アプリケーションノート Attune NxT Acoustic Focusing Cytometer ミネラルウォーター中の微生物 （生死判定） ミネラルウォーターなどの飲料水に含まれる微生物の生死判定を行う場合、従来であれば希釈したサンプル液をプレート に撒いて長時間培養後、コロニー形成数をカウントします。またリアルタイムＰＣＲなどを用いても生菌・死菌の両方が検 出されるため不向きです。 今 回 我 々 は、Invitrogen™ LIVE/DEAD™ BacLight™ Bacterial Viability and Counting Kit と Invitrogen™ Attune™ NxT Acoustic Focusing Cytometer を用いて、サンプル中に含まれる菌の生死の判定測定しました。 サンプルの準備 サンプルに含まれる微生物は 106 cells/mL 以下になるように適切なバッファーで希釈します。 濃度が未知の場合は段階希釈したサンプルをご使用ください。 希釈済みミネラルウォーター 997 µL ＋SYTO 9（3.34 mM）1.5 µL ＋Propidium iodide（PI：30 mM）1.5 µL 室温 , 15 min , 遮光 Attune NxT Acoustic Focusing Cytometer にて測定 蛍光を発している ポピュレーションをゲート （赤） データ例：ミネラルウォーター （緑） 測定のコツ 検体を希釈するバッファー（生理食塩水や水）などは予め 0.22 µm のフィルターでろ過します。 微生物は、前方散乱光によるサイズ解析ではノイズと区別するのが難しいためまずバッファーのみで、ノイズ （バックグラウンド）の位置を確認します。 次に BL1 に Threshold（閾値）を設定して、蛍光を発しているポピュレーションのみを解析します。 SYTO 9 と PI について LIVE/DEAD BacLight Bacterial Viability and Counting Kit には、核 酸 に 結 合 することで 蛍 光 を 発 する試 薬 の SYTO 9 と PI が含まれています。SYTO 9 は、細胞膜透過性のため全菌の判定に使用します。 Ｐ Ｉは細胞膜への透 過性が無いため、生細胞は染色されず、細胞膜の傷ついた細胞や死細胞を染色します。したがって SYTO 9 と Ｐ Ｉを組み合わせることで、サンプル中に含まれる菌の生死の判定を行うことができます。 PI SYTO 9 生 死 SYTO 9 + PI SYTO 9 + PI + 530 / 30 SYTO 9（緑）とＰ Ｉ （赤）の 蛍光スペクトルと Attune フィルター 640 LP （％） : Excitation : Emission BL1 BL3 （nm） Ordering information 製品名 サイズ 製品番号 価格 * LIVE/DEAD BacLight Bacterial Viability and Counting Kit 100 test L34856 ¥95,600 SYTO BC green fluorescent nucleic acid stain -5 mM solution in DMSO- 100 μL S34855 ¥50,700 * 記載の価格は 2015 年 10 月現在の価格です。消費税は含まれておりません。価格は予告なしに変更する場合がありますので、予めご了承ください。 研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続上での使用はできません。 記載の社名および製品名は、弊社または各社の商標または登録商標です。 標準販売条件はこちらをご覧ください。www.thermofisher.com/TC For Research Use only.Not for use in diagnostic procedures. © 2015 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. All trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific and its subsidiaries unless otherwise specified. Printed in Japan.FPL007-B1510IH サーモフィッシャーサイエンティフィック ライフテクノロジーズジャパン株式会社 本社：〒108-0023 東京都港区芝浦 4-2-8 [email protected] 0120-477-392 テクニカルサポート オーダーサポート TEL：03-6832-6980 FAX：03-6832-9584 TEL：03-6832-9300 FAX：03-6832-9580 営 業 部 facebook.com/ThermoFisherJapan www.thermofisher.com @ThermoFisherJP 販売店
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