SCHAEDLER + VITAMIN K3 SCHAEDLER 63959 - 69624 AGAR / ISOLATION MEDIUM FOR ANAEROBIC BACTERIA 1- INTENDED USE Under certain circumstances, anaerobic bacteria of the endogenous flora and anaerobic bacteria in the soil can be transformed into pathogens responsible for severe infections (gynaecological, abdominal, upper airways, and oral cavity infections, etc.). Schaedler agar and Schaedler + Vitamin K3 agar are used for the isolation of anaerobic bacteria. 2- PRINCIPLE Schaedler agar is a medium enriched in growth factors such as haemin, yeast extract and menadione (vitamin K3). It contains reducing agents such as cysteine and glucose. This agar is perfectly adapted to the growth of all anaerobic bacteria, including fastidious species. 3- HOW SUPPLIED • Ready to use medium: Schaedler + Vitamin K3 agar - box of 20 Petri dishes (90 mm) (SCH) code 63959 • Dehydrated medium: Schaedler agar - bottle of 500g code 69624 4- THEORETICAL COMPOSITION (g/l of distilled water) Schaedler agar and Schaedler + Vitamin K3 agar are prepared from Schaedler broth according to the formula described by Schaedler, Dubos and Costello (1). Tryptone-casein-soy broth 10 Special peptone 5 Yeast extract 5 TRIS buffer 3 Cysteine hydrochloride 0.4 Haemin 0.01 Glucose 5 Agar 15 The formula of ready to use Schaedler + Vitamin K3 agar also contains: Vitamin K3 0.0005 g/l Horse blood 5.5%. Preparation of the medium: Homogenize the powder contained in the bottle. Add 42 grams of dehydrated medium to 1 litre of sterile distilled water. Boil until complete dissolution. If necessary, adjust the pH to 7.6. Sterilize in the autoclave at 121°C for 15 minutes. At the time of use, add to the sterile medium cooled to 45-50°C: • 0.005% of vitamin K3 sterile solution, • 5% of horse blood, Selective mixtures can also be added. The medium must not be oxygenated. 5- STORAGE • Ready to use medium: at +2-8°C. • Dehydrated medium: tightly sealed bottle in a dry place at +15-25°C. The expiry date and batch number are indicated on the packaging. 6- INSTRUCTIONS Material: • Material provided: Schaedler agar, Schaedler + Vitamin K3 agar. • Specific material not provided: - 0.005% sterile vitamin K3 solution - Horse blood (code 56641 - 56642). Inoculation: Inoculate by streaking directly from the specimen to be examined (wounds, abscesses, blood cultures, aspiration fluids (pleural, pericardial, joint), tracheal aspirations). The specimen must be processed as soon as possible after collection. If the specimen cannot be sent to the laboratory within 30 minutes, a transport medium for anaerobic bacteria must be used (TGV ANAER code 50458). Incubation: Preliminary incubation (before inoculation) of the agars in an anaerobic jar increases the isolation performances. After inoculation, the plates are incubated for 48 hours at 37°C in an anaerobic atmosphere. If the culture is negative after 48 hours, continue incubation for another 24 hours. 7- PERFORMANCE/QUALITY CONTROL OF THE TEST • Appearance of the ready to use medium: red agar. • Appearance of the dehydrated medium: beige powder. • The growth performances of Schaedler agar are verified with the following strains: STRAINS Clostridium perfringens ATCC 12924 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Propionibacterium acnes CIP 6042 CULTURE RESULT AFTER 24 to 48 hours at 37°C Growth Growth Growth The growth performances of Schaedler + Vitamin K3 agar are verified with the following strains: STRAINS Clostridium perfringens ATCC 13124 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Peptostreptococcus anaerobius CIP 602 Fusobacterium nucleatum CIP 101130 CULTURE RESULT AFTER 24 to 48 hours at 37°C Growth Growth Growth Growth 8- QUALITY CONTROL OF THE MANUFACTURER All manufactured reagents are prepared according to our Quality System, starting from reception of raw material to the final commercialization of the product. Each lot is submitted to quality control assessments and is only released to the market, after conforming to pre-defined acceptance criteria. The records relating to production and control of each single lot are kept within Bio-Rad. 9• • • • LIMITS OF USE This medium can be used for the enumeration of Clostridium strains from pathological specimens. Some strains may not grow on this medium due to their nutritional requirements. β-haemolytic Streptococci can present α haemolysis due to the high glucose concentration of the medium. Complementary tests must be performed to identify the species of the strain isolated. 10- REFERENCES 1. SCHAEDLER, R.W., DUBOS, R., COSTELLO, R. 1965. J. Exp. Med. 122 : 59- 66. SCHAEDLER + VIT K3 SCHAEDLER 63959 69624 GÉLOSE / MILIEU D'ISOLEMENT DES BACTÉRIES ANAÉROBIES IVD 1. APPLICATION Les bactéries anaérobies de la flore endogène et les bactéries anaérobies telluriques sont capables, dans certaines circonstances, de se transformer en agents pathogènes responsables de processus infectieux sévères (infections gynécologiques, abdominales, infections des voies aériennes supérieures, de la cavité buccale..). La gélose Schaedler et la gélose Schaedler + Vit K3 sont utilisée pour l’isolement des bactéries anaérobies. 2. PRINCIPE La gélose Schaedler est un milieu enrichi en facteurs de croissance tels que l’hémine, l'extrait de levure et la ménadione (vitamine K3). Il contient des agents réducteurs comme la cystéine et le glucose. Cette gélose est parfaitement adaptée à la croissance de toutes les bactéries anaérobies y compris les espèces exigeantes. 3. PRÉSENTATION • Milieu prêt à l’emploi : gélose Schaedler + Vit K3 - coffret de 20 boites de Petri (90 mm) (SCH) code 63959 • Milieu déshydraté : gélose Schaedler - flacon de 500g code 69624 4. COMPOSITION THÉORIQUE (en g/l d’eau distillée) La gélose Schaedler et la gélose Schaedler + Vit K3 sont préparées à partir d'un bouillon Schaedler selon la formule décrite par Schaedler, Dubos et Costello (1). Bouillon trypto-caséine-soja 10 Peptone spéciale 5 Extrait de levure 5 Tampon Tris 3 Chlorhydrate de cystéine 0,4 Hémine 0,01 Glucose 5 Agar 15 La formule de la gélose Schaedler + Vit K3 prête à l'emploi comprend en outre : Vitamine K3 0,0005 g/l Sang de cheval 5,5 % Préparation du milieu : Homogénéiser la poudre contenue dans le flacon. Mettre 42 grammes de milieu déshydraté dans 1 litre d’eau distillée stérile. Faire bouillir jusqu’à dissolution complète. Ajuster le pH à 7,6 si nécessaire. Stériliser à l’autoclave à 121 °C pendant 15 minutes. Au moment de l’emploi ajouter au milieu stérile et refroidi à 45-50°C : • 0,005% de vitamine K3 en solution stérile, • 5% de sang de cheval, Il est également possible d'ajouter des mélanges sélectifs. Le milieu ne doit pas être oxygéné. 1 5. CONSERVATION • Milieu prêt à l'emploi : à + 2 - 8°C. • Milieu déshydraté : flacon soigneusement fermé dans un endroit sec à +15-25°C. La date de péremption et le numéro de lot sont indiqués sur le conditionnement. 6. UTILISATION Matériel : • Matériel fourni : milieu Schaedler, milieu Schaedler + Vit K3. • Matériel spécifique non fourni : - Solution stérile de vitamine K3 à 0,005%. - Sang de cheval (code 56641-56642). Ensemencement : Ensemencer en stries directement à partir de l'échantillon à étudier (plaies, abcès, hémocultures, liquides de ponction (pleural, péricardique, articulaire), aspirations trachéales). Le prélèvement doit être techniqué le plus rapidement possible après son exécution. Si le délai de transfert du prélèvement au laboratoire excède 30 minutes, il est indispensable d’utiliser un milieu de transport pour germes anaérobies (TGV ANAER code 50458). Incubation : Une incubation préalable (avant ensemencement) des géloses en jarre anaérobie accroît les performances d’isolement. Une fois ensemencées, les boîtes sont placées 48 heures à 37°C en atmosphère anaérobie. Si la culture est négative en 48 heures, prolonger l'incubation de 24 heures. 7. PERFORMANCES / CONTRÔLE QUALITÉ DU TEST • Aspect du milieu prêt à l’emploi : gélose rouge. • Aspect du milieu déshydraté : poudre beige. • Les performances culturales du milieu Schaedler sont contrôlées à l’aide des souches suivantes : SOUCHES Clostridium perfringens ATCC 12924 Bacteroïdes fragilis ATCC 25285 Propionibacterium acnes CIP 6042 RÉSULTAT DE LA CULTURE en 24-48H à 37°C Croissance Croissance Croissance • Les performances culturales du milieu Schaedler + Vit K3 sont contrôlées à l’aide des souches suivantes : SOUCHES Clostridium perfringens ATCC 13124 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Peptostreptococcus anaerobius CIP 602 Fusobacterium nucleatum CIP 101130 RÉSULTAT DE LA CULTURE en 24-48H à 37°C Croissance Croissance Croissance Croissance 8. CONTROLE QUALITÉ DU FABRICANT Tous les produits fabriqués et commercialisés par la société Bio-Rad sont placés sous un système d'assurance qualité de la réception des matières premières jusqu'à la commercialisation des produits finis. Chaque lot de produit fini fait l'objet d'un contrôle de qualité et n'est commercialisé que s'il est conforme aux critères d'acceptation. La documentation relative à la production et au contrôle de chaque lot est conservée par le fabricant. 9. LIMITES D’UTILISATION • Ce milieu peut être utilisé pour le dénombrement des Clostridium à partir des produits pathologiques. • Du fait de leurs exigences nutritionnelles, certains micro-organismes peuvent ne pas se développer sur ce milieu. • Les streptocoques ß-hémolytiques peuvent présenter une hémolyse de type α du fait de la forte concentration en glucose dans le milieu. • Il est nécéssaire de faire des tests complémentaires pour une identification d'espèce de la souche isolée. 10.RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES 1.SCHAEDLER, R.W., DUBOS, R., COSTELLO, R. 1965. J. Exp. Med. 122 : 59- 66. Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33 07/2003 code: 18036 - A4 2 SCHAEDLER + VITAMIN K3 SCHAEDLER 63959 - 69624 AGAR / MEDIO DE AISLAMIENTO PARA BACTERIAS ANAEROBIAS 1- USO PREVISTO En determinadas circunstancias, las bacterias anaerobias de la flora endógena y las bacterias anaerobias de la suciedad pueden transformarse en patógenos responsables de infecciones graves (ginecológicas, abdominales, de las vías aéreas superiores e infecciones de la cavidad oral, etc.) El agar Schaedler y el agar Schaedler + Vitamina K3 se usan para el aislamiento de bacterias anaerobias. 2- PRINCIPIO El agar Schaedler es un medio enriquecido en factores de crecimiento como la hemina, el extracto de levadura y la menadiona (vitamina K3). Contiene agentes reductores como cisteína y glucosa. Este agar está perfectamente adaptado al crecimiento de todas las bacterias anaerobias, incluidas las especies exigentes. 3- CÓMO SE SUMINISTRA • Medio listo para usar: Agar Schaedler + Vitamin K3 - caja de 20 placas de Petri (90 mm) (SCH) código 63959 • Medio deshidratado: Agar Schaedler - frasco de 500 g código 69624 4- COMPOSICIÓN TEÓRICA (g/l de agua destilada) El agar Schaedler y el agar Schaedler + Vitamina K3 se elaboran a partir de caldo Schaedler según la fórmula descrita por Schaedler, Dubos y Costello (1). Caldo triptona-caseína-soja 10 Peptona especial 5 Extracto de levadura 5 Tampón TRIS 3 Clorhidrato de cisteína 0,4 Hemina 0,01 Glucosa 5 Agar 15 La fórmula del agar Schaedler + Vitamina K3 listo para usar contiene también: Vitamina K3 0,0005 g/l Sangre de caballo 5,5%. Preparación del medio: Homogeneice el polvo contenido en el frasco. Añada 42 gramos de medio deshidratado a un litro de agua destilada estéril. Hierva hasta que esté completamente disuelto. Si es necesario, ajuste el pH a 7,6. Esterilice en el autoclave a 121° durante 15 minutos. En el momento de su uso, añada el medio estéril enfriado a 45-50°C. • 0,005% de solución estéril de vitamina K3, • sangre de caballo al 5%, También pueden añadirse mezclas selectivas. No debe oxigenarse el medio. 5- CONSERVACIÓN • Medio listo para usar: a +2-8°C • Medio deshidratado: frasco cerrado herméticamente en un lugar seco a +15-25°C. La fecha de caducidad y el número de lote están indicados en el envasado. 6- INSTRUCCIONES Material: • Material suministrado: Agar Schaedler, Agar Schaedler + Vitamina K3. • Material específico no suministrado: - Solución de vitamina K3 estéril al 0,005% - Sangre de caballo (código 56641 - 56642). Inoculación: Inocule tomando directamente de la muestra a examinar (heridas, abscesos, hemocultivos, líquidos de aspiración (pleural, pericárdico, articular), aspiraciones traqueales). La muestra debe procesarse cuanto antes después de la recogida. Si no puede enviarse la muestra al laboratorio en 30 minutos, debe usarse un medio de transporte para bacterias anaerobias (TGV ANAER código 50458). Incubación: La incubación preliminar (antes de la inoculación) de los agares en un recipiente de anaerobios aumenta los rendimientos de aislamiento. Después de la inoculación, las placas se incuban durante 48 horas a 37°C en una atmósfera anaerobia. Si el cultivo es negativo después de 48 horas, continúe la incubación durante otras 24 horas. 7- RENDIMIENTO / CONTROL DE CALIDAD DE LA PRUEBA • Aspecto del medio listo para usar: agar rojo. • Aspecto del medio deshidratado: polvo beige. • Los rendimientos de crecimiento del agar Schaedler se verifican con las siguientes cepas: CEPAS Clostridium perfringens ATCC 12924 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Propionibacterium acnes CIP 6042 RESULTADO DEL CULTIVO DESPUÉS DE 24 a 48 horas a 37 °C Crecimiento Crecimiento Crecimiento Los rendimientos de crecimiento del agar Schaedler + Vitamina K3 se verifican con las siguientes cepas: CEPAS Clostridium perfringens ATCC 13124 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Peptostreptococcus anaerobius CIP 602 Fusobacterium nucleatum CIP 101130 RESULTADO DEL CULTIVO DESPUÉS DE 24 a 48 horas a 37 °C Crecimiento Crecimiento Crecimiento Crecimiento 8- CONTROL DE CALIDAD DEL FABRICANTE Todos los reactivos fabricados se elaboran según nuestro sistema de calidad, que va desde la recepción de las materias primas hasta la comercialización final del producto. Cada lote se somete a valoraciones de control de calidad y sale al mercado sólo cuando está de acuerdo con los criterios de aceptación predefinidos. Los registros relativos a la producción y al control de cada lote se conservan en Bio-Rad. 9• • • • LÍMITES DE USO Este medio puede usarse para la enumeración de cepas de Clostridium de muestras patológicas. Debido a los requisitos nutricionales, algunas cepas pueden no crecer en este medio. Los Streptococci β-hemolíticos pueden presentar α hemólisis debido a la elevada concentración de glucosa en el medio. Deben realizarse pruebas complementarias para identificar la especie de la cepa aislada. 10- BIBLIOGRAFÍA 1. SCHAEDLER, R.W., DUBOS, R., COSTELLO, R. 1965. J. Exp. Med. 122 : 59- 66. SCHAEDLER + VITAMIN K3 SCHAEDLER 63959 - 69624 AGAR / ISOLATIONSMEDIUM FÜR ANAEROBE BAKTERIEN 1- VERWENDUNGSZWECK Unter bestimmten Bedingungen können anaerobe Bakterien der endogenen Flora sowie anerobe Bakterien im Boden zu Erregern verschiedener Infektionen werden (gynäkologische, abdominale, orale Infektionen, Infektionen der oberen Atemwege sowie Mundhöhleninfektionen usw.). Schaedler-Agar und Schaedler + Vitamin K3-Agar werden für die Isolierung anaerober Bakterien verwendet. 2- PRINZIP Schaedler-Agar ist ein mit Wachstumsfaktoren wie Hämin, Hefeextrakt und Menadion (Vitamin K3) angereichertes Medium. Es enthält Reduktionsmittel wie Cystein und Glukose. Dieser Agar eignet sich perfekt für das Wachstum aller anaerober Bakterien, einschließlicher anspruchsvoller Gattungen. 3- • • DARREICHUNGSFORM Gebrauchsfertiges Medium: Schaedler + Vitamin K3-Agar - Packung mit 20 Petrischalen (90 mm) (SCH) Kat.-Nr. 63959 Dehydriertes Medium: Schaedler-Agar - Fläschchen für 500g Kat.-Nr. 69624 4- THEORETISCHE ZUSAMMENSETZUNG (g/l destilliertes Wasser) Schaedler-Agar und Schaedler + Vitamin K3-Agar wird anhand der von Schaedler, Dubos und Costello (1) beschriebenen Formel aus der Schaedler-Bouillon hergestellt. Trypton-Casein-Soja-Bouillon 10 Spezial-Pepton 5 Hefeextrakt 5 TRIS-Puffer 3 Cystein-Hydrochlorid 0,4 Hämin 0,01 Glukose 5 Agar 15 Die gebrauchsfertige Formel des Schaedler + Vitamin K3-Agars enthält darüber hinaus: Vitamin K3 0,0005 g/l Pferdeblut 5,5% Vorbereitung des Mediums: Das in der Flasche enthaltene Pulver homogenisieren. 42 g des dehydrierten Mediums in 1 l steriles destilliertes Wasser geben. Bis zur vollständigen Auflösung kochen lassen. Falls nötig, den pH-Wert auf 7,6 einstellen. In einem Autoklaven 15 Minuten bei 121°C sterilisieren. Bei Gebrauch dem sterilen, auf 45-50°C abgekühlten Medium Folgendes zusetzen: • 0,005% sterile Vitamin K3-Lösung, • 5% Pferdeblut, Selektive Mischungen können auch hinzugefügt werden. Dem Medium darf kein Sauerstoff zugesetzt werden. LAGERUNG Gebrauchsfertiges Medium: bei +2 - 8°C. Dehydriertes Medium: in fest verschlossenen Gefäßen an einem trockenen Ort bei +15 - 25°C. Das Verfallsdatum und die Chargennummer sind auf der Verpackung angegeben. 5- • • 6- GEBRAUCHSANWEISUNG Material: • Geliefertes Material: Schaedler-Agar, Schaedler + Vitamin K3-Agar. • Zusätzlich benötigtes Material: - 0,005% sterile Vitamin K3-Lösung - Pferdeblut (Kat.-Nr. 56641 - 56642). Beimpfung: Dieses Medium kann direkt mit Ausstrich der Testprobe aus Wunden, Abszessen, Blutkulturen, Aspiraten (Pleural-, Perikardund Gelenkflüssigkeit) oder Trachealaspiraten beimpft werden. Die Probe muss nach der Entnahme so schnell wie möglich verwendet werden. Kann die Probe nicht innerhalb von 30 Minuten an das Labor geschickt werden, muss ein Transportmedium für anaerobe Bakterien verwendet werden (TGV ANAER Kat.-Nr. 50458). Inkubation: Eine Vorinkubation (vor der Beimpfung) des Agars in einem anaeroben Gefäß erhöht die Isolationsleistung. Nach der Beimpfung werden die Platten 48 Stunden bei 37°C in anaerober Atmosphäre inkubiert. Bei negativer Kultur nach 48 Stunden, die Inkubation weitere 24 Stunden fortsetzen. 7- • • • LEISTUNG/QUALITÄTSKONTROLLE DES TESTS Erscheinung des gebrauchsfertigen Mediums: roter Agar. Erscheinung des dehydrierten Mediums: beigefarbenes Pulver. Die Leistungsmerkmale des Wachstums des Schaedler-Agars werden mit folgenden Stämmen überprüft: STÄMME Clostridium perfringens ATCC 12924 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Propionibacterium acnes CIP 6042 KULTURERGEBNIS NACH 24 bis 48 Stunden bei 37°C Wachstum Wachstum Wachstum Die Leistungsmerkmale des Wachstums des Schaedler + Vitamin K3 -Agars werden mit folgenden Stämmen überprüft: STÄMME Clostridium perfringens ATCC 13124 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Peptostreptococcus anaerobius CIP 602 Fusobacterium nucleatum CIP 101130 KULTURERGEBNIS 24 bis 48 Stunden bei 37°C Wachstum Wachstum Wachstum Wachstum 8- QUALITÄTSKONTROLLE DES HERSTELLERS Alle von der Firma Bio-Rad hergestellten Reagenzien unterliegen einem Qualitätssicherungssystem vom Rohstoffeingang bis zur Vermarktung der Fertigprodukte. Jede Fertigproduktcharge wird einer Qualitätskontrolle unterzogen und nur dann verkauft, wenn sie den Freigabekriterien entspricht. Die Unterlagen bezüglich Herstellung und Kontrolle der einzelnen Chargen werden bei Bio-Rad aufbewahrt. 9• • • • GRENZEN DES TESTS Dieses Medium kann für die Zählung von Clostridium-Stämmen von pathologischen Proben verwendet werden. Aufgrund spezifischer Anforderungen an die Nährstoffe wachsen manche Stämme auf diesem Medium unter Umständen nicht. β-hämolytische Streptokokken können aufgrund der hohen Glukose-Konzentration des Mediums eine α-Hämolyse aufweisen. Zur Identifizierung der Spezies des isolierten Stammes müssen zusätzliche Tests durchgeführt werden. 10- LITERATUR 1. SCHAEDLER, R.W., DUBOS, R., COSTELLO, R. 1965. J. Exp. Med. 122 : 59- 66. SCHAEDLER + VITAMIN K3 SCHAEDLER 63959 - 69624 AGAR / MEZZO DI ISOLAMENTO PER BATTERI ANAEROBICI 1- USO PREVISTO In alcune circostanze, i batteri anaerobici della flora endogena e i batteri anaerobici presenti nel terreno possono trasformarsi in agenti patogeni responsabili di gravi infezioni (infezioni ginecologiche, addominali, delle vie respiratorie superiori e della cavità orale, ecc.). L'agar Schaedler e l'agar Schaedler + vitamina K3 si utilizzano per l'isolamento dei batteri anaerobici. 2- PRINCIPIO L'agar Schaedler è un mezzo arricchito con fattori di crescita come emina, estratto di lievito e menadione (vitamina K3). Contiene agenti riducenti come cisteina e glucosio. Questo agar si adatta perfettamente alla crescita di tutti i batteri anaerobi, incluse le specie con particolari esigenze di nutrizione. 3- • • PRESENTAZIONE Mezzo pronto all’uso: Agar Schaedler + vitamina K3 - scatola da 20 piastre Petri (90 mm) (SCH) codice 63959 Mezzo disidratato: agar Schaedler - flacone da 500 g codice 69624 4- COMPOSIZIONE TEORICA (G/L DI ACQUA DISTILLATA) L'agar Schaedler e l'agar Schaedler + vitamina K3 si preparano con il brodo Schaedler secondo la formula descritta da Schaedler, Dubos e Costello (1). Brodo di triptone-caseina-soia 10 Peptone speciale 5 Estratto di lievito 5 Tampone TRIS 3 Cloridrato di cisteina 0,4 Emina 0,01 Glucosio 5 Agar 15 La formula dell'agar Schaedler + vitamina K3 pronto all'uso contiene anche: vitamina K3 0,0005 g/l sangue di cavallo 5,5%. Preparazione del mezzo: Omogeneizzare la polvere contenuta nel flacone. Aggiungere 42 grammi di mezzo disidratato per un litro di acqua distillata sterile. Bollire fino al completo scioglimento. Se necessario, regolare il pH a 7,6. Sterilizzare in autoclave a 121°C per 15 minuti. Al momento dell'utilizzo aggiungere il mezzo sterile raffreddato a 45-50°C: • 0,005% di soluzione sterile di vitamina K3, • 5% di sangue di cavallo, Si possono aggiungere miscele selettive. Non ossigenare il mezzo. CONSERVAZIONE Mezzo pronto all’uso: a +2-8°C Mezzo disidratato: flacone chiuso ermeticamente in un luogo asciutto a + 15-25°C. La data di scadenza e il numero di lotto sono indicati sulla confezione. 5- • • 6- ISTRUZIONI Materiale: • Materiale fornito: agar Schaedler, agar Schaedler + vitamina K3. • Materiale specifico non fornito: - 0,005% soluzione di vitamina K3 sterile - sangue di cavallo (codice 56641 - 56642) Inoculazione: Inoculare eseguendo una strisciatura direttamente sul campione da esaminare (ferite, ascessi, colture ematiche, fluidi di aspirazione (pleurico, pericardico, articolare), o aspirazioni tracheali). Il campione deve essere elaborato il più presto possibile successivamente al prelievo. Se il campione non può essere mandato al laboratorio entro 30 minuti, sarà necessario utilizzare un mezzo per il trasporto di batteri anaerobici (TGV ANAER codice 50458). Incubazione: L'incubazione preliminare degli agar (prima dell'inoculazione) in un barattolo anaerobico aumenta le caratteristiche di isolamento. Dopo l'inoculazione le piastre sono incubate per 48 ore a 37°C in atmosfera anaerobica. Se dopo 48 ore la coltura è negativa, proseguire l'incubazione per altre 24 ore. 7- • • • PERFORMANCE / CONTROLLO DI QUALITÀ DEL TEST Aspetto del mezzo pronto all’uso: agar di colore rosso. Aspetto del mezzo disidratato: polvere di colore beige. Le prestazioni di crescita dell'agar Schaedler sono verificate sui ceppi seguenti: CEPPI RISULTATO DELLA COLTURA DOPO 24 - 48 ore a 37°C Clostridium perfringens ATCC 12924 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Propionibacterium acnes CIP 6042 Crescita Crescita Crescita Le prestazioni di crescita dell'agar Schaedler + vitamina K3 sono verificate sui ceppi seguenti: CEPPI RISULTATO DELLA COLTURA DOPO 24 - 48 ore a 37°C Clostridium perfringens ATCC 13124 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Peptostreptococcus anaerobius CIP 602 Fusobacterium nucleatum CIP 101130 Crescita Crescita Crescita Crescita 8- CONTROLLO DI QUALITÀ DEL PRODUTTORE Tutti i reagenti realizzati sono preparati in base al nostro Sistema di Assicurazione di Qualità dal ricevimento delle materie prime, alla commercializzazione finale del prodotto. Ciascun lotto di prodotto finito è sottoposto a un controllo di qualità e viene messo in commercio soltanto se risulta conforme ai criteri di approvazione predefiniti. La documentazione relativa alla produzione e al controllo di ciascun singolo lotto è conservata presso Bio-Rad. 9• • • • LIMITI DI UTILIZZO Si può utilizzare questo mezzo per calcolare i ceppi di Clostridium da campioni patologici. Alcuni ceppi potrebbero non crescere su questo mezzo a causa dei loro requisiti nutrizionali. Streptococci β-emolitici possono presentare α emolisi dovuta all'alta concentrazione di glucosio nel mezzo. Test complementari devono essere effettuati per identificare la specie del ceppo isolato. 10- BIBLIOGRAFIA 1. SCHAEDLER, R.W., DUBOS, R., COSTELLO, R. 1965. J. Exp. Med. 122 : 59- 66. SCHAEDLER + VITAMIN K3 SCHAEDLER 63959 - 69624 GELOSE / MEIO DE ISOLAMENTO PARA BACTÉRIAS ANAERÓBIAS 1- UTILIZAÇÃO PRETENDIDA Em certas circunstâncias, as bactérias anaeróbias da flora endógena e as bactérias anaeróbias existents no solo podem transformar-se em agentes patogénicos responsáveis por graves infecções (infecções ginecológicas, abdominais, das vias aéreas superiores, da cavidade oral, etc.). Os meios de Schaedler e Schaedler + Vitamina K3 são utilizados para o isolamento de bactérias anaeróbias. 2- PRINCÍPIO O meio gelosado de Schaedler é um meio enriquecido com factores de crescimento, como a hemina, extracto de levedura e menadiona (vitamina K3). Contém agentes redutores como a cisteína e a glucose. Esta gelose encontra-se perfeitamente adaptada ao crescimento de todas as bactérias anaeróbias, incluindo espécies fastidiosas. 3- APRESENTAÇÃO • Meio pronto a usar: meio gelosado de Schaedler + Vitamina K3 - embalagem com 20 caixas de Petri (90 mm) (SCH) código 63959 • Meio desidratado: meio gelosado de Schaedler - frasco com 500g código 69624 4- COMPOSIÇÃO TEÓRICA (g/l de água destilada) O meio gelosado de Schaedler e o meio gelosado de Schaedler + Vitamina K3 são preparados a partir do caldo de Schaedler em conformidade com a fórmula descrita por Schaedler, Dubos e Costello (1). Caldo de triptona-caseína-soja 10 Peptona especial 5 Extracto de levedura 5 Tampão TRIS 3 Cloridrato de cisteína 0,4 Hemina 0,01 Glucose 5 Gelose 15 A fórmula do meio gelosado de Schaedler + Vitamina K3 pronto a usar, também contém: Vitamina K3 0,0005 g/l Sangue de cavalo 5,5%. Preparação do meio: Homogenize o pó contido no frasco. Adicione 42 gramas de meio desidratado a 1 litro de água destilada estéril. Deixe ferver até completa dissolução. Se necessário, ajuste o pH a 7,6. Esterilize na autoclave a 121°C durante 15 minutos. No momento de utilizar, adicione ao meio estéril arrefecido a 45-50°C: • 0,005% de uma solução estéril de vitamina K3, • 5% de sangue de cavalo, Podem também adicionar-se misturas selectivas. O meio não deve ser oxigenado. 5- CONSERVAÇÃO • Meio pronto a usar: a +2-8°C. • Meio desidratado: frasco bem fechado em local seco a +15-25°C. O prazo de validade e o número do lote estão indicados na embalagem. 6- INSTRUÇÕES Material: • Material fornecido: Meio de Schaedler, Meio de Schaedler + Vitamina K3. • Material específico não fornecido: - 0,005% de uma solução estéril de vitamina K3 - Sangue de cavalo (código 56641 - 56642). Inoculação: Inocule directamente a partir da amostra em estudo (feridas, abcessos, hemoculturas, líquidos de aspiração (pleural, pericárdico, articulações), aspirações da traqueia). A amostra deve ser processada o mais cedo possível após a colheita. Se a amostra não puder ser enviada para o laboratório no espaço de 30 minutos, deverá utilizar-se um meio de transporte para bactérias anaeróbias (TGV ANAER código 50458). Incubação: Uma incubação preliminar (antes da inoculação) dos meios gelosados num jarro de anaerobiose aumenta os desempenhos relativos ao isolamento. Após a inoculação, as placas são incubadas durante 48 horas a 37°C numa atmosfera de anaerobiose. Se a cultura for negativa ao fim de 48 horas, continue a incubação durante mais 24 horas. 7• • • DESEMPENHO/CONTROLO DE QUALIDADE DO ENSAIO Aspecto do meio pronto a usar: gelose vermelha. Aspecto do meio desidratado: pó bege. As taxas de crescimento do meio de Schaedler são verificadas com as seguintes estirpes: ESTIRPES Clostridium perfringens ATCC 12924 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Propionibacterium acnes CIP 6042 RESULTADO DA CULTURA APÓS 24 a 48 horas a 37°C Crescimento Crescimento Crescimento As taxas de crescimento do meio de Schaedler + Vitamina K3 são verificadas com as seguintes estirpes: ESTIRPES Clostridium perfringens ATCC 13124 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Peptostreptococcus anaerobius CIP 602 Fusobacterium nucleatum CIP 101130 RESULTADO DA CULTURA APÓS 24 a 48 horas a 37°C Crescimento Crescimento Crescimento Crescimento 8- DESEMPENHO/CONTROLO DE QUALIDADE DO ENSAIO Todos os reagentes fabricados são preparados de acordo com o nosso Sistema de Qualidade, desde a recepção das matérias primas até à comercialização final do produto. Cada lote é submetido a avaliações de controlo de qualidade, sendo apenas colocado no mercado se estiver em conformidade com os critérios de aceitação pré-definidos. Os registos relativos à produção e controlo de cada lote são conservados pela Bio-Rad. 9• • • • LIMITES PARA A SUA UTILIZAÇÃO Este meio pode ser usado para contagens das estirpes de Clostridium recolhidas de amostras patológicas. Algumas estirpes podem não se desenvolver neste meio devido aos seus requisitos nutricionais. Os Estreptococos β-hemolíticos podem apresentar hemólise α devido à elevada concentração de glucose neste meio. Devem realizar-se ensaios complementares para identificar a espécie da estirpe isolada. 10- REFERÊNCIAS 1. SCHAEDLER, R.W., DUBOS, R., COSTELLO, R. 1965. J. Exp. Med. 122 : 59- 66. SCHAEDLER + VITAMIN K3 SCHAEDLER 63959 - 69624 AGAR / ISOLERINGSMEDIUM FÖR ANAEROBA BAKTERIER 1- ANVÄNDNINGSOMRÅDE Under vissa förhållanden kan anaeroba bakterier av den endogena floran och anaeroba bakterier i jord omvandlas till patogener som ger allvarliga infektioner (gynekologiska infektioner, bukinfektioner, infektioner i övre luftvägarna och munhålan etc.). Schaedler-agar och Schaedler + Vitamin K3-agar används för isolering av anaeroba bakterier. 2- PRINCIP Schaedler-agar är ett medium som är anrikat med tillväxtfaktorer såsom hemin, jästextrakt och menadion (vitamin K3). Mediet innehåller reduceringsmedel såsom cystein och glukos. Denna agar är perfekt anpassad för tillväxt av alla anaeroba bakterier, även kräsna arter. 3- • • INNEHÅLL Medium färdigt att använda: Schaedler + Vitamin K3-agar - ask med 20 Petri-skålar (90 mm) (SCH) kod 63959 Dehydrerat medium: Schaedler-agar - flaska à 500g kod 69624 4- TEORETISK SAMMANSÄTTNING (i g/l destillerat vatten) Schaedler-agar och Schaedler + Vitamin K3-agar bereds från Schaedler-buljong i enlighet med den formel som beskrivs av Schaedler, Dubos och Costello (1). Trypton-kasein-soja-buljong 10 Specialpepton 5 Jästextrakt 5 TRIS-buffert 3 Cysteinhydroklorid 0,4 Hemin 0,01 Glukos 5 Agar 15 Formeln för den färdiga Schaedler + Vitamin K3-agaren innehåller även: Vitamin K3 0,0005 g/l Hästblod 5,5 %. Beredning av mediet: Homogenisera pulvret som finns i flaskan. Tillsätt 42 gram dehydrerat medium till 1 liter sterilt destillerat vatten. Koka tills det är helt upplöst. Justera pH-värdet till 7,6 om nödvändigt. Sterilisera i autoklav i 121°C i 15 minuter. Vid användning tillsätts följande till det sterila mediet som kylts till 45–50 °C: • 0,005% vitamin K3 steril lösning • 5 % hästblod Selektiva blandningar kan även tillsättas. Mediet får inte syresättas. FÖRVARING Medium färdigt att använda: i +2–8 °C. Dehydrerat medium: tätt försluten flaska på torr plats i +15–25 °C. Utgångsdatum och partinummer står på förpackningen. 5- • • 6- INSTRUKTIONER Material: • Material som medföljer: Schaedler-agar, Schaedler + Vitamin K3-agar. • Särskilt material som inte medföljer: - 0,005 % steril vitamin K3-lösning - Hästblod (kod 56641 - 56642). Inokulering: Inokulera genom utstryk direkt från det prov som ska undersökas (sår, abscesser, blododlingar, aspirationsvätskor (pleura, hjärtsäck, led), trakealaspirationer). Provet ska bearbetas så snart som möjligt efter provtagning. Om provet inte kan sändas till laboratoriet inom 30 minuter, måste ett transportmedium för anaeroba bakterier användas (TGV ANAER kod 50458). Inkubering: En inledande inkubering (före inokulering) av agarerna i en anaerob behållare förbättrar isoleringsresultatet. Efter inokulering ska plattorna inkuberas i 48 timmar i 37 °C i en anaerob atmosfär. Fortsätt inkuberingen i ytterligare 24 timmar, om odlingen är negativ efter 48 timmar. 7- • • • TESTRESULTAT/KVALITETSKONTROLL AV TESTET Mediets utseende (färdigt att använda): röd agar. Det dehydrerade mediets utseende: beige pulver. Tillväxtresultatet för Schaedler-agar verifieras med följande stammar: STAMMAR ODLINGSRESULTAT EFTER 24 till 48 timmar i 37 °C Clostridium perfringens ATCC 12924 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Propionibacterium acnes CIP 6042 Tillväxt Tillväxt Tillväxt Tillväxtresultatet för Schaedler + Vitamin K3-agar verifieras med följande stammar: STAMMAR ODLINGSRESULTAT EFTER 24 till 48 timmar i 37 °C Clostridium perfringens ATCC 13124 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Peptostreptococcus anaerobius CIP 602 Fusobacterium nucleatum CIP 101130 Tillväxt Tillväxt Tillväxt Tillväxt 8- TILLVERKARENS KVALITETSKONTROLL Alla reagenser tillverkas och bereds i enlighet med vårt kvalitetssystem, från mottagandet av råmaterial till den slutliga marknadsföringen av produkten. Varje parti genomgår en kvalitetskontroll och släpps endast ut på marknaden om det överensstämmer med fördefinierade acceptanskriterier. Handlingar som beskriver produktion och kontroll av varje enskilt parti sparas hos Bio-Rad. 9• • • • ANVÄNDNINGENS BEGRÄNSNINGAR Mediet kan användas för räkning av Clostridium-stammar från patologiska prover. Vissa stammar kan inte växa på det här mediet på grund av deras krav på näring. β-hemolytiska Streptococci kan uppvisa α-hemolys på grund av mediets höga glukoskoncentration. Kompletterande tester måste utföras för att identifiera arterna i den isolerade stammen. 10- REFERENSER 1. SCHAEDLER, R.W., DUBOS, R., COSTELLO, R. 1965. J. Exp. Med. 122 : 59- 66. SCHAEDLER + VITAMIN K3 SCHAEDLER 63959 - 69624 AGAR / ISOLATIONSMEDIUM TIL ANAEROBE BAKTERIER 1- FORMÅL Under visse omstændigheder kan anaerobe bakterier fra den endogene flora og anaerobe bakterier i jorden omdannes til pathogener, som er ansvarlige for svære infektioner (infektioner i forplantningsorganerne, maven, de øvre luftveje og i øregangen, etc.) Schaedleragar og Schaedler + Vitamin K3-agar anvendes til isolering af anaerobe bakterier. 2- PRINCIP Schaedleragar er et medium beriget i vækstfaktorer såsom hæmin, gærekstrakt og menadion (K3 vitamin). Det indeholder reduceringsstoffer som cystein og glucose. Agaren er meget velegnet alle anaerobe bakteriers vækst, inklusive kræsne arter. 3- • • PRODUKTETS INDHOLD Brugsklart medium: Schaedler + Vitamin K3-agar - æske med 20 Petri-plader (90 mm) (SCH) Dehydreret medium: Schaedleragar - flaske med 500g kode 63959 kode 69624 4- TEORETISK SAMMENSÆTNING (G/L DESTILLERET VAND) Schaedleragar og Schaedler + Vitamin K3-agar er fremstillet af Schaedler-suppe ifølge formlen, der er beskrevet af Schaedler, Dubos og Costello (1). Trypto-kasein-soyasuppe 10 Speciel peptone 5 Gærekstrakt 5 TRIS buffer 3 Cysteinhydrochlorid 0,4 Hæmin 0,01 Glykose 5 Agar 15 Den brugsklare Schaedler- + Vitamin K3-agar indeholder også: Vitamin K3 0,0005 g/l Hesteblod 5,5%. Fremstilling af mediet: Homogeniser pulveret i flasken. Tilsæt 42 g dehydreret medium til 1 l sterilt destilleret vand. Kog, indtil mediet er helt opløst. Juster pH til 7,6, hvis det er nødvendigt. Steriliser i autoklave ved 121°C i 15 minutter. På brugstidspunktet tilsættes det til det sterile medium afkølet til 45-50°C: • 0,005% vitamin K3 steril opløsning, • 5% hesteblod, Selektive blandinger kan også tilsættes. • Mediet må ikke være iltet. OPBEVARING Brugsklart medium: ved +2-8°C. Dehydreret medium: tæt forseglet flaske på et tørt sted ved +15-25°C. Udløbsdatoen og partinummeret er angivet på emballagen. 5- • • 6- BRUGSVEJLEDNING Materialer: • Materialer, der medfølger: Schaedleragar, Schaedler + Vitamin K3-agar • Specifikt materiale, der ikke medfølger: - 0,005% steril vitamin K3 opløsning - Hesteblod (kode 56641 - 56642). Inokulation: Inokuleres ved udstrygning direkte fra den prøve, der skal undersøges (sår, abscesser, blodkulturer, punkturvæsker (pleura, pericardial, led) trakeale aspirationer). Prøven skal behandles så hurtigt som muligt efter udtagning. Hvis prøven ikke kan sendes til laboratoriet inden for 30 minutter, skal der anvendes et transportmedium til anaerobe bakterier (TGV ANAER kode 50458). Inkubation: Foreløbig inkubation (før inokulation) af agarerne i et anaerobt glas øger isolationsydelserne. Efter inokulation inkuberes pladerne i 48 timer ved 37°C i en anaerob atmosfære. Hvis kulturen er negativ efter 48 timer, fortsættes inkubationen i yderligere 24 timer. 7- • • • KAPACITETS/KVALITETSKONTROL AF TESTEN Brugsklart mediums præsentation: rød agar. Dehydreret mediums præsentation: beige pulver Schaedlermediets vækstkapacitet kontrolleres med følgende stammer: STAMMER DYRKNINGSRESULTAT EFTER 24 til 48 timer ved 37°C Clostridium perfringens ATCC 12924 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Propionibacterium acnes CIP 6042 Vækst Vækst Vækst Schaedle- + Vitamin K3-agars vækstkapacitet kontrolleres med følgende stammer: STAMMER DYRKNINGSRESULTAT EFTER 24 til 48 timer ved 37°C Clostridium perfringens ATCC 13124 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Peptostreptococcus anaerobius CIP 602 Fusobacterium nucleatum CIP 101130 Vækst Vækst Vækst Vækst 8- PRODUCENTENS KVALITETSKONTROL Alle producerede reagenser fremstilles ifølge vores kvalitetssikringssystem, lige fra modtagelsen af råmaterialerne til markedsføringen af slutproduktet. Hvert parti af slutproduktet gennemgår kvalitetskontrol og markedsføres kun, hvis det opfylder de foruddefinerede kvalitetskriterier. Dokumentation vedrørende produktion og kontrol af hvert parti opbevares inden for virksomheden. 9• • • • BEGRÆNSNINGER FOR BRUG Dette medium kan anvendes til optælling af Clostridium-stammer fra patologiske prøver. Visse stammer vokser måske ikke på dette medium på grund af deres næringsmæssige krav. β-hæmolytiske Streptococci kan udvise α hæmolyse på grund af mediets høje glucosekoncentration. Der kræves supplerende test for at kunne artsbestemme den isolerede stamme. 10- REFERENCER 1. SCHAEDLER, R.W., DUBOS, R., COSTELLO, R. 1965. J. Exp. Med. 122 : 59- 66. SCHAEDLER + VITAMIN K3 SCHAEDLER 63959-69624 AGAR/ PODŁOŻE DO IZOLACJI BAKTERII BEZTLENOWYCH 1- ZASTOSOWANIE KLINICZNE W szczególnych warunkach, bakterie beztlenowe należące do endogennej flory człowieka lub bezltenowe bakterie glebowe, mogą stać się patogenami odpowiedzialnymi za poważne zakażenia (ginekologiczne, brzuszne, dolnych dróg oddechowych, oraz w jamie ustnej). Podłoże Schaedlera oraz podłoże Schaedlera z witaminą K3 pozwala na izolację bakterii beztlenowych. 2- ZASADA METODY Podłoże Schaedlera jest wzbogacone w czynniki wzrostowe, takie jak hemina, wyciąg drożdżowy i menadion (witamina K3). Zawiera czynniki redukujące, jak cysteina i glukoza. Skład podłoża sprawia, ze jest ono doskonale przystosowane do wymagań wzrostowych wszystkich bakterii beztlenowych, łącznie z gatunkami o wysokich wymaganiach odżywczych. 3- POSTAĆ PODŁOŻA • Podłoże gotowe do użycia: - płytki 20 x 90 mm (SCH) nr kat. 63959 • Podłoże gotowe do użycia: - opakowanie 500 g nr kat. 69624 4- SKŁAD PODŁOŻA (g/l wody destylowanej) Podłoże agarowe Schaedler agar i Schaedler + Vitamin K3 agar sporządzono z podłoża Schaedler bulion wg składu podanego przez Schaedlera, Dubos’a i Costello (1). Trypton-kazeina-soja bulion 10 Specjalny pepton 5 Wyciąg drożdżowy 5 Bufor TRIS 3 Cysteina-HCl 0.4 Hemina 0.01 Glukoza 5 Agar 15 Podłoże gotowe do użycia Schaedler + Vitamin K3 zawiera ponadto: Witamina K3 0.0005 g/l Krew końska 5.5% Przygotowanie podłoża: Przed użyciem wstrząsnąć suche podłoże w pojemniku. Rozpuścić 42 g proszku w 1 l jałowej wody destylowanej, dobrze wymieszać. Ogrzewać do całkowitego rozpuszczenia. Jeśli trzeba, doprowadzić pH do 7.6. Wysterylizować w autoklawie w temp. 121°C przez 15 minut. Bezpośrednio przed użyciem, do jałowego schłodzonego do temp. 45-50°C podłoża dodać: • 0.005% jałowego roztworu witaminy K3 • 5% krwi końskiej Można dodać również suplementy o właściwościach wybiórczych. Podłoża nie można natleniać. 5. PRZECHOWYWANIE • Podłoże gotowe do użycia: w temperaturze +2 do 8°C. • Podłoże suche: w szczelnie zamkniętym pojemniku, w suchym miejscu, w temperaturze +15 do 25°C. Data ważności i numer serii znajdują się na opakowaniu. 1 6- PROCEDURA Materiał: • Dostarczony materiał: Schaedler agar, Schaedler + Vitamin K3 agar. • Materiały dodatkowe: - 0.005%jałowy roztwór witaminy K3 - krew końska (nr kat. 56641-56642) Inokulacja: Bezpośrednio na podłoże wysiać badany materiał kliniczny (wymazy z rany, ropni, krew, aspiraty z opłucnej, stawów, osierdzia, aspiraty tchawicze, itp.). Materiał badany w kierunku beztlenowców należy wysiać jak najszybciej po pobraniu. Jeśli materiał nie może być dostarczony do laboratorium w ciągu 30 minut, należy pobrać go na podłoże transportowe dla bakterii beztlenowych (TGV ANAER, nr kat. 50458). Inkubacja: Wstępna inkubacja płytek w warunkach beztlenowych przed posianiem materiału zwiększa szansę wyhodowania beztlenowców. Zaszczepione płytki należy inkubować przez 48 godzin w temp. 37°C, w warunkach beztlenowych. Jeśli po tym czasie hodowla jest ujemna, inkubację należy przedłużyć o 24 godziny. 7- KONTROLA JAKOŚCI • Podłoże gotowe do użycia jest czerwonym agarem. • Podłoże w proszku ma beżową barwę. • Wzrost szczepów wzorcowych na podłożu Schaedlera SZCZEP Clostridium perfringens ATCC 12924 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Propionibacterium acnes CIP 6042 Wynik po inkubacji w temp. 37°C przez 24-48 godz. Wzrost Wzrost Wzrost • Wzrost szczepów wzorcowych na podłożu Schaedlera z witaminą K3: SZCZEP Clostridium perfringens ATCC 13124 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Peptostreptococcus anaerobius CIP 602 Fusobacterium nucleatum CIP 101130 Wynik po inkubacji w temp. 37°C przez 24-48 godz. Wzrost Wzrost Wzrost wzrost 8- KONTROLA JAKOŚCI PRODUCENTA Każdy produkt Bio-Rad został przygotowany zgodnie z systemem jakości, poczynając od materiałów wyjściowych, aż do ostatecznego produktu komercyjnego. Każda seria ostatecznego produktu podlega oznaczeniu kontrolnemu i jest dopuszczona do użytku, jeśli spełnia wymagane kryteria. Bio-Rad posiada protokoły produkcji i kontroli jakości każdej serii. 9- OGRANICZENIA METODY • Podłoże nie powinno być używane do oznaczania miana laseczek Clostridium w materiałach klinicznych. • Niektóre szczepy mogą nie rosnąć na tym podłożu ze względu na wyższe wymagania odżywcze. • Z powodu wysokiego stężenia glukozy w podłożu paciorkowce beta-hemolizujące mogą wykazywać hemolizę alfa • W celu identyfikacji szczepu do gatunku należy wykonać dodatkowe testy. 10- BIBLIOGRAFIA 1. SCHAEDLER, R.W., DUBOS, R., COSTELLO, R. 1965. J. Exp. Med. 122 : 59- 66. Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33 11/2003 2 SCHAEDLER + K3 VITAMIN SCHAEDLER AGAR / IZOLÁLÓ KÖZEG ANAEROB BAKTÉRIUMOKHOZ 63959 - 69624 1- FELHASZNÁLÁS Az endogén flóra anaerob baktériumai és a talaj anaerob baktériumai bizonyos körülmények között kórokozóvá válhatnak, és súlyos fertőzéseket okozhatnak (nőgyógyászati, hasi, felső légúti, szájüregi stb. fertőzéseket). A Schaedler agart és a K3 vitaminos Schaedler agart anaerob baktériumok izolálásához használjuk. 2- ALAPELV A Schaedler agar növekedési faktorokkal, például heminnel, élesztőkivonattal és K3 vitaminnal dúsított közeg. Redukáló ágenseket, például ciszteint és glükózt is tartalmaz. Tökéletesen alkalmas mindenfajta anaerob baktérium, még a tápanyag-igényesebbek szaporítására is. 3- KISZERELÉS • • Felhasználásra kész közeg: Schaedler + K3 vitaminos agar - 20 db Petri-csészét (90 mm) (SCH) tartalmazó doboz kódszám 63959 Portáptalaj: Schaedler agar - 500g-os doboz kódszám 69624 4- ELVI ÖSSZETÉTEL (G/L DESZTILLÁLT VÍZ) A Schaedler agart és a K3 vitaminos Schaedler agart Schaedler bouillonból készítjük a Schaedler, Dubos and Costello által leírt recept szerint (1). Trypto-kazein-szója bouillon 10 Speciális pepton 5 Élesztőkivonat 5 TRIS puffer 3 Cisztein-hidroklorid 0,4 Hemin 0,01 Glükóz 5 Agar 15 Végső pH-érték: 7,6 ± 0,2. A felhasználásra kész K3 vitaminos Schaedler agar még további komponenseket is tartalmaz: K3 vitamin 0,0005 g/l Lóvér 5,5%. A táptalaj elkészítése: Keverjük fel a dobozban található port. Adjunk 42 gramm portáptalajt 1 liter steril desztillált vízhez. Teljes feloldódásig forraljuk. Ha szükséges, állítsuk be 7,6-ra a pH-ját. Sterilezzük autoklávban 121°C-on 15 percig. Használatba vételkor adjunk a 45-50°C-ra lehűtött steril közeghez • 0,005%-os steril K3 vitamin oldatot, és • 5% lóvért. Szelektáló keverékeket is adhatunk hozzá. Vigyázzunk, hogy a közegbe ne oldódjon be oxigén. 5- TÁROLÁS • A felhasználásra kész közeget +2-8°C között tároljuk. • A portáptalajt szorosan lezárt dobozban, száraz helyen, +15-25°C között tároljuk. A szavatossági idő és a gyártási sorozat száma a csomagoláson olvasható. 6- HASZNÁLATI ÚTMUTATÓ Anyag: • A forgalmazó által szállított Schaedler agar, K3 vitaminos Schaedler agar. • Szükséges, de nem szállított anyagok: - 0,005%-os steril K3 vitamin oldat. - Lóvér (kódszám 56641 - 56642). Leoltás: Közvetlenül a vizsgálandó mintából (sebek, tályogok, hemokultúra, testfolyadékok (mellhártya, pericardium punktátum, synoviális folyadék), trachea váladék) oltsunk le szélesztéssel. A mintavétel után a lehető leghamarabb fel kell dolgozni a mintákat. Ha a mintát nem lehet 30 percen belül a laboratóriumba juttatni, akkor anaerob baktériumok fenntartására szolgáló transzport közeget kell használni (TGV ANAER, kódszáma 50458). Inkubálás: Ha anaerob edényben előinkubáljuk az agart (még a leoltás előtt), akkor annak izoláló képessége javul. Leoltás után a lemezeket 48 órán át termosztáljuk 37°C-on, anaerob atmoszférában. Ha 48 óra múltán még negatív a tenyészet, akkor további 24 óráig termosztáljuk. 7- MINŐSÉG/A TÁPTALAJ MINŐSÉGÉNEK ELLENŐRZÉSE • • • A felhasználásra kész közeg megjelenése: piros agar. A portáptalaj megjelenése: bézsszínű por. A Schaedler agar szaporítóképességét az alábbi törzsekkel ellenőrizzük: TÖRZSEK Clostridium perfringens ATCC 12924 Clostridium sporogenes ATCC 11437 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Propionibacterium acnes CIP 6042 • EREDMÉNYEK 24—48-órás, 37°C-os TENYÉSZTÉS UTÁN Növekedés Növekedés Növekedés Növekedés A K3 vitaminos Schaedler agar szaporítóképességét az alábbi törzsekkel ellenőrizzük: TÖRZSEK Clostridium perfringens ATCC 13124 Clostridium sporogenes ATCC 11437 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Bacteroides vulgatus ATCC 8482 Fusobacterium nucleatum CIP 101130 EREDMÉNYEK 24—48-órás, 37°C-os TENYÉSZTÉS UTÁN Növekedés Növekedés Növekedés Növekedés Növekedés 8- A GYÁRTÓNÁL FOLYÓ MINŐSÉGELLENŐRZÉS Az összes termékünk a saját minőségellenőrző rendszerünk szerint készült, a nyersanyag átvételétől kezdve a termék forgalmazásáig. Minden egyes gyártási sorozat minőségét ellenőrizzük, és csak akkor hozzuk forgalomba, ha az megfelel az előre felállított kritériumoknak. Minden sorozat gyártási és minőségellenőrzési jegyzőkönyve megtalálható a Bio-Radnál. 9- AZ ALKALMAZÁS KORLÁTAI • • • • A közeget differenciáló táptalajként is használhatjuk kóros mintákból Clostridium törzsek kimutatása során. Előfordulhat, hogy egyes speciális tápanyagigényű törzsek nem növekszenek ezen a közegen. Α β-hemolizáló streptococcusok α−hemolízist produkálhatnak a közeg magas glükóz-koncentrációja miatt. Kiegészítő vizsgálatokat is kell végezni az izolált törzs species szintű identifikálásához. 10- HIVATKOZÁSOK 1. SCHAEDLER, R.W., DUBOS, R., COSTELLO, R. 1965. J. Exp. Med. 122 : 59- 66.
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