Mars et le 30 Août 2009 à l’HNL de
Niamey (Niger). Lomé, ESTBA.
8. REUNES S., ROMBAUT V., VOGELAERS
D., BRUSSELAERS N., LIZY C., CANKURTARAN M., LABEAU S., PETROVIC M. et
BLOT S., 2011. « Risk Factors and Mortality
for Nosocomial Bloodstream Infections in
Elderly Patients ». European Journal of
Internal Medecine, 22, 5, 39-44.
9. VEDEL G., 1994. Pseudomonas aeruginosa: Une méthode de détection des
phénotypes de résistance aux β-lactamines.
Issy-les-Moulineaux: Glaxo Wellcome SA.
162
J. Rech. Sci. Univ. Lomé (Togo), 2014, Série D, 16(1) : 157-162

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