XLD

X.L.D.
41751 - 69124
SELECTIVE ISOLATION MEDIUM FOR ENTEROBACTERIACEAE
1- INTENDED USE
Xylose Lysine Deoxycholate (X.L.D.) agar is a selective medium for the selective isolation of pathogenic Enterobacteriaceae,
especially Shigella and Salmonella from specimens with mixed flora.
2- PRINCIPLE
The selectivity of this medium is based on the presence of sodium deoxycholate, which inhibits the growth of Gram (+) bacteria.
The differentiation of Enterobacteriaceae is based on the following biochemical characteristics:
• Fermentation of xylose, lactose or sucrose: fermentation induces acidification, causing a yellow colour of the colonies in
the presence of phenol red (pH indicator). All Enterobacteriaceae ferment one of these sugars, except for Shigella,
Providencia, Proteus morganii, xylose (-) Proteus rettgeri, Edwardsiella and xylose (-) Salmonella paratyphi A. A negative
reaction can therefore guide the identification of these bacteria.
• Detection of lysine decarboxylase (LDC): decarboxylation of lysine into cadaverine induces a red colour of the colonies.
All strains of Salmonella possess LDC, except for S. paratyphi A.
• Production of hydrogen sulphide: the differentiation between Salmonella, Edwardsiella and Shigella is based on the
production of hydrogen sulphide, causing a black colour in the centre of the colonies.
3- HOW SUPPLIED
• Ready to use medium :
box of 20 Petri dishes (90 mm) (XLD)
• Dehydrated medium:
- bottle of 500 g
code 41751
code 69124
4- THEORETICAL COMPOSITION (g/l of distilled water)
X.L.D. agar corresponds to medium K of the European Pharmacopoeia 4 (2002) (1).
Yeast extract
3
L-Lysine hydrochloride
5
Sucrose
7.5
Lactose
7.5
Xylose
3.5
Sodium deoxycholate
2.5
Sodium chloride
5
Sodium thiosulphate
6.8
Ferric ammonium citrate
0.8
Phenol red
0.08
Agar
13.5
Preparation of the medium:
Homogenize the powder contained in the bottle.
Add 55 grams of dehydrated medium to 1 litre of sterile distilled water. Heat gently, shaking frequently until boiling. DO NOT
PROLONG HEATING. Transfer immediately to a 50°C water-bath. If necessary, adjust the pH to 7.4. Dispense into Petri dishes
or bottles as soon as the medium has cooled sufficiently. DO NOT AUTOCLAVE.
5- STORAGE
• Dehydrated medium: tightly sealed bottle in a dry place at +15-25°C.
The expiry date and batch number are indicated on the packaging.
6- INSTRUCTIONS
Material:
• Material provided: X.L.D. medium.
Inoculation:
Inoculate by streaking directly from the specimen to be examined (stool culture: stools can be deposited directly onto the
medium) or from an enrichment broth. Refer to current recommendations for storage of biological specimens (2).
Incubation:
Incubate for 24 hours at 37°C.
Reading:
The appearance of the colonies can guide the diagnosis:
Yellow opaque colonies
fermentation of at least one of the sugars and
LDC (-)
Red colonies
LDC (+)
Red colonies with a black centre
H2S production
- Escherichia coli
- Enterobacter
- Klebsiella
- Citrobacter
- Proteus
- Serratia
- Shigella
- Providencia
- H2S(-)Salmonella
- Salmonella
- Edwardsiella
PERFORMANCE/QUALITY CONTROL OF THE TEST
Appearance of the dehydrated medium: orange-pink powder.
The growth performances of X.L.D. medium are verified with the following strains:
7•
•
STRAINS
Escherichia coli ATCC 25922
Salmonella enteritidis ATCC 13076
Shigella sonnei ATCC 25931
Providencia alcalifaciens ATCC 27970
Proteus mirabilis ATCC 25933
Enterobacter aerogenes ATCC 13048
Staphylococcus aureus ATCC 25923
CULTURE RESULT AFTER 24 hours at 37°C
Yellow colonies, partial inhibition
Red colonies with a pale black centre
Red colonies
Red colonies
Yellow colonies with a black centre
Yellow colonies
Total inhibition
8- QUALITY CONTROL OF THE MANUFACTURER
All manufactured reagents are prepared according to our Quality System, starting from reception of raw material to the final
commercialization of the product. Each lot is submitted to quality control assessments and is only released to the market, after
conforming to pre-defined acceptance criteria. The records relating to production and control of each single lot are kept within
Bio-Rad.
9- LIMITS OF USE
• Shigella sonnei, biotype D, ferments xylose.
• Sodium deoxycholate inhibits the growth of some strains of Enterobacteriaceae. It is therefore recommended to inoculate a
Muller Kauffmann tetrathionate medium (56143) in parallel.
• The lysine decarboxylase of some strains of E. coli may not modify the very acid pH obtained by fermentation of the sugars.
• Some colonies of Salmonella (S. paratyphi A, S. cholerasuis, S. pullorum and S. gallinarum) without a black centre resemble
colonies of Shigella.
• Some colonies of Proteus can present a black centre.
• Some strains of Proteus and Pseudomonas can give red colonies.
101.
2.
3.
4.
5.
6.
REFERENCES
Pharmacopée Européenne, Addendum 4.2 de la IVe édition, 2002, p. 2841.
Basic Laboratory Procedures in Clinical Bacteriology. World Health Organization. Geneva.1991. 1st edition.
CHAWICK P. and al., Can. J. Microbiol., 1974, 20, p.1653-1664.
ROLLENDER M.A. and al., Americ. A. Clin. Path., 1969, 51, p.284-286.
TAYLOR W.I., Americ. J. Clin. Path., 1965, 44, p.471-475.
TAYLOR W.I. and SCHELART D., Appl. Microbiol., 1969, 18, p.393-395.
X.L.D.
41751 - 69124
MILIEU D' ISOLEMENT SÉLECTIF DES ENTÉROBACTÉRIES
IVD
1- APPLICATION
La gélose Xylose – Lysine – Désoxycholate (X.L.D.) est un milieu d'isolement sélectif des entérobactéries pathogènes et plus
particulièrement des Shigella et Salmonella à partir d'un prélèvement polymicrobien.
2- PRINCIPE
La selectivité de ce mileu est basée sur la présence de désoxycholate de sodium, qui inhibe les bactéries à Gram (+).
La différenciation des entérobactéries est basée sur les caractères biochimiques suivants :
• Fermentation du xylose, du lactose ou du saccharose : s'il y a fermentation cela induit une acidification qui provoque une
coloration jaune des colonies en présence de rouge de phénol (indicateur de pH). Toutes les Entérobactéries fermentent un de ces
sucres, exceptées les Shigella, les Providencia, Proteus morganii, Proteus rettgeri xylose (-), les Edwardsiella et les Salmonella
Paratyphi A xylose (-). Une réaction négative permettra donc d’orienter le diagnostic vers l’une de ces bactéries.
• Détection de la lysine décarboxylase (L.D.C.) : la décarboxylation de la lysine en cadavérine entraîne une coloration rouge des
colonies. Les Salmonella possèdent une L.D.C., à l'exception de S. Paratyphi A.
• Production d'hydrogène sulfuré : la différenciation entre les Salmonella, les Edwardsiella et les Shigella se fait grâce à la
production d'hydrogène sulfuré, qui se traduit par une coloration noire du centre des colonies.
3- PRÉSENTATION
• Milieu prêt à l’emploi
- coffret de 20 boîtes de Petri (90 mm) (XLD)
code 41751
• Milieu déshydraté
- flacon de 500 g
code 69124
4- COMPOSITION THÉORIQUE (en g/l d’eau distillée)
La gélose X.L.D. correspond au milieu K de la Pharmacopée Européenne IV (2002). (1)
Extrait de levure
3
Chlorhydrate de L-Lysine
5
Saccharose
7,5
Lactose
7,5
Xylose
3,5
Désoxycholate de sodium
2,5
Chlorure de sodium
5
Thiosulfate de sodium
6,8
Citrate de fer ammoniacal
0,8
Rouge de phénol
0,08
Agar
13,5
Préparation du milieu :
Homogénéiser la poudre contenue dans le flacon.
Mettre 55 grammes de milieu déshydraté dans 1 litre d’eau distillée stérile. Chauffer lentement en agitant fréquemment jusqu’à
ébullition et dissolution compète. NE PAS PROLONGER LE CHAUFFAGE. Si nécéssaire, ajuster le pH à 7,4. Répartir en boîtes de Petri
ou en flacons dès que le milieu est suffisamment refroidi. NE PAS AUTOCLAVER.
1
5- CONSERVATION
• Milieu prêt à l’emploi : à +2-8°C.
• Milieu déshydraté : flacon soigneusement fermé dans un endroit sec à +15-25°C.
La date de péremption et le numéro de lot sont indiqués sur le conditionnement.
6- UTILISATION
Matériel :
• Matériel fourni : milieu X.L.D.
Ensemencement :
Ensemencer directement à partir d’un prélèvement pathologique (coproculture : les selles peuvent être déposées directement sur le
milieu) ou à partir d'un bouillon d'enrichissement. Pour la conservation des échantillons biologiques, se référer aux recommandations
en vigueur (2).
Incubation :
Incuber 24 heures à 37°C.
Lecture :
L'aspect des colonies permet d'orienter le diagnostic :
Colonies jaunes opaques
fermentation d'au moins un des sucres
et L.D.C. (-)
-
Colonies rouges
L.D.C. (+)
- Shigella
- Providencia
- Salmonella H2S (-)
Colonies rouges à centre noir
Production d’H2S
- Salmonella
- Edwardsiella
Escherichia coli
Enterobacter
Klebsiella
Citrobacter
Proteus
Serratia
7- PERFORMANCES / CONTRÔLE QUALITÉ DU TEST
• Aspect du milieu prêt à l’emploi : gélose rouge.
• Aspect du milieu déshydraté : poudre rose orangée.
• Les performances culturales du milieu X.L.D. sont contrôlées à l’aide des souches suivantes :
SOUCHES
RÉSULTAT DE LA CULTURE en 24H à 37°C
Escherichia coli ATCC 25922
Colonies jaunes, inhibition partielle
Salmonella Enteritidis ATCC 13076
Colonies rouges à centre noir faible
Shigella sonnei ATCC 25931
Providencia alcalifaciens ATCC 27970
Proteus mirabilis ATCC 25933
Colonies rouges
Colonies rouges
Colonies jaunes à centre noir
Enterobacter aerogenes ATCC 13048
Colonies jaunes
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Inhibition totale
8- CONTRÔLE QUALITÉ DU FABRICANT
Tous les produits fabriqués et commercialisés par la société Bio-Rad sont placés sous un système d'assurance qualité de la réception
des matières premières jusqu'à la commercialisation des produits finis. Chaque lot de produit fini fait l'objet d'un contrôle de qualité
et n'est commercialisé que s'il est conforme aux critères d'acceptation. La documentation relative à la production et au contrôle de
chaque lot est conservée par le fabricant.
2
9- LIMITES D'UTILISATION
• Shigella sonnei, biotype D, fermente le xylose.
• Le désoxycholate de sodium inhibe la croissance de certaines Entérobactéries. Il est donc recommandé d'ensemencer en parallèle
un milieu de Muller Kauffmann tetrathionate (56143).
• La lysine décarboxylase de certains E. coli est susceptible de ne pas modifier le pH très acide obtenu par fermentation des
sucres.
• Certaines colonies de Salmonella (S. paratyphi A, S.cholerasuis, S. pullorum et S. gallinarum) sans centre noir ressemblent à des
colonies de Shigella.
• Certaines colonies de Proteus peuvent présenter un centre noir.
• Certaines souches de Proteus et de Pseudomonas peuvent donner des colonies rouges.
10-RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES
1.Pharmacopée Européenne, Addendum 4.2 de la IVe édition, 2002, p. 2841.
2.Basic Laboratory Procedures in Clinical Bacteriology. World Health Organization. Geneva.1991. 1st edition.
3.CHAWICK P. and al., Can. J. Microbiol., 1974, 20, p.1653-1664.
4.ROLLENDER M.A. and al., Americ. A. Clin. Path., 1969, 51, p.284-286.
5.TAYLOR W.I., Americ. J. Clin. Path., 1965, 44, p.471-475.
6.TAYLOR W.I. and SCHELART D., Appl. Microbiol., 1969, 18, p.393-395.
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
08/2003
code: 18048 - A4
3
X.L.D.
41751 - 69124
MEDIO SELECTIVO DE AISLAMIENTO PARA ENTEROBACTERIACEAE
1- USO PREVISTO
El agar Xilosa Lisina Desoxicolato (X.L.D.) es un medio selectivo para el aislamiento selectivo de Enterobacteriaceae
pátógenas, especialmente Shigella y Salmonella de muestras con flora mixta.
2- PRINCIPIO
La selectividad de este medio se basa en la presencia de desoxicolato sódico que inhibe el crecimiento de las bacterias Gram
(+).
La diferenciación de las Enterobacteriaceae se basa en las características bioquímicas:
• Fermentación de xilosa, lactosa o sacarosa: la fermentación induce acidificación que produce un color amarillo de las
colonias en presencia de rojo fenol (indicador de pH). Todas las Enterobacteriaceae fermentan uno de estos azúcares,
excepto Shigella, Providencia, Proteus morganii, Proteus rettgeri xilosa (-), Edwardsiella y Salmonella paratyphi A xilosa (-).
Por tanto, una reacción negativa puede guiar en la identificación de estas bacterias.
• Detección de la lisina descarboxilasa (LDC): la descarboxilación de la lisina en cadaverina induce un color rojo de las
colonias. Todas las cepas de Salmonella poseen LDC, excepto S. paratyphi A.
• Producción de sulfuro de hidrógeno: la diferenciación entre Salmonella, Edwardsiella y Shigella se basa en la
producción de sulfuro de hidrógeno, que produce un color negro en el centro de las colonias.
3•
•
CÓMO SE SUMINISTRA
Medio listo para usar:
caja de 20 placas de Petri (90 mm) (XLD)
Medio deshidratado:
frasco de 500 g
código 41751
código 69124
4- COMPOSICIÓN TEÓRICA (g/l de agua destilada)
El agar X.L.D. corresponde al medio K de la Farmacopea Europea 4 (2002) (1).
Extracto de levadura
3
Clorhidrato de L-Lisina
5
Sacarosa
7,5
Lactosa
7,5
Xilosa
3,5
Desoxicolato sódico
2,5
Cloruro sódico
5
Tiosulfato sódico
6,8
Citrato de amonio férrico
0,8
Rojo fenol
0,08
Agar
13,5
Preparación del medio:
Homogeneice el polvo contenido en el frasco.
Añada 55 gramos de medio deshidratado a un litro de agua destilada estéril. Caliente suavemente, agitando con frecuencia
hasta que hierva. NO PROLONGUE EL CALENTAMIENTO. Transfiera inmediatamente a un baño maría de 50°C. Si es
necesario, ajuste el pH a 7.4.Dispense en placas de Petri o frascos en cuando el medio se haya enfriado suficientemente. NO
SOMETER A AUTOCLAVE.
5- CONSERVACIÓN
• Medio deshidratado: frasco cerrado herméticamente en un lugar seco a +15-25°C.
La fecha de caducidad y el número de lote están indicados en el envasado.
6- INSTRUCCIONES
Material:
• Material suministrado: Medio X.L.D.
Inoculación:
Inocule tomando directamente de la muestra a examinar (cultivo de heces: las heces pueden depositarse directamente en el
medio) o de un caldo de enriquecimiento. Consúltense las recomendaciones actuales para la conservación de muestras
biológicas (2).
Incubación:
Incube durante 24 horas a 37°C.
Lectura:
El aspecto de las colonias puede guiar en el diagnóstico:
Colonias opacas amarillas
fermentación de al menos uno de los azúcares y
LDC(-)
Colonias rojas
LDC (+)
Colonias rojas con un centro negro
Producción de H2S
- Escherichia coli
- Enterobacter
- Klebsiella
- Citrobacter
- Proteus
- Serratia
- Shigella
- Providencia
- Salmonella H2S(-)
- Salmonella
- Edwardsiella
RENDIMIENTO / CONTROL DE CALIDAD DE LA PRUEBA
Aspecto del medio deshidratado: polvo naranja-rosa
Los rendimientos del medio X.L.D. se verifican con las siguientes cepas:
7•
•
CEPAS
Escherichia coli ATCC 25922
Salmonella enteritidis ATCC 13076
Shigella sonnei ATCC 25931
Providencia alcalifaciens ATCC 27970
Proteus mirabilis ATCC 25933
Enterobacter aerogenes ATCC 13048
Staphylococcus aureus ATCC 25923
RESULTADO DEL CULTIVO DESPUÉS DE 24 horas
a 37 °C
Colonias amarillas, inhibición parcial
Colonias rojas con un centro negro pálido
Colonias rojas
Colonias rojas
Colonias amarillas con un centro negro
Colonias amarillas
Inhibición total
8- CONTROL DE CALIDAD DEL FABRICANTE
Todos los reactivos fabricados se elaboran según nuestro sistema de calidad, que va desde la recepción de las materias
primas hasta la comercialización final del producto. Cada lote se somete a valoraciones de control de calidad y sale al mercado
sólo cuando está de acuerdo con los criterios de aceptación predefinidos. Los registros relativos a la producción y al control de
cada lote se conservan en Bio-Rad.
9- LÍMITES DE USO
• La Shigella sonnei, biotipo D, fermenta la xilosa.
• El desoxicolato sódico inhibe el crecimiento de algunas cepas de Enterobacteriaceae. Por tanto, se recomienda inocular un
medio de Muller Kauffmann tetrationato (56143) en paralelo.
• La lisina descarboxilasa de algunas cepas de E. coli puede no modificar el pH muy ácido obtenido por la fermentación de
los azúcares.
• Algunas colonias de Salmonella (S. paratyphi A, S. cholerasuis, S. pullorum y S. gallinarum) sin un centro negro se parecen
a colonias de Shigella.
• Algunas colonias de Proteus pueden presentar un centro negro.
• Algunas cepas de Proteus y Pseudomonas pueden dar colonias rojas.
101.
2.
3.
4.
5.
6.
BIBLIOGRAFÍA
Pharmacopée Européenne, Addendum 4.2 de la IVe édition, 2002, p. 2841.
Basic Laboratory Procedures in Clinical Bacteriology. World Health Organization. Geneva.1991. 1st edition.
CHAWICK P. and al., Can. J. Microbiol., 1974, 20, p.1653-1664.
ROLLENDER M.A. and al., Americ. A. Clin. Path., 1969, 51, p.284-286.
TAYLOR W.I., Americ. J. Clin. Path., 1965, 44, p.471-475.
TAYLOR W.I. and SCHELART D., Appl. Microbiol., 1969, 18, p.393-395.
X.L.D.
41751 - 69124
SELEKTIVES ISOLATIONSMEDIUM FÜR ENTEROBACTERIACEAE
1- VERWENDUNGSZWECK
Xylose-Lysin-Desoxycholat (X.L.D.)-Agar ist ein selektives Medium für die selektive Isolierung pathogener Enterobacteriaceae,
insbesondere von Shigella und Salmonella aus Proben mit gemischter Flora.
2- PRINZIP
Die Selektivität dieses Mediums basiert auf dem Vorliegen von Natriumdesoxycholat, welches das Wachstum grampositiver
Bakterien hemmt.
Die Differenzierung von Enterobacteriaceae basiert auf folgenden biochemischen Merkmalen:
•
Fermentierung von Xylose, Laktose oder Saccharose: Die Fermentierung leitet eine Säuerung ein, welche die Kolonien
in Anwesenheit von Phenolrot (pH-Indikator) gelb verfärbt. Alle Enterobacteriaceae fermentieren einen dieser Zucker,
insbesondere Shigella, Providencia, Proteus morganii, Xylose (-) Proteus rettgeri, Edwardsiella und Xylose (-) Salmonella
paratyphi A. Diese Bakterien können daher aufgrund einer negativen Reaktion identifiziert werden.
•
Nachweis von Lysin-Decarboxylase (LDC): Die Decarboxylierung von Lysin in Kadaverin führt zu einer roten Färbung
der Kolonien. Alle Salmonella-Stämme, mit Ausnahme von S. paratyphi A, weisen LDC auf.
•
Produktion von Hydrogensulfid: Die Differenzierung von Salmonella, Edwardsiella und Shigella basiert auf der
Produktion von Hydrogensulfid, die zu einer schwarzen Färbung des Mittelpunktes der Kolonien führt.
3•
•
DARREICHUNGSFORM
Gebrauchsfertiges Medium:
Packung mit 20 Petrischalen (90 mm) (CSB)
Dehydriertes Medium:
Fläschchen für 500 g
Art.-Nr. 63784
Art.-Nr. 69124
4- THEORETISCHE ZUSAMMENSETZUNG (g/l destilliertes Wasser)
X.L.D.-Agar entspricht dem Medium K der Europäischen Pharmakopoe 4 (2002) (1).
Hefeextrakt
3
L-Lysin-Hydrochlorid
5
Saccharose
7,5
Laktose
7,5
Xylose
3,5
Natriumdesoxycholat
2,5
Natriumchlorid
5
Natriumthiosulfat
6,8
Eisenammoniumcitrat
0,8
Phenolrot
0,08
Agar
13,5
Vorbereitung des Mediums:
Das in der Flasche enthaltene Pulver homogenisieren.
55 g des dehydrierten Mediums in 1 l steriles destilliertes Wasser geben. Vorsichtig unter häufigem Schwenken zum Kochen
bringen. NICHT LÄNGER ERHITZEN. Unverzüglich in ein 50°C heißes Wasserbad überführen. Falls nötig, den pH-Wert auf 7.4
einstellen. Sobald das Medium ausreichend abgekühlt ist, in Petrischalen oder Gefäße pipettieren . NICHT AUTOKLAVIEREN.
LAGERUNG
Dehydriertes Medium: in fest verschlossenen Gefäßen an einem trockenen Ort bei +15 - 25°C.
Das Verfallsdatum und die Chargennummer sind auf der Verpackung angegeben.
5-
•
6- GEBRAUCHSANWEISUNG
Material:
•
Geliefertes Material: X.L.D.-Medium.
Beimpfung:
Mit Ausstrich direkt von der Testprobe (Stuhlkultur: Stuhlproben können direkt auf das Medium gegeben werden) oder von einer
Anreicherungsbouillon beimpfen. Die Lagerbedingungen für biologische Proben entnehmen Sie bitte den aktuellen
Empfehlungen (2).
Inkubation:
Bei 37°C 24 Stunden lang inkubieren.
Ablesen der Ergebnisse:
Das Erscheinungsbild der Kolonien dient als Hilfsmittel für die Diagnose:
Gelbe, trübe Kolonien
Fermentierung von mindestens einem Zucker und
LDC (-)
Rote Kolonien
LDC (+)
Rote Kolonien mit schwarzem Mittelpunkt
H2S-Produktion
- Escherichia coli
- Enterobacter
- Klebsiella
- Citrobacter
- Proteus
- Serratia
- Shigella
- Providencia
- H2S(-)Salmonella
- Salmonella
- Edwardsiella
LEISTUNG/QUALITÄTSKONTROLLE DES TESTS
Erscheinung des dehydrierten Mediums: orange-rosafarbenes Pulver.
Die Leistungsmerkmale des Wachstums auf X.L.D.-Medium werden mit folgenden Stämmen überprüft:
7-
•
•
STÄMME
Escherichia coli ATCC 25922
Salmonella enteritidis ATCC 13076
Shigella sonnei ATCC 25931
Providencia alcalifaciens ATCC 27970
Proteus mirabilis ATCC 25933
Enterobacter aerogenes ATCC 13048
Staphylococcus aureus ATCC 25923
KULTURERGEBNIS nach 24 Stunden bei 37°C
Gelbe Kolonien, teilweise Inhibition
Rote Kolonien mit blass-schwarzem Mittelpunkt
Rote Kolonien
Rote Kolonien
Gelbe Kolonien mit schwarzem Mittelpunkt
Gelbe Kolonien
Vollständige Inhibition
8- QUALITÄTSKONTROLLE DES HERSTELLERS
Alle von der Firma Bio-Rad hergestellten Reagenzien unterliegen einem Qualitätssicherungssystem vom Rohstoffeingang bis
zur Vermarktung der Fertigprodukte. Jede Fertigproduktcharge wird einer Qualitätskontrolle unterzogen und nur dann verkauft,
wenn sie den Freigabekriterien entspricht. Die Unterlagen bezüglich Herstellung und Kontrolle der einzelnen Chargen werden
bei Bio-Rad aufbewahrt.
9- GRENZEN DES TESTS
•
Shigella sonnei, Biotyp D, fermentiert Xylose.
•
Natriumdesoxycholat hemmt das Wachstum mancher Enterobacteriaceae-Stämme. Daher wird empfohlen, parallel ein
Muller-Kauffmann-Tetrathionat-Medium (56143) zu beimpfen.
•
Die Lysin-Decarboxylase mancher E. coli-Stämme ändert unter Umständen den durch die Fermentierung der Zucker sehr
sauren pH-Wert nicht.
•
Manche Salmonella-Kolonien (S. paratyphi A, S. cholerasuis, S. pullorum und S. gallinarum) ohne schwarzen Mittelpunkt
ähneln Shigella-Kolonien.
•
Manche Proteus-Kolonien können einen schwarzen Mittelpunkt aufweisen.
•
Manche Proteus- und Pseudomonas-Stämme können zu roten Kolonien führen.
101.
2.
3.
4.
5.
6.
LITERATUR
Pharmacopée Européenne, Addendum 4.2 de la IVe édition, 2002, p. 2841.
Basic Laboratory Procedures in Clinical Bacteriology. World Health Organization. Geneva.1991. 1st edition.
CHAWICK P. and al., Can. J. Microbiol., 1974, 20, p.1653-1664.
ROLLENDER M.A. and al., Americ. A. Clin. Path., 1969, 51, p.284-286.
TAYLOR W.I., Americ. J. Clin. Path., 1965, 44, p.471-475.
TAYLOR W.I. and SCHELART D., Appl. Microbiol., 1969, 18, p.393-395.
X.L.D.
41751 - 69124
MEZZO SELETTIVO ISOLATO PER ENTEROBACTERIACEAE
1- USO PREVISTO
L'agar deossicolato xylosio lisina (X.L.D.) è un mezzo selettivo per l'isolamento selettivo delle Enterobacteriaceae patogene,
specialmente Shigella e Salmonella da campioni con flora mista.
2- PRINCIPIO
La selettività di questo mezzo è basata sulla presenza di sodio deossicolato, che inibisce la crescita di batteri Gram (+).
La differenziazione delle Enterobacteriaceae si basa sulle seguenti caratteristiche biochimiche:
•
Fermentazione di xylosio, lattosio o saccarosio: la fermentazione induce acidificazione, determinando un colore giallo
delle colonie in presenza di rosso fenolo (indicatore di pH). Tutte le Enterobacteriaceae fanno fermentare uno di questo
zuccheri, eccetto Shigella, Providencia, Proteus morganii, xylosio (-) Proteus rettgeri, Edwardsiella e xylosio (-) Salmonella
paratyphi A. Una reazione A negativa può quindi guidare l'identificazione di questi batteri.
•
Individuazione di lisina decarbossilasi (LDC): La decarbossilazione della lisina in cadaverina produce una colorazione
rossa delle colonie. Tutti i ceppi di Salmonella presentano LDC, eccetto S. paratyphi A.
•
Produzione di idrogen solfuro: La differenziazione tra Salmonella, Edwardsiella e Shigella si basa sulla produzione di
idrogen solfuro, causando una colorazione nera nel centro delle colonie.
3•
•
PRESENTAZIONE
Mezzo pronto all’uso:
- confezione da 20 piastre Petri (90 mm) (XLD)
Mezzo disidratato:
- flacone da 500 g
codice 41751
codice 69124
4- COMPOSIZIONE TEORICA (G/L DI ACQUA DISTILLATA)
L'agar X.L.D corrisponde al mezzo K della Farmacopea europea 4 (2002) (1).
Estratto di lievito
3
L-lisina (idroclocloridrato)
5
Saccarosio
7,5
Lattosio
7,5
Xylosio
3,5
Deossicolato di sodio
2,5
Cloruro di sodio
5
Tiosolfato di sodio
6,8
Citrato ferrico di ammonio
0,8
Rosso di fenolo
0,08
Agar
13,5
Preparazione del mezzo:
Omogeneizzare la polvere contenuta nel flacone.
Aggiungere 55 grammi di mezzo disidratato per un litro di acqua distillata sterile. Riscaldare leggermente, agitando spesso fino
alla bollitura. NON PROLUNGARE LA BOLLITURA. Trasferire immediatamente in un bagno d'acqua a 50°C. Se necessario,
regolare il pH a 7.4. Erogare su piastre Petri o in flaconi non appena il mezzo si sia sufficientemente raffreddato. NON USARE
AUTOCLAVE.
CONSERVAZIONE
Mezzo disidratato: flacone chiuso ermeticamente in un luogo asciutto a + 15-25°C.
La data di scadenza e il numero di lotto sono indicati sulla confezione.
5-
•
6- ISTRUZIONI
Materiale:
• Materiale fornito: mezzo X.L.D.
Inoculazione:
Inoculare eseguendo una strisciatura direttamente sul campione da esaminare (coltura di feci: si possono depositare le feci
direttamente sul mezzo) o dal brodo di arricchimento. Per le condizioni di conservazione di campioni biologici, fare riferimento
alle raccomandazioni vigenti (2).
Incubazione:
Incubare per 24 ore a 37°C.
Lettura:
L'aspetto delle colonie serve come guida per la diagnosi:
Colonie giallo opaco
fermentazione di almeno uno degli zuccheri e LDC (-)
Colonie rosse
LDC (+)
Colonie rosse con un centro nero
produzione di H2S:
- Escherichia coli
- Enterobacter
- Klebsiella
- Citrobacter
- Proteus
- Serratia
- Shigella
- Providencia
- Salmonella H2S(-)
- Salmonella
- Edwardsiella
PERFORMANCE / CONTROLLO DI QUALITÀ DEL TEST
Aspetto del mezzo disidratato: polvere arancione-rosa.
Le prestazioni di crescita del mezzo X.L.D. sono verificate usando i seguenti ceppi:
7-
•
•
CEPPI
Escherichia coli ATCC 25922
Salmonella enteritidis ATCC 13076
Shigella sonnei ATTC 25931
Providencia alcalifaciens ATCC 27970
Proteus mirabilis ATCC 25933
Enterobacter aerogenes ATCC 13048
Staphylococcus aureus ATCC 25923
RISULTATO DELLA COLTURA DOPO 24 ore a
37°C
Colonie gialle, inibizione parziale
Colonie rosse con un centro grigio
Colonie rosse
Colonie rosse
Colonie gialle con un centro nero
Colonie di colore giallo
Inibizione totale
8- CONTROLLO DI QUALITÀ DEL PRODUTTORE
Tutti i reagenti realizzati sono preparati in base al nostro Sistema di Assicurazione di Qualità dal ricevimento delle materie
prime, alla commercializzazione finale del prodotto. Ciascun lotto di prodotto finito è sottoposto a un controllo di qualità e viene
messo in commercio soltanto se risulta conforme ai criteri di approvazione predefiniti. La documentazione relativa alla
produzione e al controllo di ciascun singolo lotto è conservata presso Bio-Rad.
9•
•
•
•
•
•
101.
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4.
5.
6.
LIMITI DI UTILIZZO
Shigella sonnei, biotipo D, fermenti xylosio.
Il sodio deossicolato inibisce la crescita di alcuni ceppi di Enterobacteriaceae. Si raccomanda quindi l'inoculazione di un
mezzo tetrationato a Muller Kauffmann (56143) in parallelo.
La lisina decarbossilasi (L.D.C.) di alcuni ceppi di E. coli potrebbe lasciare inalterati i pH molto acidi ottenuti dalla
fermentazione degli zuccheri.
Alcune colonie di Salmonella (S. paratyphi A, S. cholerasuis, S. pullorum e S. gallinarum) senza un centro nero
assomigliano a colonie di Shigella.
Alcune colonie di Proteus possono presentare un centro nero.
Alcuni ceppi di Proteus e Pseudomonas possono dare colonie rosse.
BIBLIOGRAFIA
Pharmacopée Européenne, Addendum 4.2 de la IVe édition, 2002, p. 2841.
Basic Laboratory Procedures in Clinical Bacteriology. World Health Organization. Geneva.1991. 1st edition.
CHAWICK P. and al., Can. J. Microbiol., 1974, 20, p.1653-1664.
ROLLENDER M.A. and al., Americ. A. Clin. Path., 1969, 51, p.284-286.
TAYLOR W.I., Americ. J. Clin. Path., 1965, 44, p.471-475.
TAYLOR W.I. and SCHELART D., Appl. Microbiol., 1969, 18, p.393-395.
X.L.D.
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MEIO DE ISOLAMENTO SELECTIVO PARA ENTEROBACTÉRIAS
1- UTILIZAÇÃO PRETENDIDA
O meio Xilose-Lisina-Desoxicolato (X.L.D.) é um meio selectivo para o isolamento selectivo de Enterobactérias patogénicas,
especialmente Shigella e Salmonella, a partir de amostras com uma flora mista.
2- PRINCÍPIO
A selectividade deste meio baseia-se na presença de desoxicolato de sódio, o qual inibe o crescimento de bactérias Gram (+).
A diferenciação das Enterobactérias baseia-se nas seguintes características bioquímicas:
• Fermentação da xilose, lactose ou sacarose: a fermentação induz uma acidificação, a qual dá origem a uma coloração
amarela das colónias na presença de vermelho de fenol (indicador de pH). Todas as Enterobactérias fermentam um destes
açúcares, excepto a Shigella, Providencia, Proteus morganii, Proteus rettgeri xilose (-), Edwardsiella e Salmonella paratyphi
A xilose (-). Uma reacção negativa pode assim constituir uma orientação na identificação destas bactérias.
• Pesquisa de lisina descarboxilase (LDC): a descarboxilação da lisina em cadaverina induz uma coloração vermelha nas
colónias. Todas as estirpes de Salmonella possuem LDC, excepto a S. paratyphi A.
• Produção de sulfureto de hidrogénio: a diferenciação entre a Salmonella, a Edwardsiella e a Shigella baseia-se na
produção de sulfureto de hidrogénio, o qual dá origem a uma coloração negra no centro das colónias.
3- APRESENTAÇÃO
•
Meio pronto a usar:
Embalagem com 20 caixas de Petri (90 mm) (XLD)
• Meio desidratado:
Frasco de 500 g
código 41751
código 69124
4- COMPOSIÇÃO TEÓRICA (g/l de água destilada)
O meio gelosado X.L.D. corresponde ao meio K da Farmacopeia Europeia 4 (2002) (1).
Extracto de levedura
3
Cloridrato de L-Lisina
5
Sacarose
7,5
Lactose
7,5
Xilose
3,5
Desoxicolato de sódio
2,5
Cloreto de sódio
5
Tiossulfato de sódio
6,8
Citrato férrico amoniacal
0,8
Vermelho de fenol
0,08
Gelose
13,5
Preparação do meio:
Homogenize o pó contido no frasco.
Adicione 55 gramas de meio desidratado a 1 litro de água destilada estéril. Aqueça suavemente, agitando com frequência até
ferver. NÃO PROLONGUE O AQUECIMENTO. Transfira imediatamente para um banho-maria a 50°C. Caso seja necessário,
ajuste o pH a 7.4. Coloque em caixas de Petri ou frascos logo que o meio tenha arrefecido o suficiente. NÃO COLOQUE NA
AUTOCLAVE.
5- CONSERVAÇÃO
• Meio desidratado: frasco bem fechado em local seco a +15-25°C.
O prazo de validade e o número do lote estão indicados na embalagem.
6- INSTRUÇÕES
Material:
• Material fornecido: meio X.L.D.
Inoculação:
Inocule directamente a partir da amostra em estudo (cultura de fezes: as fezes podem ser directamente depositadas no meio)
ou a partir de um caldo de enriquecimento. Consulte as actuais recomendações para conservação de amostras biológicas (2).
Incubação:
Incube durante 24 horas a 37°C.
Leitura:
O aspecto das colónias poderá orientar o diagnóstico:
Colónias amarelas opacas
fermentação de, pelo menos, um dos açúcares e
LDC (-)
Colónias vermelhas
LDC (+)
Colónias vermelhas com um centro negro
produção de H2S
- Escherichia coli
- Enterobacter
- Klebsiella
- Citrobacter
- Proteus
- Serratia
- Shigella
- Providencia
- Salmonella H2S(-)
- Salmonella
- Edwardsiella
7- DESEMPENHO/CONTROLO DE QUALIDADE DO ENSAIO
• Aspecto do meio desidratado: pó cor de laranja-rosa.
• As taxas de crescimento do meio X.L.D. são verificadas com as seguintes estirpes:
ESTIRPES
Escherichia coli ATCC 25922
Salmonella enteritidis ATCC 13076
Shigella sonnei ATCC 25931
Providencia alcalifaciens ATCC 27970
Proteus mirabilis ATCC 25933
Enterobacter aerogenes ATCC 13048
Staphylococcus aureus ATCC 25923
RESULTADO DA CULTURA APÓS 24 horas a 37°C
Colónias amarelas, inibição parcial
Colónias vermelhas com um pálido centro negro
Colónias vermelhas
Colónias vermelhas
Colónias amarelas com um centro negro
Colónias amarelas
Inibição total
8- CONTROLO DE QUALIDADE DO FABRICANTE
Todos os reagentes fabricados são preparados de acordo com o nosso Sistema de Qualidade, desde a recepção das matérias
primas até à comercialização final do produto. Cada lote é submetido a avaliações de controlo de qualidade, sendo apenas
colocado no mercado se estiver em conformidade com os critérios de aceitação pré-definidos. Os registos relativos à produção
e controlo de cada lote são conservados pela Bio-Rad.
9- LIMITES PARA A SUA UTILIZAÇÃO
• A Shigella sonnei, biotipo D, fermenta a xilose.
• O desoxicolato de sódio inibe o crescimento de algumas estirpes de Enterobactérias. Assim, recomenda-se a inoculação
em paralelo do meio de Muller Kauffmann com tetrationato (56143).
• A lisina descarboxilase de algumas estirpes de E. coli pode não modificar o pH muito ácido obtido através da fermentação
dos açúcares.
• Algumas colónias de Salmonella (S. paratyphi A, S. cholerasuis, S. pullorum e S. gallinarum) sem o centro negro
assemelham-se às colónias de Shigella.
• Algumas colónias de Proteus podem apresentar um centro negro.
• Algumas estirpes de Proteus e Pseudomonas podem formar colónias vermelhas.
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REFERÊNCIAS
Pharmacopée Européenne, Addendum 4.2 de la IVe édition, 2002, p. 2841.
Basic Laboratory Procedures in Clinical Bacteriology. World Health Organization. Geneva.1991. 1st edition.
CHAWICK P. and al., Can. J. Microbiol., 1974, 20, p.1653-1664.
ROLLENDER M.A. and al., Americ. A. Clin. Path., 1969, 51, p.284-286.
TAYLOR W.I., Americ. J. Clin. Path., 1965, 44, p.471-475.
TAYLOR W.I. and SCHELART D., Appl. Microbiol., 1969, 18, p.393-395.
X.L.D.
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SELEKTIVT ISOLERINGSMEDIUM FÖR ENTEROBACTERIACEAE
1- ANVÄNDNINGSOMRÅDE
Xylos-lysin-deoxicholat-agar (X.L.D.) är ett selektivt medium för selektiv isolering av patogena Enterobacteriaceae, i synnerhet
Shigella och Salmonella från prover med blandad flora.
2- PRINCIP
Selektiviteten hos det här mediet baseras på närvaron av natriumdeoxicholat, som hämmar tillväxt av grampositiva bakterier.
Differentieringen av Enterobacteriaceae baseras på följande biokemiska egenskaper:
•
Jäsning av xylos, laktos eller sackaros: jäsning orsakar försurning, vilket ger kolonierna en gul färg i närvaro av fenolrött
(pH-indikator). Alla Enterobacteriaceae jäser en av dessa sockerarter, med undantag för Shigella, Providencia, Proteus
morganii, xylosnegativa Proteus rettgeri, Edwardsiella och xylosnegativa Salmonella paratyphi A. En negativ reaktion kan
därför ge vägledning vid identifiering av dessa bakterier.
•
Detektion av lysindekarboxylas (LDC): dekarboxylering av lysin till kadaverin framkallar en röd färg på kolonierna. Alla
stammar av Salmonella har LDC, med undantag för S. paratyphi A.
•
Produktion av vätesulfid: differentiering mellan Salmonella, Edwardsiella och Shigella baseras på produktionen av
vätesulfid som ger en svart färg i mitten av kolonierna.
3•
•
INNEHÅLL
Medium färdigt att använda:
ask med 20 Petri-skålar (90 mm) (XLD)
Dehydrerat medium:
flaska à 500 g
kod 41751
kod 69124
4- TEORETISK SAMMANSÄTTNING (i g/l destillerat vatten)
X.L.D.-agar överensstämmer med medium K enligt Europeiska farmakopén 4 (2002) (1).
Jästextrakt
3
L-lysinhydroklorid
5
Sackaros
7,5
Laktos
7,5
Xylos
3,5
Natriumdeoxicholat
2,5
Natriumklorid
5
Natriumtiosulfat
6,8
Ferriammoniumcitrat
0,8
Fenolrött
0,08
Agar
13,5
Beredning av mediet:
Homogenisera pulvret som finns i flaskan.
Tillsätt 55 gram dehydrerat medium till 1 liter sterilt destillerat vatten. Värm försiktigt. Skaka ofta tills kokpunkten nås.
FÖRLÄNG INTE UPPVÄRMNINGEN. Överför omedelbart till ett 50 °C vattenbad. Justera pH-värdet till 7.4 om nödvändigt.
Fördela i Petri-skålar eller flaskor så snart mediet har svalnat tillräckligt. FÅR INTE AUTOKLAVERAS.
FÖRVARING
Dehydrerat medium: tätt försluten flaska på torr plats i +15–25 °C.
Utgångsdatum och partinummer står på förpackningen.
5-
•
6- INSTRUKTIONER
Material:
•
Material som medföljer: X.L.D.-medium.
Inokulering:
Inokulera genom utstryk direkt från det prov som ska undersökas (avföringsodling: avföringsprov kan placeras direkt på mediet)
eller från en anrikningsbuljong. Följ aktuella rekommendationer vid förvaring av biologiska prover (2).
Inkubering:
Inkubera i 24 timmar i 37 °C.
Avläsning:
Koloniernas utseende kan utgöra vägledning för diagnosen:
Gula opak kolonier
jäsning av minst en av sockerarterna och LDC (-)
Röda kolonier
LDC (+)
Röda kolonier med svart centrum
H2S-produktion
- Escherichia coli
- Enterobacter
- Klebsiella
- Citrobacter
- Proteus
- Serratia
- Shigella
- Providencia
- H2S(-)Salmonella
- Salmonella
- Edwardsiella
TESTRESULTAT/KVALITETSKONTROLL AV TESTET
Det dehydrerade mediets utseende: orange-rosa pulver.
Tillväxtresultatet för X.L.D.-medium verifieras med följande stammar:
7•
•
STAMMAR
Escherichia coli ATCC 25922
Salmonella enteritidis ATCC 13076
Shigella sonnei ATCC 25931
Providencia alcalifaciens ATCC 27970
Proteus mirabilis ATCC 25933
Enterobacter aerogenes ATCC 13048
Staphylococcus aureus ATCC 25923
ODLINGSRESULTAT EFTER 24 timmar i 37 °C
Gula kolonier, delvis inhibition
Röda kolonier med svagt svart centrum
Röda kolonier
Röda kolonier
Gula kolonier med svart centrum
Gula kolonier
Total inhibition
8- TILLVERKARENS KVALITETSKONTROLL
Alla reagenser tillverkas och bereds i enlighet med vårt kvalitetssystem, från mottagandet av råmaterial till den slutliga
marknadsföringen av produkten. Varje parti genomgår en kvalitetskontroll och släpps endast ut på marknaden om det
överensstämmer med fördefinierade acceptanskriterier. Handlingar som beskriver produktion och kontroll av varje enskilt parti
sparas hos Bio-Rad.
9- ANVÄNDNINGENS BEGRÄNSNINGAR
•
Shigella sonnei, biotyp D, jäser xylos.
•
Natriumdeoxicholat hämmar tillväxten av vissa stammar av Enterobacteriaceae. Därför bör ett Muller Kauffmanntetrationatmedium (56143) inokuleras parallellt.
•
Lysindekarboxylasen hos vissa stammar av E. coli kan eventuellt inte modifiera det mycket sura pH som erhålls vid jäsning
av sockerarterna.
•
Vissa kolonier av Salmonella (S. paratyphi A, S. cholerasuis, S. pullorum och S. gallinarum) utan svart centrum liknar
kolonier av Shigella.
•
Vissa kolonier av Proteus kan uppvisa svart centrum.
•
Vissa stammar av Proteus och Pseudomonas kan ge röda kolonier.
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REFERENSER
Pharmacopée Européenne, Addendum 4.2 de la IVe édition, 2002, p. 2841.
Basic Laboratory Procedures in Clinical Bacteriology. World Health Organization. Geneva.1991. 1st edition.
CHAWICK P. and al., Can. J. Microbiol., 1974, 20, p.1653-1664.
ROLLENDER M.A. and al., Americ. A. Clin. Path., 1969, 51, p.284-286.
TAYLOR W.I., Americ. J. Clin. Path., 1965, 44, p.471-475.
TAYLOR W.I. and SCHELART D., Appl. Microbiol., 1969, 18, p.393-395.
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SELEKTIVT ISOLATIONSMEDIUM TIL ENTEROBAKTERIER
1- FORMÅL
Xyloselysin-deoxycholat (X.L.D.) agar er et selektivt medium til selektiv isolering af patogene Enterobakterier, især Shigella og
Salmonella fra prøver med blandet flora.
2- PRINCIP
Dette mediums selektivitet er baseret på tilstedeværelsen af natriumdeoxycholat, som hæmmer væksten af Grampositive
bakterier.
Differentieringen af Enterobacteriaceae er baseret på følgende biokemiske karakteristika:
• Gæring af xylose, lactose eller sucrose: gæringen medfører syredannelse, hvilket resulterer i gul farve i kolonierne, hvis
der findes phenolrødt (pH-indikator) i prøven.
• Alle Enterobacteriaceae gærer en af disse sukkerarter med undtagelse af Shigella, Providencia, Proteus morganii,
xylosenegativ Proteus rettgeri, Edwardsiella og xylosepositiv Salmonella paratyphi A. En negativ reaktion kan derfor være
vejledende i identifikation af disse bakterier.
• Påvisning af lysindecarboxylase (LDC): decarboxylering af lysin i cadaverin medfører en rød farve i kolonierne. Alle
stammer af Salmonella indeholder LDC med undtagelse af S. paratyphi A.
• Produktion af hydrogensulfid: differentiering mellem Salmonella, Edwardsiella og Shigella er baseret på produktionen af
hydrogensulfid, som forårsager en sort farve i koloniernes centrum.
3•
•
PRODUKTETS INDHOLD
Brugsklart medium:
Æske med 20 Petri-plader (90 mm) (XLD)
Dehydreret medium:
Flaske med 500 g
kode 41751
kode 69124
4- TEORETISK SAMMENSÆTNING (G/L DESTILLERET VAND)
X.L.D.-agar svarer til medium K i den Europæiske Farmakopé 4 (2002) (1).
Gærekstrakt
3
L-Lysinhydrochlorid
5
Sucrose
7,5
Lactose
7,5
Xylose
3,5
Natriumdeoxycholat
2,5
Natriumchlorid
5
Natriumthiosulfat
6,8
Ferriammoniumcitrat
0,8
Fenolrødt
0,08
Agar
13,5
Fremstilling af mediet:
Homogeniser pulveret i flasken.
Tilsæt 55 g dehydreret medium til 1 l sterilt destilleret vand. Opvarm forsigtigt under hyppig rysten, til det koger.
OPVARMNINGEN MÅ IKKE FORLÆNGES. Flyttes straks til et 50°C vandbad. Juster pH til 7.4, hvis det er nødvendigt. Fordel i
Petriplader eller flasker, så snart mediet er tilstrækkelig afkølet. MÅ IKKE AUTOKLAVERES.
OPBEVARING
Dehydreret medium: tæt forseglet flaske på et tørt sted ved +15-25°C.
Udløbsdatoen og partinummeret er angivet på emballagen.
5-
•
6- BRUGSVEJLEDNING
Materialer:
• Materialer, der medfølger: X.L.D.-medium.
Inokulation:
Inokuleres ved udstrygning direkte fra den prøve, der skal undersøges (fæceskultur: fæces kan deponeres direkte på mediet)
eller fra en berigelsessuppe. Kontroller de gældende anbefalinger for opbevaring af biologiske prøver (2).
Inkubation:
Inkuber i 24 timer ved 37°C.
Aflæsning:
Koloniernes udseende kan være rettesnor i diagnosen:
Gule uigennemsigtige kolonier
gæring af mindst en af sukkerarterne og LDCnegativ
Røde kolonier
LDC-positv
Røde kolonier med et sort centrum
H2S produktion
Escherichia coli
- Enterobacter
- Klebsiella
- Citrobacter
- Proteus
- Serratia
- Shigella
- Providencia
- H2S(-)Salmonella
- Salmonella
- Edwardsiella
KAPACITETS/KVALITETSKONTROL AF TESTEN
Dehydreret mediums præsentation: orange-pink pulver
X.L.D.-mediets vækstkapacitet kontrolleres med følgende stammer:
7-
•
•
STAMMER
Escherichia coli ATCC 25922
Salmonella enteritidis ATCC 13076
Shigella sonnei ATCC 25931
Providencia alcalifaciens ATCC 27970
Proteus mirabilis ATCC 25933
Enterobacter aerogenes ATCC 13048
Staphylococcus aureus ATCC 25923
DYRKNINGSRESULTAT EFTER 24 timer ved 37°C
Gule kolonier, delvis hæmning
Røde kolonier med et svagt sort centrum
Røde kolonier
Røde kolonier
Gule kolonier med et sort centrum
Gule kolonier
Total hæmning
8- PRODUCENTENS KVALITETSKONTROL
Alle producerede reagenser fremstilles ifølge vores kvalitetssikringssystem, lige fra modtagelsen af råmaterialerne til
markedsføringen af slutproduktet. Hvert parti af slutproduktet gennemgår kvalitetskontrol og markedsføres kun, hvis det opfylder
de foruddefinerede kvalitetskriterier. Dokumentation vedrørende produktion og kontrol af hvert parti opbevares inden for
virksomheden.
9- BEGRÆNSNINGER FOR BRUG
• Shigella sonnei, biotype D, gærer xylose.
• Natriumdeoxycholat hæmmer væksten af visse stammer af Enterobacteriaceae. Det anbefales derfor parallelt at inokulere
et Muller Kauffmann tetrathionatmedium (56143).
• Lysindecarboxylasen af visse E. coli-stammer modificerer muligvis ikke den meget sure pH, der opnås ved gæring af
sukkerarterne.
• Visse kolonier af Salmonella (S. paratyphi A, S. cholerasuis, S. pullorum og S. gallinarum) uden et sort centrum ligner
kolonier af Shigella.
• Visse kolonier af Proteus kan have et sort centrum.
• Visse stammer af Proteus and Pseudomonas kan give røde kolonier.
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REFERENCER
Pharmacopée Européenne, Addendum 4.2 de la IVe édition, 2002, p. 2841.
Basic Laboratory Procedures in Clinical Bacteriology. World Health Organization. Geneva.1991. 1st edition.
CHAWICK P. and al., Can. J. Microbiol., 1974, 20, p.1653-1664.
ROLLENDER M.A. and al., Americ. A. Clin. Path., 1969, 51, p.284-286.
TAYLOR W.I., Americ. J. Clin. Path., 1965, 44, p.471-475.
TAYLOR W.I. and SCHELART D., Appl. Microbiol., 1969, 18, p.393-395.
X.L.D.
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PODŁOŻE WYBIÓRCZE DO IZOLACJI PAŁECZEK Z RODZINY ENTEROBACTERIACEAE
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1- ZASTOSOWANIE
Wybiórcze podłoże ksyloza – lizyna – dezoksycholan agar (X.L.D.) przeznaczone jest do izolacji patogennych
pałeczek z rodziny Enterobacteriaceae, zwłaszcza pałeczek Salmonella i Shigella, z materiałów klinicznych
zawierających florę mieszaną.
2- ZASADA METODY
Właściwości wybiórcze nadaje podłożu dezoksycholan sodu, który hamuje wzrost bakterii Gram(+). Różnicowanie
pałeczek z rodziny Enterobacteriaceae opiera się na wykryciu następujących reakcji biochemicznych:
•
Fermentacja ksylozy, laktozy lub sacharozy: powoduje zakwaszenie podłoża i zmianę barwy wskaźnika
pH, czerwieni fenolowej; bakterie rosną w postaci żółtych kolonii. Wszystkie pałeczki z rodziny
Enterobacteriaceae są zdolne do fermentacji jednego z tych cukrów, z wyjątkiem pałeczek z rodzaju
Shigella, Providencia, Proteus morganii, ksylozo-ujemnych szczepów Proteus rettgeri, pałeczek
Edwardsiella oraz ksylozo-ujemnych szczepów Salmonella Paratyphi A. Ujemna reakcja wskazuje na jeden
z wymienionych gatunków.
•
Detekcja dekarboksylazy lizyny (LDC): o dekarboksylacji lizyny do kadaweryny świadczy czerwona barwa
kolonii. Jest to reakcja charakterystyczna dla wszystkich pałeczek Salmonella, z wyjątkiem S. paratyphi A.
•
Wytwarzanie siarkowodoru: pozwala na zróżnicowanie pałeczek Salmonella, Edwardsiella i Shigella. O
powstawaniu siarkowodoru świadczy czarne zabarwienie środka kolonii.
3- POSTAĆ PODŁOŻA
•
Podłoże gotowe do użycia:
- opakowanie 20 płytek Petriego (90 mm)
•
Podłoże w proszku:
- opakowanie 500 g
nr kat. 41751
nr kat. 69124
4- PODSTAWOWE SKŁADNIKI (g/l)
Podłoże agarowe X.L.D. odpowiada podłożu K w 4 Farmakopei Europejskiej (2002).
Wyciąg drożdżowy
L-lizyna HCl
Sacharoza
Laktoza
Ksyloza
Dezoksycholan sodu
Chlorek sodu
Tiosiarczan sodu
Cytrynian żelazowo-amonowy
Czerwień fenolowa
Agar
3
5
7.5
7.5
3.5
2.5
5
6.8
0.8
0.08
13.5
Przygotowanie podłoża:
Przed użyciem wstrząsnąć suche podłoże w pojemniku.
Rozpuścić 55 g proszku w 1 litrze jałowej wody destylowanej. Ogrzewać, często mieszając, do zagotowania.
UNIKAĆ ZBYT DŁUGIEGO OGRZEWANIA. Przenieść jak najszybciej do łaźni wodnej o temp. 50°C. Jeśli
trzeba, doprowadzić pH do 7.4. Po schłodzeniu rozlać na płytki lub w butelki. NIE AUTOKLAWOWAĆ.
5- PRZECHOWYWANIE
•
Podłoże w proszku: w szczelnie zamkniętym pojemniku, w suchym miejscu, w temperaturze +15 do 25°C.
Data ważności i numer serii znajduje się na opakowaniu.
6- PROCEDURA
Dostarczony materiał:
•
podłoże X.L.D.
Inokulacja:
Badany materiał kliniczny wysiać bezpośrednio na podłoże (kał: próbka może być posiana bezpośrednio na
podłoże) lub zaszczepić podłoże hodowlą uzyskaną na podłożu namnażającym. Należy zapoznać się z
zaleceniami dotyczącymi przechowywania materiałów biologicznych. (2).
1
Inkubacja:
Płytki inkubować przez 24 godziny w temp. 37°C.
Odczyt:
Na podstawie zabarwienia kolonii:
Kolonie żółte, matowe
Fermentacja co najmniej jednego
z cukrów oraz LDC(-)
Kolonie czerwone
LDC (+)
Kolonie czerwone z czarnymi środkami
Wytwarzanie H2S
-
Escherichia coli
Enterobacter
Klebsiella
Citrobacter
Proteus
Serratia
Shigella
Providencia
Salmonella H2S (-)
Salmonella
Edwardsiella
7- KONTROLA JAKOŚCI
•
Podłoże w proszku: ma pomarańczowo-różową barwę.
•
Morfologia kolonii szczepów wzorcowych na podłożu X.L.D.:
SZCZEP
Escherichia coli ATCC 25922
Salmonella enteritidis ATCC 13076
Shigella sonnei ATCC 25931
Providencia alcalifaciens ATCC 27970
Proteus mirabilis ATCC 25933
Enterobacter aerogenes ATCC 13048
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Wynik po inkubacji w temp. 37°C przez 24 godz.
kolonie żółte, częściowe zahamowanie
kolonie czerwone z czarnym środkiem
kolonie czerwone
kolonie czerwone
kolonie żółte z czarnym środkiem
kolonie żółte
całkowite zahamowanie
8- KONTROLA JAKOŚCI PRODUCENTA
Każdy produkt Bio-Rad został przygotowany zgodnie z systemem jakości, poczynając od materiałów
wyjściowych, aż do ostatecznego produktu komercyjnego.
Każda seria ostatecznego produktu podlega oznaczeniu kontrolnemu i jest dopuszczona do użytku, jeśli spełnia
wymagane kryteria. Bio-Rad posiada protokoły produkcji i kontroli jakości każdej serii.
9- OGRANICZENIA METODY
•
Szczepy Shigella sonnei biotypu D fermentują ksylozę.
•
Dezoksycholan sodu może hamować wzrost niektórych szczepów pałeczek z rodziny Enterobacteriaceae.
Zaleca się równoczesne zaszczepienie podłoża Muller Kauffmann Tetrathionate Medium (nr kat. 56143).
•
Dekarboksylacja lizyny przez niektóre szczepy E.coli może nie powodować zmiany wysoce kwaśnego pH,
powstającego w wyniku fermentacji cukrów.
•
Kolonie niektórych szczepów pałeczek Salmonella: S.paratyphi A, S.cholerasuis, S.pullorum, S.gallinarum,
nie posiadają czarnego środka, przez co przypominają kolonie pałeczek Shigella.
•
Niektóre szczepy pałeczek Proteus wytwarzają kolonie z czarnymi środkami.
•
Niektóre szczepy pałeczek Proteus oraz pałeczki Pseudomonas rosną w postaci czerwonych kolonii.
10- BIBLIOGRAFIA
1. Pharmacopée Européenne, Addendum 4.2 de la IVe édition, 2002, p. 2841.
2. Basic Laboratory Procedures in Clinical Bacteriology. World Health Organization. Geneva.1991. 1st edition.
3. CHAWICK P. and al., Can. J. Microbiol., 1974, 20, p.1653-1664.
4. ROLLENDER M.A. and al., Americ. A. Clin. Path., 1969, 51, p.284-286.
5. TAYLOR W.I., Americ. J. Clin. Path., 1965, 44, p.471-475.
6. TAYLOR W.I. and SCHELART D., Appl. Microbiol., 1969, 18, p.393-395
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11/2003
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