Association de Biologie Praticienne 70 avenue des Gobelins 75013 PARIS - Tél : 01 43 31 94 87 - Fax : 01 43 37 39 92 Email : [email protected] Enregistrée à la Préfecture de la Région de l’Ile de France, délégation à la formation professionnelle, sous le N°11750 397 375 SIRET : 321 609 489 00034 – NAF 9499Z Dr Annick DATRY Consultant chargé de la fabrication des échantillons et de l’exploitation des résultats Anne-Marie Fihman Responsable scientifique Coordonnateur MYCOLOGIE Confrontation N°02/2014 Rapport final 01/07/2014 1) Echantillon 1 (bouchon bleu) Il s’agit d’un homme africain âgé de 30 ans qui présente un onyxis au niveau du gros orteil du pied droit. 1.1 - Résultats Trichophyton rubrum (africain) 1.2 - Techniques d’identification Le prélèvement a été ensemencé sur milieu de Sabouraud-chloramphénicol-actidione. Examen macroscopique +++ Examen microscopique : prélever un fragment de la colonie que l’on dilacère dans 2 gouttes de lactophénol ou bleu-lactophénol, ou utiliser la technique du scotch. On recherche au microscope les éléments caractéristiques des dermatophytes : filaments, microconidies, macroconidies et ornementations particulières 1.3 - Caractéristiques morphologiques : - Voir annexe 1 1.4 - Thérapeutique recommandée Terbinafine PO (200 mg / j) pendant plusieurs mois (au moins 6 mois si atteinte de la lunule). 1.5 - Commentaires concernant les réponses - Réponses exactes : - Réponses inexactes ou incomplètes : Trichophyton rubrum, 185 fois - Trichophyton spp, 44 fois - Epidermophyton floccosum, 1 fois - Autres, 2 fois - Pas de réponse, 2 fois - Réponse non retournée, 14 fois 2) Echantillon 2 (bouchon vert) Patient caucasien, âgé de 40 ans, présentant une sinusite du sinus sphénoïdal. 2.1 - Résultats Scedosporium apiospermum 2.2 - Techniques de laboratoire utilisées Ensemencement sur milieu de Sabouraud - chloramphénicol sans actidione Même technique d’identification que pour l’échantillon 1 2.3 - Caractéristiques morphologiques - Voir annexe 2 2.4 - Thérapeutique recommandée Le traitement médical repose sur le voriconazole en première intention (800mg/jour en 2 prises séparées de 12h et loin des repas à J1 puis, 400mg/jour en 2 prises idem) , 2.5 - Commentaires concernant les réponses - Réponses exactes : - Réponses inexactes ou incomplètes : Scedosporium apiospermum ou spp, 217 fois - Cladosporium spp, 1 fois - Fusarium spp, 1 fois - Scopulariopsis spp, 2 fois - Acremonium spp, 1 fois - Penicillium spp, 3 fois - Aspergillus spp, 1 fois - Chrysosporium spp, 2 fois - Trichoderma spp, 1 fois - Autres, 9fois - Pas de réponse, 1 fois - Réponse non retournée, 14 fois 3) Echantillon 3 (à Ensemencer) Echantillon de PDP chez un patient hospitalisé en neurochirurgie présentant une pneumopathie acquise sur ventilation mécanique. 3.1 - Résultats Saccharomyces cerevisiae 3.2 - Techniques de laboratoire utilisées Ensemencer sur milieu de Sabouraud-chloramphénicol et/ou milieu.chromogène 3.3 - Caractéristiques morphologiques - Voir annexe 3 3.4 - Thérapeutique recommandée Il est recommandé de traiter par amphotéricine B IV ou fluconazole + 5-fluorocytosine (antifongigramme souhaitable) 3.5 - Commentaires concernant les réponses - Réponses exactes : - Saccharomyces cerevisiae ou spp, 205 fois - Réponses inexactes ou incomplètes : - Candida spp, 22 fois - Cryptococcus spp, 4 fois - Autres, 2 fois - Levure non identifiée / Pas de réponse, 6 fois - Réponse non retournée, 14 fois ANNEXE 1 Trichophyton rubrum (var. africain) Strictement anthropophile, cette espèce se transmet par l’intermédiaire de lieux publics humides où l’on marche pieds nus (piscine, sauna…). Elle donne des onyxis et des dermatophyties de la peau (inguino-crurales, intertrigos interdigitoplantaires) et exceptionnellement des folliculites. Diagnostic mycologique ● Aspect macroscopique Sa croissance est rapide : colonies poudreuses, plates ou cérébriformes. Le pigment est abondant et la colonie est rouge foncée recto et verso. ● Aspect microscopique - Filaments en raquettes avec ramifications à angle droit ; - Très nombreuses microconidies rondes disposées en acladium ;. - Nombreuses macroconidies, lisses, très longues, étroites à extrèmités arrondies, en « saucisse ». Elles mesurent (60-80) x (6-8) µm et contiennent 6 à 12 logettes Ongles de pieds Culture sur milieu de Sabouraud avec Actidione Examen direct de la culture ANNEXE 2 Scedosporium apiospermum Deux espèces sont incriminées en pathologie humaine : - S. apiospermum (forme sexuée Pseudallescheria boydii) - S. prolificans Ce sont des moisissures assez répandues dans la nature, souvent isolées en milieu rural, à partir du sol, d’eaux polluées, de débris organiques ou de végétaux pourris. Ces champignons vivent en saprophytes. La contamination est soit aérienne, soit cutanée ou transcutanée, à la suite d’un traumatisme, soit orale par inhalation accidentelle d’eaux polluées de rivière ou d’étang. Les patients immunodéprimés ont un terrain propice pour développer des formes profondes. Mais beaucoup de patients non immunodéprimés développent des formes superficielles. Chez l’homme, ils sont responsables : 1. Lésions superficielles : - Les mycétomes à Pseudallescheria boydii observés surtout aux USA et en Amérique du SUD (grains blanc jaunâtre) - Formes articulaires - Formes oculaires (kératites +++) - Les infections du sinus et du conduit auditif externe simulent une aspergillose 2. Lésions profondes - Broncho-pulmonaires réalisant des tableaux voisins de ceux des aspergilloses - Atteintes cérébrales - Autres localisations : endocardites et plus rarement des localisations rénales, hépatiques et prostatiques. Diagnostic mycologique A l’examen direct, les grains issus des mycétomes sont blancs, jaunâtres (0,5 à 2 mm de diamètre) et faits de filaments mycéliens enchevêtrés. Dans les autres prélèvements les filaments sont difficilement discernables de ceux des Aspergillus. La culture est rapide à 27° ou 37° C sur milieu de Sabouraud avec ou sans actidione. A l’examen macroscopique, On observe des colonies duveteuses puis laineuses voire cotonneuses ; couleur blanche au début devenant rapidement grise à marron, parfois vert foncé au recto, gris très foncé à noir au verso. A l’examen microscopique il existe 2 types de conidiogénèse qui peuvent coexister dans une même souche ; la forme Scedosporium est toujours présente : - filaments mycéliens de 2 à 3 µm de large, avec des ramifications à angle aigu ; - des spores ovoïdes mesurant (6-10) x (3-6)µm, branchées directement sur le filament ou à l’extrémité de conidiophores dressés perpendiculairement aux filaments (aleuriospores) et parfois le conidiophore peut former des annelides (annellospores); ces spores sont de couleur brune. La forme Graphium est inconstante mais toujours associée à la précédente. Les filaments portant les spores sont regroupés en corémies, sont colorés en brun et se ramifient à leur extrémité pour former des bouquets de cellules conidiogènes. Les spores terminales sont plus petites (5-7) x (2-3)µm, cylindriques et produites par des annelides régulièrement espacées. . Culture sur milieu de Sabouraud Examen direct de la culture Culture sur milieu de malt ANNEXE 3 Saccharomyces cerevisiae Cette levure, communément appelée « levure de bière », est très utilisée dans l’industrie agro-alimentaire (boulangerie, bière, vin) en raison de son rôle dans la fermentation alcoolique. L’Ultralevure contient une espèce très voisine : S. boulardii. S. cerevisiae est parfois responsable de mycose buccale et de vulvo-vaginite. Les infections profondes sont peu nombreuses. Diagnostic mycologique Ensemencement sur Sabouraud sans actidione. Examen macroscopique : - Sur milieu de Sabouraud, colonie blanche à crème, crèmeuse, lisse, parfois finement réticulée ; - Sur milieu Chromagar® colonie rose à violette brillante. Examen microscopique Levures globuleuses, de grande taille, mesurant 5-8 x 6-12 µm Test de blastèse : absence de filamentation Sur PCB ou RAT, absence de pseudofilamentation ou rudimentaire Assimilation des sucres : - Galactose, saccharose,maltose, raffinose, variables - Lactose négatif Culture sur milieu Chromagar® Examen direct de la culture ANNEXE 4 Diagrammes Echantillon 1 (bouchon bleu) MYCOSES Trichophyton rubrum ou spp Trichophyton spp Epidermophyton floccosum Scedosporium sp. (= Pseudoallescheria) Scytalidium dimidiatum Non identifié/Pas de réponse TOTAL Nbre de réponse 239 sur 253 % Identification des mycoses 185 44 1 1 1 7 77,41 18,41 0,42 0,42 0,42 2,93 239 100,00 Echantillon 2 (bouchon vert) MYCOSES Scedosporium apiospermum ou spp Penicillium sp. Scopulariopsis sp. Chrysosporium sp. Acremonium sp. Aspergillus species Cladosporium sp. Fusarium sp. Trichoderma Autres Pas de réponse Total Nbre de réponse 239 sur 253 % Identification des mycoses 217 3 2 2 1 1 1 1 1 9 1 90,79 1,26 0,84 0,84 0,42 0,42 0,42 0,42 0,42 3,77 0,42 239 100,00 Echantillon 3 (à Ensemencer) Nbre de réponse 239 sur 253 % Identification des mycoses 205 22 4 85,77 9,21 1,67 Aspergillus niger 1 0,42 P. wickerhamii 1 0,42 Levure non identifiée / Pas de réponse 6 2,51 239 100,00 MYCOSES Saccharomuces cerevisiae ou spp Candida spp Cryptococcus spp Total
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