KING B 55278

KING B
55278
PSEUDOMONAS DIFFERENTIATION MEDIUM
1- INTENDED USE
King B medium allows detection of the synthesis of pyoverdin, a pigment produced by Pseudomonas aeruginosa and other
Pseudomonas species.
Used in parallel with King A medium (detection of pyocyanin), it can be used to guide the identification of Pseudomonas
aeruginosa.
2- PRINCIPLE
The presence of magnesium sulphate provides the cations necessary for activation of pyoverdin, which gives the culture
medium a fluorescent greenish yellow colour.
The presence of phosphate inhibits the production of pyocyanin, a pigment specific to Pseudomonas aeruginosa.
3•
HOW SUPPLIED
Ready to use medium:
25 x 7 ml tubes (agar slant)
code 55277
4- THEORETICAL COMPOSITION (g/l of distilled water)
King B agar is prepared according to the theoretical formula described by King, Ward and Raney (1).
Peptone
20
Purified agar
12
K2HPO4 (anhydrous)
1.5
MgSO4, 7 H2O (anhydrous))
1.5
5- STORAGE
•
Ready to use medium: store at +2-8°C.
The expiry date and batch number are indicated on the packaging.
6- INSTRUCTIONS
Material:
• Material provided: King B medium
Inoculation:
Inoculate by making a midline streak on the surface of the agar with a loop of pure, fresh culture taken from a broth or agar
medium. Replace the screw-top without tightening.
Incubation:
Incubate for 24 to 48 hours at 30°C. Incubation for a longer time is useless, but cultures may be kept at room temperature (1830°C).
Reading - Interpretation:
Pyoverdin synthesis produces a fluorescent green colour.
7•
•
PERFORMANCE/QUALITY CONTROL OF THE TEST
Appearance of the ready to use medium: amber-coloured clear agar.
The growth performances of King B medium are verified with the following strains:
STRAINS
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Pseudomonas aeruginosa ATCC 17934
Pseudomonas fluorescens CIP 69.13
PIGMENTATION AFTER 24 - 48H at 30°C
Greenish yellow
Greenish yellow
Greenish yellow
Faint greenish yellow
8- QUALITY CONTROL OF THE MANUFACTURER
All manufactured reagents are prepared according to our Quality System, starting from reception of raw material to the final
commercialization of the product. Each lot is submitted to quality control assessments and is only released to the market, after
conforming to pre-defined acceptance criteria. The records relating to production and control of each single lot are kept within
Bio-Rad.
9•
•
•
•
LIMITS OF USE
Some strains of P. fluorescens or P. putida (generally derived from water or soil) only produce pyoverdin slowly. In this
case, the medium must be incubated at 20°C for 2 to 3 weeks. Some of these strains can be nonpigmented.
Some strains may not grow on this medium due to their nutritional requirements.
Pure, fresh cultures must always be used to obtain interpretable results.
Complementary tests must be performed to identify the species of the strain isolated.
10- REFERENCES
1. KING E.O., WARD M. et RANEY D.E.J., J. Lab. Clin. Méd., 1954, 44, p. 301.
KING B
55278
MILIEU DE DIFFÉRENCIATION DES PSEUDOMONAS
IVD
1. APPLICATION
Le milieu de King B permet la détection de la synthèse de pyoverdine, pigment élaboré par Pseudomonas aeruginosa et d’autres
Pseudomonas.
Utilisé en parallèle avec le milieu de King A (détection de la pyocyanine), Il permet d’orienter l’identification de Pseudomonas
aeruginosa.
2. PRINCIPE
La présence de sulfate de magnésium fournit les cations nécessaires à l'activation de la pyoverdine qui se manifeste en colorant le
milieu de culture en vert-jaune fluorescent.
La présence de phosphate permet d'inhiber la production de pyocyanine, pigment spécifique de Pseudomonas aeruginosa.
3. PRESENTATION
• Milieu prêt à l’emploi
- 25 tubes de 7 ml (gélose en pente)
code 55278
4. COMPOSITION THEORIQUE (en g/l d’eau distillée)
La gélose King B est préparée selon la formule théorique décrite par King, Ward et Raney (1).
Peptone
20
Agar purifié
12
K2HPO4 (anhydre)
1,5
MgSO4, 7 H2O (anhydre)
1,5
5. CONSERVATION
• Milieu prêt à l'emploi : à + 2 - 8°C.
La date de péremption et le numéro de lot sont indiqués sur le conditionnement.
6. UTILISATION
Matériel :
• Matériel fourni : milieu King B
Ensemencement :
Ensemencer en faisant une strie médiane à la surface de la gélose avec une öse de culture pure et fraîche prise dans un bouillon ou
sur un milieu gélosé. Replacer la capsule sans la revisser.
Incubation :
Incuber pendant 24 à 48 heures à 30°C. Au-delà, l'incubation à l'étuve est inutile, mais il est possible de conserver les cultures à
température ambiante (18-30°C).
Lecture - Interprétation :
Une synthèse de pyoverdine se traduit par une coloration verte fluorescente.
1
7. PERFORMANCES / CONTRÔLE QUALITE DU TEST
• Aspect du milieu prêt à l’emploi : gélose limpide ambrée.
• Les performances culturales du milieu King B sont contrôlées à l’aide des souches suivantes :
SOUCHES
PIGMENTATION EN 24 - 48H à 30°C
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Jaune-verte
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Jaune-verte
Pseudomonas aeruginosa ATCC 17934
Jaune-verte
Pseudomonas fluorescens CIP 69.13
Jaune-verte faible
8. CONTROLE QUALITE DU FABRICANT
Tous les produits fabriqués et commercialisés par la société Bio-Rad sont placés sous un système d’assurance qualité de la réception
des matières premières jusqu’à la commercialisation des produits finis. Chaque lot de produit fini fait l’objet d’un contrôle de qualité
et n’est commercialisé que s’il est conforme aux critères d’acceptations. La documentation relative à la production et au contrôle de
chaque lot est conservée par le fabricant.
9. LIMITES D'UTILISATION
• Certaines souches de P. fluorescens ou de P. putida (provenant en général de l'eau ou du sol) n'élaborent que lentement la
pyoverdine. Il faut alors incuber le milieu à 20°C pendant 2 à 3 semaines. Certaines de ces souches peuvent être apigmentés.
• Du fait de leurs exigences nutritionnelles, certains micro-organismes peuvent ne pas se développer sur ce milieu.
• Il est indispensable de procéder à partir de cultures pures et fraîche pour que les résultats puissent être interprétés.
• Il est recommandé de faire des tests complémentaires pour une identification d’espèce de la souche isolée.
10.REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
1.KING E.O., WARD M. et RANEY D.E.J., J. Lab. Clin. Méd., 1954, 44, p. 301.
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
07/2002
code: 18081 - A4
2
KING B
55278
MEDIO DE DIFERENCIACIÓN DE PSEUDOMONAS
1- USO PREVISTO
El medio King B permite la detección de la síntesis de pioverdina, un pigmento producido por Pseudomonas aeruginosa y otras
especies de Pseudomonas.
Usado en paralelo con el medio King A (detección de piocianina), puede usarse para guiar en la identificación de Pseudomonas
aeruginosa.
2- PRINCIPIO
La presencia de sulfato magnésico aporta los cationes necesarios para la activación de pioverdina, que le da al medio de
cultivo un color amarillo verdoso fluorescente.
La presencia de fosfato inhibe la producción de piocianina, un pigmento específico de Pseudomonas aeruginosa.
3•
CÓMO SE SUMINISTRA
Medio listo para usar:
25 tubos de 7 ml (agar inclinado)
código 55277
4- COMPOSICIÓN TEÓRICA (g/l de agua destilada)
El medio King B se elabora de acuerdo con la fórmula teórica descrita por King, Ward y Raney (1).
Peptona
20
Agar purificado
12
K2HPO4 (anhidro)
1,5
MgSO4, 7 H2O (anhidro))
1,5
5- CONSERVACIÓN
•
Medio listo para usar: conservar a +2-8°C.
La fecha de caducidad y el número de lote están indicados en el envasado.
6- INSTRUCCIONES
Material:
• Material suministrado: Medio King B
Inoculación:
Inocule haciendo una raya en la línea media sobre la superficie del agar con un asa de cultivo puro, fresco, tomado de un caldo
o medio de agar. Vuelva a colocar la parte superior de rosca sin apretar.
Incubación:
Incube durante 24 a 48 horas a 30°C. La incubación durante un tiempo mayor es inútil, pero los cultivos pueden conservarse a
temperatura ambiente (18-30°C).
Lectura – Interpretación:
La síntesis de pioverdina produce un color verde fluorescente.
7•
•
RENDIMIENTO / CONTROL DE CALIDAD DE LA PRUEBA
Aspecto del medio listo para usar: agar transparente de color ámbar
Los rendimientos de crecimiento del medio King B se verifican con las siguientes cepas:
CEPAS
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Pseudomonas aeruginosa ATCC 17934
Pseudomonas fluorescens CIP 69.13
PIGMENTACIÓN DESPUÉS DE 24 - 48H a 30°C
Amarillo verdoso
Amarillo verdoso
Amarillo verdoso
Amarillo verdoso débil
8- CONTROL DE CALIDAD DEL FABRICANTE
Todos los reactivos fabricados se elaboran según nuestro sistema de calidad, que va desde la recepción de las materias
primas hasta la comercialización final del producto. Cada lote se somete a valoraciones de control de calidad y sale al mercado
sólo cuando está de acuerdo con los criterios de aceptación predefinidos. Los registros relativos a la producción y al control de
cada lote se conservan en Bio-Rad.
9•
•
•
•
LÍMITES DE USO
Algunas cepas de P. fluorescens o P. putida (generalmente obtenida de agua o suciedad) sólo produce pioverdina
lentamente. En este caso, el medio debe ser incubado a 20°C durante 2 a 3 semanas. Algunas de estas cepas no pueden
pigmentarse.
Debido a los requisitos nutricionales, algunas cepas pueden no crecer en este medio.
Deben usarse siempre cultivos puros, frescos, para obtener resultados interpretables.
Deben realizarse pruebas complementarias para identificar la especie de la cepa aislada.
10- BIBLIOGRAFÍA
1. KING E.O., WARD M. et RANEY D.E.J., J. Lab. Clin. Méd., 1954, 44, p. 301.
KING B
55278
PSEUDOMONAS-DIFFERENZIERUNGSMEDIUM
1- VERWENDUNGSZWECK
King B-Medium ermöglicht den Nachweis der Synthese von Pyoverdin, einem von Pseudomonas aeruginosa und anderen
Pseudomonas-Gattungen produziertem Pigment.
Parallel mit King A-Medium (Nachweis von Pyocyanin) kann es zur Identifizierung von Pseudomonas aeruginosa verwendet
werden.
2- PRINZIP
Das vorhandene Magnesiumsulfat liefert die Kationen, die für die Aktivierung von Pyoverdin benötigt werden, das dem
Kulturmedium eine fluoreszente grünlich-gelbe Farbe verleiht.
Das vorhandene Phosphat hemmt die Produktion von Pyocyanin, einem für Pseudomonas aeruginosa spezifischen Pigment.
3•
DARREICHUNGSFORM
Gebrauchsfertiges Medium:
25 x 7-ml (Schrägagar)
Kat.-Nr. 55277
4- THEORETISCHE ZUSAMMENSETZUNG (g/l destilliertes Wasser)
King B-Agar wird anhand der von King, Ward und Raney beschriebenen theoretischen Formel vorbereitet (1).
Pepton
20
Gereinigter Agar
12
K2HPO4 (wasserfrei)
1,5
MgSO4, 7 H2O (wasserfrei)
1,5
LAGERUNG
Gebrauchsfertiges Medium: Lagerung zwischen 2 - 8°C.
Das Verfallsdatum und die Chargennummer sind auf der Verpackung angegeben.
5-
•
6- GEBRAUCHSANWEISUNG
Material:
• Geliefertes Material: King B-Medium
Beimpfung:
Beimpfen durch Ausstreichen von der Mitte der Oberfläche einer frischen Reinkultur einer Bouillon oder eines Agarmediums mit
Hilfe einer Öse. Den Schraubverschluss ohne Abdichten auswechseln.
Inkubation:
24 bis 48 Stunden bei 30°C inkubieren. Eine längere Inkubation ist nicht von Nutzen. Die Kulturen können jedoch bei
Raumtemperatur (18-30°C) aufbewahrt werden.
Ablesen - Interpretation der Ergebnisse:
Die Synthese von Pyoverdin führt zu einer grünen Färbung.
7•
•
LEISTUNG/QUALITÄTSKONTROLLE DES TESTS
Erscheinung des gebrauchsfertigen Mediums: heller bernsteinfarbener Agar.
Die Leistungsmerkmale des Wachstums auf King B-Mediums werden mit folgenden Stämmen überprüft:
STÄMME
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Pseudomonas aeruginosa ATCC 17934
Pseudomonas fluorescens CIP 69.13
PIGMENTIERUNG NACH 24 – 48 h bei 30°C
grünlich-gelb
grünlich-gelb
grünlich-gelb
leicht grünlich-gelb
8- QUALITÄTSKONTROLLE DES HERSTELLERS
Alle von der Firma Bio-Rad hergestellten Reagenzien unterliegen einem Qualitätssicherungssystem vom Rohstoffeingang bis
zur Vermarktung der Fertigprodukte. Jede Fertigproduktcharge wird einer Qualitätskontrolle unterzogen und nur dann verkauft,
wenn sie den Freigabekriterien entspricht. Die Unterlagen bezüglich Herstellung und Kontrolle der einzelnen Chargen werden
bei Bio-Rad aufbewahrt.
9•
•
•
•
GRENZEN DES TESTS
Manche P. fluorescens- oder P. putida-Stämme (im Allgemeinen aus dem Wasser oder dem Boden) produzieren
Pyoverdin nur langsam. In diesem Fall muss das Medium 2 bis 3 Wochen bei 20°C inkubiert werden. Manche dieser
Stämme sind nicht pigmentiert.
Aufgrund spezifischer Anforderungen an die Nährstoffe wachsen unter Umständen manche Stämme auf diesem Medium
nicht.
Um interpretierbare Ergebnisse zu erhalten, müssen immer frische Reinkulturen verwendet werden.
Zur Identifizierung der Spezies des isolierten Stammes müssen zusätzliche Tests durchgeführt werden.
10- LITERATUR
1. KING E.O., WARD M. et RANEY D.E.J., J. Lab. Clin. Méd., 1954, 44, p. 301.
KING B
55278
MEZZO DI DIFFERENZIAZIONE DI PSEUDOMONAS
1- USO PREVISTO
Il mezzo King B permette l'individuazione della sintesi della pioverdina, un pigmento prodotto dalla Pseudomonas aeruginosa e
da altre specie di Pseudomonas.
Utilizzato in concomitanza con il mezzo King A (individuazione della piocianina), può essere usato per guidare l'identificazione
della Pseudomonas aeruginosa.
2- PRINCIPIO
La presenza del solfato di magnesio fornisce i cationi necessari all'attivazione della pioverdina, che rende il mezzo di coltura di
un colore verdastro-giallo fluorescente.
La presenza del fosfato inibisce la produzione di piocianina, un pigmento proprio della Pseudomonas aeruginosa.
3•
PRESENTAZIONE
Mezzo pronto all’uso:
- 25 x 7 ml tubi (mezzo di coltura in agar a becco di clarino) codice 55277
4- COMPOSIZIONE TEORICA (in g/l di acqua distillata)
L'agar King B è preparato secondo la formula teorica descritta da King, Ward e Raney (1).
Peptone
20
Agar purificato
12
K2HPO4 (anidro)
1,5
MgSO4, 7 H2O (anidro))
1,5
CONSERVAZIONE
Mezzo pronto all’uso: conservare a +2-8°C.
La data di scadenza e il numero di lotto sono indicati sulla confezione.
5-
•
6- ISTRUZIONI
Materiale:
• Materiale fornito: mezzo King B
Inoculazione:
Inoculare eseguendo una strisciatura sulla linea mediana della superficie dell'agar con un'ansa contenente una coltura pura e
nuova estratta da un brodo o un mezzo in agar. Richiudere il tappo a vite senza stringere.
Incubazione:
Incubare per 24 - 48 ore a 30°C. L'incubazione per un tempo più lungo è inutile, ma le colture possono essere mantenute a
temperatura ambiente (18-30°C).
Lettura – interpretazione:
La sintesi della pioverdina produce un colore verde fluorescente.
7•
•
CONTROLLO DI QUALITÀ / PRESTAZIONE DEL TEST
Aspetto del mezzo pronto all’uso: agar trasparente color ambra.
Le prestazioni di crescita del mezzo King B sono verificate usando i seguenti ceppi:
CEPPI
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Pseudomonas aeruginosa ATCC 17934
Pseudomonas fluorescens CIP 69.13
PIGMENTAZIONE DOPO 24 – 48 ORE a 30°C
Giallo verdastro
Giallo verdastro
Giallo verdastro
Debole giallo verdastro
8- CONTROLLO DI QUALITÀ DEL PRODUTTORE
Tutti i reagenti realizzati sono preparati in base al nostro Sistema di Assicurazione di Qualità dal ricevimento delle materie
prime, alla commercializzazione finale del prodotto. Ciascun lotto di prodotto finito è sottoposto a un controllo di qualità e viene
messo in commercio soltanto se risulta conforme ai criteri di approvazione predefiniti. La documentazione relativa alla
produzione e al controllo di ciascun singolo lotto è conservata presso Bio-Rad.
9•
•
•
•
LIMITI DI UTILIZZO
Alcuni ceppi di P. fluorescens o P. putida (generalmente derivanti da acqua o terreno) presentano una produzione lenta
della pioverdina. In tal caso, il mezzo dovrà essere incubato a 20°C per 2 - 3 settimane. Alcuni di questi ceppi potrebbero
non presentare alcuna pigmentazione.
Alcuni ceppi potrebbero non crescere su questo mezzo a causa dei loro requisiti nutrizionali.
Al fine di ottenere risultati validi per l'interpretazione, utilizzare sempre colture pure e nuove.
Allo scopo di identificare le specie di ceppo identificate, dovranno essere eseguiti dei test complementari.
10- BIBLIOGRAFIA
1. KING E.O., WARD M. et RANEY D.E.J., J. Lab. Clin. Méd., 1954, 44, p. 301.
KING B
55278
MEIO PARA DIFERENCIAÇÃO DE PSEUDOMONAS
1- UTILIZAÇÃO PRETENDIDA
O meio King B permite a detecção da síntese de pioverdina, um pigmento produzido pela Pseudomonas aeruginosa e outras
espécies de Pseudomonas.
Usado em paralelo com o meio King A (detecção de piocianina), pode ser utilizado para orientação na identificação da
Pseudomonas aeruginosa.
2- PRINCÍPIO
A presença de sulfato de magnésio proporciona os catiões necessários para activação da pioverdina, a qual induz uma
alteração da coloração do meio de cultura que se torna amarelo esverdeado fluorescente.
A presença de fosfato inibe a produção de piocianina, um pigmento específico da Pseudomonas aeruginosa.
3•
APRESENTAÇÃO
Meio pronto a usar:
25 tubos x 7 ml (gelose inclinada)
código 55277
4- COMPOSIÇÃO TEÓRICA (g/l de água destilada)
O meio King B é preparado em conformidade com a fórmula teórica descrita por King, Ward e Raney (1).
Peptona
20
Gelose purificada
12
K2HPO4 (anidro)
1,5
MgSO4, 7 H2O (anidro)
1,5
5- CONSERVAÇÃO
•
Meio pronto a usar: conserve a +2-8°C.
O prazo de validade e o número do lote estão indicados na embalagem.
6-
INSTRUÇÕES
Material:
Material fornecido: meio King B
Inoculação:
Inocule efectuando uma linha divisória a meio da superfície da gelose com uma ansa coberta com uma cultura pura e recente
retirada de um caldo ou de um meio gelosado. Volte a colocar a tampa de rosca sem apertar.
Incubação:
Incube durante 24 a 48 horas a 30°C. Não tem qualquer interesse a incubação por um período de tempo mais prolongado, mas
as culturas podem ser conservadas à temperatura ambiente (18-30°C).
Leitura - Interpretação:
A síntese de pioverdina produz uma coloração verde fluorescente.
7•
•
DESEMPENHO/CONTROLO DE QUALIDADE DO ENSAIO
Aspcto do meio pronto a usar: gelose transparente com uma coloração âmbar.
As taxas de crescimento do meio King B são verificadas com as seguintes estirpes:
ESTIRPES
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Pseudomonas aeruginosa ATCC 17934
Pseudomonas fluorescens CIP 69.13
8-
PIGMENTAÇÃO APÓS 24 a 48 horas a 30°C
Amarela esverdeada
Amarela esverdeada
Amarela esverdeada
Ligeiramente amarela esverdeada
CONTROLO DE QUALIDADE DO FABRICANTE
Todos os reagentes fabricados são preparados de acordo com o nosso Sistema de Qualidade, desde a recepção das matérias
primas até à comercialização final do produto. Cada lote é submetido a avaliações de controlo de qualidade, sendo apenas
colocado no mercado se estiver em conformidade com os critérios de aceitação pré-definidos. Os registos relativos à produção
e controlo de cada lote são conservados pela Bio-Rad.
9•
•
•
•
LIMITES PARA A SUA UTILIZAÇÃO
Algumas estirpes de P. fluorescens ou P. putida (geralmente derivadas da água ou do solo) apenas produzem a
pioverdina lentamente. Neste caso, o meio deve ser incubado a 20°C durante 2 ou 3 semanas. Algumas destas estirpes
podem ser não pigmentadas.
Algumas estirpes podem não se desenvolver neste meio devido aos seus requisitos nutricionais.
Devem usar-se sempre culturas puras e recentes para obtenção de resultados interpretáveis.
Devem realizar-se ensaios complementares para identificar a espécie da estirpe isolada.
10- REFERÊNCIAS
1. KING E.O., WARD M. et RANEY D.E.J., J. Lab. Clin. Méd., 1954, 44, p. 301.
KING B
55278
PSEUDOMONAS DIFFERENTIERINGSMEDIUM
1- ANVÄNDNINGSOMRÅDE
King B-medium används för att detektera syntesen av pyoverdin, ett pigment som bildas av Pseudomonas aeruginosa och
andra arter av Pseudomonas.
Vid användning parallellt med King A-medium (detektion av pyocyanin) kan mediet användas som vägledning för identifiering av
Pseudomonas aeruginosa.
2- PRINCIP
Närvaron av magnesiumsulfat tillhandahåller de katjoner som behövs för aktivering av pyoverdin, vilket ger odlingsmediet en
fluorescerande grönaktigt gul färg.
Närvaron av fosfat hämmar produktionen av pyocyanin, ett pigment som är speciellt för Pseudomonas aeruginosa.
3•
INNEHÅLL
Medium färdigt att använda:
25 x 7 ml rör (agar, lutande)
kod 55277
4- TEORETISK SAMMANSÄTTNING (i g/l destillerat vatten)
King B-agar bereds i enlighet med den teoretiska formel som beskrivs av King, Ward och Raney (1).
Pepton
20
Renad agar
12
K2HPO4 (vattenfri)
1,5
MgSO4, 7 H2O (vattenfri)
1,5
FÖRVARING
Medium färdigt att använda: förvara i +2–8 °C.
Utgångsdatum och partinummer står på förpackningen.
5-
•
6- INSTRUKTIONER
Material:
• Material som medföljer: King B-medium
Inokulering:
Inokulera genom att göra ett utstryk i mitten på agarytan med en slinga ren, färsk odling som tagits från ett buljong- eller
agarmedium. Sätt tillbaka skruvlocket utan att dra åt.
Inkubering:
Inkubera i 24 till 48 timmar i 30 °C. Inkubering under längre tid är meningslöst, men odlingar kan förvaras i rumstemperatur (18–
30 °C).
Avläsning – utvärdering:
Pyoverdinsyntesen producerar en fluorescerande grön färg.
7•
•
TESTRESULTAT/KVALITETSKONTROLL AV TESTET
Mediets utseende (färdigt att använda): bärnstensfärgad klar agar.
Tillväxtresultatet för King B-medium verifieras med följande stammar:
STAMMAR
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Pseudomonas aeruginosa ATCC 17934
Pseudomonas fluorescens CIP 69.13
PIGMENTERING EFTER 24–48 TIMMAR i 30°C
Grönaktigt gul
Grönaktigt gul
Grönaktigt gul
Svagt grönaktigt gul
8- TILLVERKARENS KVALITETSKONTROLL
Alla reagenser tillverkas och bereds i enlighet med vårt kvalitetssystem, från mottagandet av råmaterial till den slutliga
marknadsföringen av produkten. Varje parti genomgår en kvalitetskontroll och släpps endast ut på marknaden om det
överensstämmer med fördefinierade acceptanskriterier. Handlingar som beskriver produktion och kontroll av varje enskilt parti
sparas hos Bio-Rad.
9•
•
•
•
ANVÄNDNINGENS BEGRÄNSNINGAR
Vissa stammar av P. fluorescens eller P. putida (i allmänhet härstammande från vatten eller jord) producerar pyoverdin
långsamt. I detta fall måste mediet inkuberas i 20 °C i 2 till 3 veckor. Vissa av dessa stammar kan vara icke-pigmenterade.
Vissa stammar kan inte växa på det här mediet på grund av deras krav på näring.
Rena, färska odlingar måste alltid användas för att tydbara resultat ska erhållas.
Kompletterande tester måste utföras för att identifiera arterna i den isolerade stammen.
10- REFERENSER
1. KING E.O., WARD M. et RANEY D.E.J., J. Lab. Clin. Méd., 1954, 44, p. 301.
KING B
55278
PSEUDOMONAS-DIFFERENTIERINGSMEDIUM
1. FORMÅL
King B-medium muliggør konstatering af syntese af pyoverdin, som er et pigment, der produceres af Pseudomonas aeruginosa
og andre Pseudomonas-arter.
Når det anvendes sammen med King A-medium (konstatering af pyocyanin), kan det anvendes til at styre identifikationen af
Pseudomonas aeruginosa.
2. PRINCIP
Forekomsten af magnesiumsulfat giver de kationer, der kræves for at aktivere pyoverdin, hvilket giver kulturmediet en
fluorescerende grøngul farve.
Forekomsten af fosfat hæmmer produktionen af pyocyanin, som er et pigment, der er specifikt for Pseudomonas aeruginosa.
3.
•
PRODUKTETS INDHOLD
Brugsklart medium:
25 skrå agarrør á 7 ml
kode 55277
4. TEORETISK SAMMENSÆTNING (G/L DESTILLERET VAND)
King B-medium forberedes ifølge den teoretiske formular, der er beskrevet af King, Ward og Raney (1).
Peptone
20
Renset agar
12
K2HPO4 (vandfrit)
1,5
MgSO4, 7 H2O (vandfrit)
1,5
OPBEVARING
Brugsklart medium: Opbevares ved +2 – 8°C.
Udløbsdatoen og partinummeret er angivet på emballagen.
5.
•
6. BRUGSVEJLEDNING
Materialer:
• Materialer, der medfølger: King B-medium
Inokulation:
Inokuler ved at stryge midten af agarens overflade med et loop af ren, frisk kultur, der er hentet fra en suppe eller et
agarmedium. Sæt skruelåget på igen uden at stramme det til.
Inkubation:
Inkuber i 24 – 48 timer ved 30°C. Inkubation i længere tid gør ingen forskel, men kulturerne kan opbevares ved stuetemperatur
(18 – 30°C).
Aflæsning – Fortolkning:
Pyoverdin-syntesen producerer en fluorescerende grøn farve.
7.
•
•
YDEEVNE OG KVALITETSKONTROL AF TESTEN
Det brugsklare mediums udseende: klar ravfarvet agar.
Vækstraterne for King B-mediet kontrolleres med følgende stammer:
STAMMER
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Pseudomonas aeruginosa ATCC 17934
Pseudomonas fluorescens CIP 69.13
PIGMENTERING EFTER 24 – 48 TIMER VED 30°C
Grøngul
Grøngul
Grøngul
Svagt grøngul
8. PRODUCENTENS KVALITETSKONTROL
Alle producerede reagenser fremstilles ifølge vores kvalitetssikringssystem, lige fra modtagelsen af råmaterialerne til
markedsføringen af slutproduktet. Hvert parti af slutproduktet gennemgår kvalitetskontrol og markedsføres kun, hvis det opfylder
de foruddefinerede kvalitetskriterier. Dokumentation vedrørende produktion og kontrol af hvert parti opbevares inden for
virksomheden.
9.
•
•
•
•
BEGRÆNSNINGER FOR BRUG
Nogle stammer af P. fluorescens eller P. putida (hentes generelt fra vand eller jord) producerer pyoverdin langsomt. I så
fald skal mediet inkuberes ved 20°C i 2 – 3 uger. Nogle af disse stammer har muligvis ingen pigmentering.
Nogle stammer kan muligvis ikke gro på dette medium på grund af de ernæringsmæssige krav.
Der skal altid anvendes rene, friske kulturer for at opnå resultater, der kan fortolkes.
Der skal udføres supplerende test for at identificere arterne af den isolerede stamme.
10. REFERENCER
1. KING E.O., WARD M. et RANEY D.E.J., J. Lab. Clin. Méd., 1954, 44, p. 301.
KING B
55278
PSEUDOMONAS DIFFERENCIÁLÓ KÖZEG
1- FELHASZNÁLÁS
A King B közeggel ki lehet mutatni, ha pyoverdin szintézis folyik a közegben. Ez a pigment kifejezetten a Pseudomonas
aeruginosa-ra és más Pseudomonas speciesekre jellemző.
Ha a King A közeggel (ami pyocianin kimutatására alkalmas) párhuzamosan használjuk, akkor segít identifikálni a Pseudomonas aeruginosa–t.
2- ALAPELV
A magnézium-szulfát gondoskodik azoknak a kationoknak a jelenlétéről, amelyek szükségesek a pyoverdin aktiválásához, s az
fluoreszkáló zöldessárga színre festi a közeget.
A foszfát jelenléte gátolja a pyocianin termelést, amely specifikus jellegzetessége a Pseudomonas aeruginosa-nak.
3•
KISZERELÉS
Felhasználásra kész közeg:
25 db 7 ml-es cső (ferde agar)
kódszám 55277
4- ELVI ÖSSZETÉTEL (g/l desztillált víz)
A King B agart a King, Ward and Raney (1) által leírt elvi recept szerint készítjük.
Pepton
20
Tisztított agar
12
K2HPO4 (vízmentes)
1,5
1,5
MgSO4 x 7 H2O
A közeg pH-ját 10%-os kálium-hidroxid oldattal 7,2-re állítjuk be, majd szűrőpapíron átszűrjük, és 6-7 ml-t töltünk be belőle egyegy csőbe.
5- TÁROLÁS
•
A felhasználásra kész közeget +2-8°C között tároljuk.
A szavatossági idő és a gyártási sorozat száma a csomagoláson olvasható.
6- HASZNÁLATI ÚTMUTATÓ
Anyag:
• A forgalmazó által szállított King B közeg.
Leoltás:
Oltókaccsal vegyünk mintát bouillonban vagy agar táptalajon tenyésztett tiszta, friss kultúrából, és az agar közepén húzzunk
vele csíkot. A csavaros kémcsőkupakot ne szorítsuk meg a visszahelyezésekor.
Inkubálás:
Inkubáljunk 24 – 48 órán át, 30°C-on. Ennél hosszabb inkubálásnak nincs értelme, de a tenyészeteket szobahőmérsékleten
(18-30°C) is tarthatjuk.
Leolvasás-értelmezés:
A pyoverdin szintézise fluoreszkáló zöld színt fejleszt a közegben.
7•
•
MINŐSÉG/A KÖZEG MINŐSÉGÉNEK ELLENŐRZÉSE
A felhasználásra kész közeg megjelenése: víztiszta, borostyánszínű agar.
A King B közeg szaporítóképességét az alábbi törzsekkel ellenőrizzük:
TÖRZSEK
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Pseudomonas aeruginosa ATCC 17934
Pseudomonas aeruginosa ref. SDP (3 törzs)
Pseudomonas fluorescens CIP 69.13
PIGMENTÁCIÓ 24-48 órás, 30°C-os TENYÉSZTÉS
UTÁN
Zöldessárga
Zöldessárga
Zöldessárga
Zöldessárga
Halvány zöldessárga
Xanthomonas maltophilia
Színtelen
8- A GYÁRTÓNÁL FOLYÓ MINŐSÉGELLENŐRZÉS
Az összes termékünk a saját minőségellenőrző rendszerünk szerint készült, a nyersanyag átvételétől kezdve a termék
forgalmazásáig. Minden egyes gyártási sorozat minőségét ellenőrizzük, és csak akkor hozzuk forgalomba, ha az megfelel az
előre felállított kritériumoknak. Minden sorozat gyártási és minőségellenőrzési jegyzőkönyve megtalálható a Bio-Radnál.
9•
•
•
•
AZ ALKALMAZÁS KORLÁTAI
A P. fluorescens vagy a P. putida (általában vízből vagy talajból származik) csak lassan termel pyoverdint. Ebben az
esetben a közeget 20°C-on kell inkubálni, 2 – 3 hétig. Az ide tartozó egyes törzsek színtelenek is lehetnek.
Előfordulhat, hogy egyes speciális tápanyagigényű törzsek nem növekszenek ezen a közegen.
Ha értelmezhető eredményeket akarunk kapni, akkor mindig tiszta, friss kultúrával kell dolgoznunk.
Kiegészítő vizsgálatokat is kell végezni az izolált törzshöz tartozó fajok identifikálásához.
10- REFERENCES
1. KING E.O., WARD M. et RANEY D.E.J., J. Lab. Clin. Méd., 1954, 44, p. 301.

Download Report