キャンペーン期間 2016/ FFPE サンプル解析 12/2（金）まで サポートキャンペーン FFPE サンプルからの発現解析・融合遺伝子検出が可能な TruSight RNA Pan-Cancer、TruSeq RNA Access、 FFPE サンプルのエクソーム解析用ライブラリー調製キット TruSeq Exome を 30% OFF でご提供 FFPE サンプルは、ホルマリン固定の段階で、断片化や DNA の損傷などが起こるため、これらの点を考慮の上、解析を進め る必要があります。イルミナでは、RNA キャプチャーテクノロジーを活用することで、分解が進んだ FFPE サンプルからの 発現解析および融合遺伝子検出を可能にしました。さらに、エクソーム解析用 TruSeq Exome は、FFPE サンプル向けに最 適化したプロトコールをご案内しています。 FFPE サンプル解析用ライブラリー調製キットをお得にお求めいただけるこの機会をぜひご利用ください。 対象製品 TruSight RNA Pan-Cancer Panel TruSeq RNA Access Library Prep Kit TruSeq Exome Library Prep Kit 内 容 対象製品を 30% OFF でご提供 キャンペーン 情報 ※ 期間中何度でもご利用いただけます。 期 間 2016 年 9 月 12 日（月）から 12 月 2 日（金）まで（弊社受注分まで） プロモーションコード：LPFFPE2016（ご注文の際に販売代理店にお伝えください。） お問い合せ先 イルミナ株式会社 03-4578-2800 購入に関するご質問 営業部（内線 1）/ 製品仕様に関するご質問 マーケティング部（内線 2） 対象製品の詳細はウェブから jp.illumina.com/ffpekit jp.illumina.com/exomekit RNA キャプチャーテクノロジーによる発現解析 特長 • ターゲット領域のみをキャプチャーすることで FFPE のような分解したサンプルからでも効 率的にライブラリーを作製 • 追加でプローブ設計の必要なく、既知および新規融合遺伝子検出が可能 • 独自の QC ステップを採用し、分解度に応じてインプット量を決定することで、確実にライブ ラリーを作製 RNA キャプチャーテクノロジーを活用したライブラリー調製キット TruSight RNA Pan-Cancer TruSeq RNA Access ライブラリー調製キット ライブラリー調製キット 507 の融合遺伝子を含む 1385 の 特長 ヒトコーディング領域（45Mb）をキャプチャーするため、 包括的な発現解析が可能 がん関連遺伝子にフォーカス MiSeq でも 8 サンプルの RNA シーケンスが可能 インプット量 高品質サンプル 10ng FFPE サンプル 20ng~ 高品質サンプル 10ng FFPE サンプル 20ng~ 推奨リード数 600 万リード 5000 万リード MiSeq 1 ランあたりのサンプル数 8 サンプル 1 サンプル NextSeq 1 ランあたりのサンプル数 24 サンプル（中出力キット） 4 サンプル（中出力キット） 16 サンプル（高出力キット） 実験のポイント 分解が進んだサンプルに対処するには ? 遺伝子発現解析では、RNA 品質評価に RNA Integrity Number（RIN）が広く利用されていますが、分解した A 収量（ng） キャプチャー前のライブラリー FFPE サンプルの RIN 値は評価基準として精度が低いだけでなく、ライブラリー調製の成功予測値として信頼性に欠 1000 けることが明らかになっています。一方、RNA 断片サイズの中央値が、RNA の品質評価基準として、より信頼性の 800 高い因子であることが分かってきました。そこでイルミナでは、200 ヌクレオチド以上の RNA 断片の割合を示す 600 DV200 指標を開発しました。DV200 は、BioAnalyzer トレースより、簡単に算出可能で、DV200 の値に応じて、推奨イン プット量を設けています。 400 200 0 RIN: A A BN BT LN LT CT CN ST SN 2.3 2.7 2.9 3.2 NA NA 2.6 2.4 B C B キャプチャー前のライブラリー 1000 品質 1000 収量（ng） 収量（ng） 800 600 400 200 DV200 高 > 70% 20 ng 600 中 50~70% 20~40 ng 400 低 30~50% 40~100 ng 200 過度の分解 < 30% 推奨されない 0 0 RIN: BN BT LN LT CT CN ST SN 2.3 2.7 2.9 3.2 NA NA 2.6 2.4 0 25 50 75 100 DV200 B 収量（ng） 1000 品質の指標として使用されている RIN 値とライブラリー収量（濃縮前）では、相関が認められませんでした。 A. RNA B. DV200 とライブラリー収量（濃縮前）とでは、高い相関が認められ（R2=0.91）、RNA 品質の指標としての有用性を示しています。 800 C. DV200 に基づき、推奨の RNA インプット量を設けています。 600 400 200 0 推奨インプット量 800 FFPE サンプルのエクソーム解析 特長 • 超音波による断片化法を採用することで、均一したカバレッジ、高いオンターゲットを実現 • FFPE サンプル向け推奨プロトコールを準備 • TruSeq RNA Access と同じコンテンツをカバーしており、同じサンプルの発現解析結果 との比較も可能 FFPE サンプル用推奨プロトコール TruSeq Exome では、DNA の品質評価としてフラグ TruSeq Exome ワークフローへの変更に関する メント解析方法を採用しており、フラグメント解析結 推奨事項 果に基づき、ワークフローについて以下の 3 点の変更 1. ライブラリー調製の際のインプット量 2. 1 回目の増幅時の PCR サイクル数 3. 濃縮に使用するライブラリー量 ターゲット領域 >0.7 100~300ng 12 500ng 中 0.3~0.7 300ng 12 500ng 低 <0.3 100 100ng~ 90 45Mb 100 100 90 % Target Coverage 推奨データ量 / サンプルあたり 2.5 日（6 時間） 90 8Gb % Target Coverage アッセイ（ハンズオン時間） 推奨されない 20x において、 >90% のカバー率を実現 物理的（超音波） % Target Coverage インプット量 高 PCR サイクル数 * GQN（Genomic Quality Number）は、Fragment Analyzer により簡単に 算出できます。Fragment Analyzer をお持ちでない場合は、ライブラリー調 製の際のインプット量を 200~300ng と多めにすることを推奨しています。 製品概要 DNA 断片化方法 ライブラリー調製で のインプット量 品質 を推奨しています。 濃縮での インプット量 GQN* FFPE 80 NextSeq 1 ランあたりのサンプル数 中出力：2 サンプル 高出力：6 サンプル 70 HiSeq 1 ランあたりのサンプル数 60 Rapid：6 サンプル V3：28 サンプル 50 V4：36 サンプル 40 0 80 8GB 60 40 60 50 4GB 70 Target Coverage at 1x Target Coverage at 10x Target Coverage at 20x Target Coverage at 50x 50 70 40 80 0 4GB 0 4GB 8GBTarget Coverage 12GB at 1x Target Coverage at 10x Target Coverage at 1x Target Coverage at 20x Target Coverage at 10x Target Coverage at 50x Target Coverage at 20x Target Coverage 8GB 12GBat 50x さまざまなデータ量において、1x、10x、20x、および 50x でのターゲッ 12GB トカバレッジの結果を示しています。 技術資料 データシート：TruSight RNA Pan-Cancer Panel（Pub. No. 1170-2015-J004 10FEB2016） データシート：TruSeq RNA Access Library Prep Kit（Pub. No. 470-2013-J004 01MAY2014） テクニカルノート：FFPE サンプル由来の RNA 品質の評価（Pub. No. 470-2014-J001 21AUG2015） データシート：TruSeq Exome ライブラリー調製キット（Pub.No. 770-2015-J007 11DEC2015） テクノカルノート：FFPE サンプルから抽出した DNA の品質評価（Pub. No. 770-2015-J035 31MAY2016） 製品情報 希望販売 価格（円） キャンペーン 適用価格（円）※ カタログ番号 製品名 RS-303-1002 TruSight RNA Pan-Cancer Panel Set A（48 Samples）1 1,350,000 945,000 RS-303-1003 TruSight RNA Pan-Cancer Panel Set B（48 Samples） 1,350,000 945,000 RS-301-2001 TruSeq RNA Access Library Prep Kit - Set A（48 Samples）1 1,380,000 966,000 RS-301-2002 TruSeq RNA Access Library Prep Kit - Set B（48 Samples） 1 1 1,380,000 966,000 FC-150-1001 2 TruSeq Exome Library Prep Kit（8 rxn × 3 plex, 24 Samples） 315,000 220,500 FC-150-1002 TruSeq Exome Library Prep Kit（8 rxn × 6 plex, 48 Samples） 629,000 440,300 FC-150-1003 TruSeq Exome Library Prep Kit（8 rxn × 9 plex, 72 Samples） 944,000 660,800 FC-150-1004 TruSeq Exome Library Prep Kit（8 rxn × 12 plex, 96 Samples） 1,260,000 882,000 3 4 5 1. セット A とセット B は、異なるインデックスで構成されているので同時に使用すると最大 24 種類のインデックスに対応します。 2. キットはライブラリー調製、エクソーム濃縮（3 プレックス / 反応）、3 種類のインデックスを含みます。 3. キットはライブラリー調製、エクソーム濃縮（6 プレックス / 反応）、6 種類のインデックスを含みます。 4. キットはライブラリー調製、エクソーム濃縮（9 プレックス / 反応）、9 種類のインデックスを含みます。 5. キットはライブラリー調製、エクソーム濃縮（12 プレックス / 反応）、96 種類のインデックスを含みます。 イルミナ株式会社 ※ 価格に消費税は含まれません。 ※ 2016 年 8 月 26 日現在の価格です。 代理店 〒108-0014 東京都港区芝 5-36-7 三田ベルジュビル 22 階 Tel (03) 4578-2800 Fax (03) 4578-2810 jp.illumina.com www.facebook.com/illuminakk 本製品の使用目的は研究に限定されます。 販売条件：jp.illumina.com/tc © 2016 Illumina, Inc. 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