Title Author(s) Citation Issue Date URL Quantitative Cytochemical Studies of Deoxyribonucleic Acid in Hemopoietic Cells( Abstract_要旨 ) Yoshida, Yataro Kyoto University (京都大学) 1968-01-23 http://hdl.handle.net/2433/212419 Right Type Textversion Thesis or Dissertation none Kyoto University 【1 0 6】 I--L1---L 氏 吉 名 田 よし だ 禰 太 や 学 郎 た ろう 学 位 の 種 類 医 学 位 記 番 号 学位授 与 の 目付 3 28 号 昭 和 4 3年 1月 23 日 学位授与 の要件 学 位 規 則 第 5条 第 1項 該 当 研究 科 ･ 専攻 医 学 研 究 科 内 科 系 専 攻 学位 論文 題 目 Quant i t at i veCyt oc hemi c alSt udi e sofDeoxyri bonuc l ei c Aci di n Hemopoi et i eCel l s (造血細胞 の DNA 量 に関す る定 量 的細 胞化 学的研究) 論 文 調 査 委員 教 授 脇 坂 行 一 医 博 (主 博 士 第 査) 論 文 内 教 授 高 安 正 夫 容 の 要 教 授 深 瀬 政 市 旨 造血細胞 の増殖 に関す る細 胞 回転 論 的研究 は巨赤芽球性貧血や 白血 病等 の血 液疾 患 の病態生理 の解 明 に 重要で あ る ｡ デ オ キ シ リボ核 酸 ( DNA)が細胞 の分裂 ･ 増殖 に際 して一定 の量 的変動 を示す事実 に か ん がみ, 著者 は細胞 レベル におけ る DNA の顕徴 測光法 的定量 を用 いて 巨赤芽球 性貧血 および白血 病 に お け る造血細胞 の増殖 の量的解析 を試 み, 以下 の知見 を得 た｡ B12) 欠 乏 に もとづ く巨赤芽球性貧血 患者一 悪 性 貧 血 4例 お 第 1報 : 正常人 5例 および ビタ ミン B12 ( Bl i ndLo o pS ynd r o me l 例- の骨髄塗抹標本 に Fe ul ge n 染色 を行 な い, Ne ut r o ni c sRe s e a r c h よび Co .製 TVMi c r o s p e c t r o p h o t o me t e r(京大病理) で骨髄細胞 の DNA 量 を測定 した｡ 巨赤芽球性 骨髄 の好 塩基性 ･ 多染性 巨赤芽球 および巨大額 粒球系細胞で は正常 に比 L を有す る細胞 が多 いが, Te t r a pl o i d( 4 C)前後 の DNA 量 B12 投 与後 には これ ら相対 的に DNA 量 の多 い細胞 は急速 に減 少 し, 代 っ て Di pl o i d( 2 C)と 4 C の 申間 の DNA 量を有す る細胞 ( I nt e r me di a t ec e l l )が増 え る｡ またあ ら か じ め i n vi t r o で 1 時 間 H3 t h y mi di ne ( H3 Td R) を添加酵 還 した骨髄細 胞浮遊液 を用 いて同一細胞 につ き DNA 定量 と Aut o r a di o gr a p hy を連続 して行 な った成績で は, 巨赤芽球性 骨髄細胞 の DNA 合成 の障 棉( Ar r e s t )が証 明 され, かつ この障碍 は B12 投 与後 には速 かに除 かれ ることが確認 された｡ 以上 の諸点 よ り B12 欠 乏 によ る巨赤芽球性造血 において は DNA 合成 期 ( S)の延 長 とそれ に もとづ く 増殖能 の低下 が示唆 され, その病態発生 には DNA 合成 の障碑 が重要 な役割 を演 じて い るもの と 推 測 さ れる ｡ 第 2 報 '. 各種 白血 病症 例 および正常 人の骨髄 な らびに末梢血 中 の白血球 につ き前報 同様 に顕徽 測光法 的 DNA の定量 を行 ない, 細胞集 団 と して の DNA 量分布 を ヒス トグ ラムにて比 較検 討 した｡ 慢性 骨髄性 白 血病細胞 の DNA 墓分布 は 正常頼 粒球形成 とほぼ同 じく 2 Cと 4 C の問 に幅広 く分布 す るが, 急性 白血 病で は分布 の幅 は狭 く は 2 C 付近 に著 し く高 い Pe a k を示 す｡ 一般 に活傑 な分裂 ･ 増殖 を営む細 胞集団で 2 Cと 4 C の中間 に分布 す る Ⅰ nt e r me di a t ec e l l は S期, 4 C 付近 に分布す る細 胞 は DNA 合成 後期 -2 7 9- (G 2) にあると考え られ るが, 慢性骨髄性 白血病では これ ら S ない し G 2 期にあ る細胞の比率がほぼ正常 で あるのに反 し, 急性 白血病で はその比率 は著 しく低い｡ また病型 のいかんを問わず同一 の白血病症例内 で は末梢血 に比 し骨髄 の方が この S ない し G 2 期の細胞の比率が高 い｡ これ らの成績か ら慢性骨髄性 白 血病で は正常頼粒球形成 に近 い分裂 ･ 増殖が行 なわれているが, 急性 白血病 にあ っては白血病細胞 の平均 世代時間の延 長 していること (ことにDNA 合成 前期 Gl) , もし くは DNA 合成 も分裂 も営 まない細胞集 ( No nDNAs y nt he s i z i ng,No np r o l i f e r a t i ngp o p ul a t i o n)の存在 して いることが示唆 され る｡ なお, 団 急性 白血病では DNA 量分布 の Mo d eが｣ 上常 ( 2 C)に比 し右 または左 に偏 した症例がみ られたが, 細胞 学的な病型分類 との間には必ず しも一定 した関係 は認め られなか った0 第 3報 : 急性 白血病における細胞回転を さ らに詳細に検討すべ く, 第 1報 に述べたごと く顕徴測光法的 DNA 定量 と H3 Td R によ る Aut o ' r a di o gr a p hy を同一標本で連続 して行な う方法を用いて, 急性 白血 病細胞 の よ り, の DNA 合成を検索 した｡ 本法 は同一細胞で DNA 量 と H3 TdR 標識態度を開通 させ ることに S期内の各時点で の DNA 合成 の様 相を知 ることが可能で あ る｡ H3 Td R で標識 され る白病細胞 DNA 量 と銀粒子数 の関係 よ り推定 して, S期 を通 じで DNA 合成速度 は一定で はな くS期の中点付 近で合成 は最 も速かで S期 の始め と終わ りは緩慢で あると思われ る｡ またか くして得 られた DNA 合成 曲 線 は急性 白血病で も慢性骨髄性 白血病で もほぼ同 じくS期 内で DNA 量 は e xp o ne nt i a lに倍加 してゆ く こと, したが って白血病細胞において も DNA合成 の時間的推移は他 の多 くの細胞種で記載 されているも のと軌 を一 にす ることが推定 されたO しか し急性 白血病で は慢性骨髄性 白血病 と異 な り, 同 一 を有す る細胞群 DNA 量 ( Ce l lc yc l e上同一段 階にある細胞群) の中において も銀粒子数 に著 しい差があ り, DNA 合成速度 の極めて速かな もの, よ り緩慢 なものおよび少数 の合成 の と解 され る｡ なおこの他 にも Ar r e s tを示す もの等が混在 している No n DNA s yn t he s i z i ng, No np r o l i f e r a t i ngp o p ul a t i o n の存在 も想定 さ れ るので, 急性 白血病細胞 は形態的には比較的均一 に見 えて も増殖能 よ りみれば単一 の細胞集団 とは考え 〔 径 がたい｡ 核 酷 ･DNA量 ･ 標識態度の関連 よ り考察す るに大部分の小型 白血病細胞 は No np r o l i f e r a t i ng c e l l に相 当す ると思われ るが, その本能や G. 細胞 との異同な ど不明の点が多 く, 白血病化学療 法 と 関 連 して今後 の重要な課題 といわねばな らない｡ 以上 の研究成績 よ り DNA合成 の面か ら巨赤芽球性造血 および白血病 における細 泡増殖 の特徴cj) 一端 を 明 らかに したもの と考える｡ 論 文 審 査 の 結 果 の 要 旨 著者 は巨赤芽球性貧血 および白血病 における造血細胞 の増殖様式を明 らかにす るため, 細胞 レベルにお ける DNA の顕倣測光法的定量 および H3 t h ymi di n e( H3 Td R)による Aut o r a di o gr a p h yを用 いて, 細胞 回転を研究 した｡ その結果, 細胞が多 く, また B12 欠乏によ る巨赤芽球で は, 正常に比 し 4 C前後の DNA 量を有す る DNA 量か らみ ると S期 にあると考え られ る赤芽球で も H3 Td Rで標識 されない細胞 があることか ら, 巨赤芽球 には DNA 合成 の障害が存す ること, また これ らの異常は B12 投与後速やか に正常化す ることを明 らかに した｡ また慢性骨髄性 白血病で は S ない し G 2 期 にある細胞 の比率が正常 とほぼ同 じで, 正常頼粒形成 に近 い分裂増殖が行なわれているが, 急性 白血病で は -2 8 0- DNA 量の分布 が 2 C 付近 に高 い峯 を示 し, 白血病細胞 の平均世代時間 (ことに Gl fu｣) の延長, もし くは非分裂細胞集団 の存 在を示唆す る所見を得 た｡ さ らに急性 白血病で は形態的に比較的均一 に見 えて も D N A 合成 か ら み た 増 殖能 には種 々の異な った程度 のものがあ り, 小型 白血病細胞 の多 くは非分裂細胞集団に属す る と 推 定 し た｡ 以上本論又 は D N A 合成 の面か ら, 巨赤芽球性貧血 および白血病におけ る細胞増殖 の特徴 を明 らかに し たもので, 学術上有意義で あ り, 医学博士 の学位論文 と して価値 あるものと認め る｡ -2 8 1-
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