HPLC- Untersuchung von Isoflavonen in Alkohol-Wasser

HPLC- Untersuchung von Isoflavonen in
Alkohol-Wasser-Extrakten aus Rotklee
C. Müller, H. Stöckmann und K. Schwarz
Institut für Humanernährung und Lebensmittelkunde, Christian-Albrechts Universität zu Kiel
Einführung
Vergleich Horden- und Gefriertrocknung
Isoflavone sind östrogen wirksame Flavonoide, die aufgrund dieser
Wirkung
bei
der
Prävention
von
hormonabhängigen
Krebserkrankungen diskutiert werden. Vor allem Sojabohnen sind als
Quelle für Isoflavone bekannt und untersucht. Mit Rotklee findet sich
aber auch eine in Mitteleuropa wachsende Quelle für Isoflavone
[1,2].
Die beiden Trocknungsarten hatten einen Einfluss sowohl auf den
Gesamtgehalt als auch auf das Isoflavonmuster. Bei der
Gefriertrocknung waren die Gehalte insgesamt höher (9,2g IF/kg Klee
TM) und es wurde eine größere Zahl an Glucosiden und
Malonatverbindungen extrahiert, die bei der Hordentrocknung z.T.
abgebaut werden (5,5g IF). Im Gegensatz dazu zeigen die Aglycone
eine gute Trocknungsstabilität.
Ziel dieser Arbeit ist es, eine Extraktionsmethode für Isoflavone aus
Rotklee zu entwickeln.
U
F o rm o n o n e tin
B io c h a n in A
120
O
HO
O
100
O
HO
H3CO
OH
M a lo n a t v e r b i n d u n g
80
OH
Glycitein
O
OCH3
Biochanin A
D a id ze in
60
M a lo n a t v e r b i n d u n g
O
HO
O
OH
Daidzein
20
OCH3
10
O
A g ly k o n
0
Formononetin
OH
G ly c i t e i n
G e n is tin
D a id zin
O
O
HO
40
O
HO
15
20
25
30
35
40
45
Abb. 4: HPLC-Chromatogramm von gefriergetrocknetem Klee
OH
Genistein
Abb. 1: Strukturformeln von Isoflavonen
F o rm o n o ne tin
B io c ha nin A
120
Alkohol/Wasser-Extraktion
100
Bei der Ethanol/Wasser-Extraktion wurden maximale Gehalte an
Isoflavonen bei einem 1:1-Verhältnis erreicht, während mit
zunehmendem Wasser- oder Ethanolanteil die Gehalte geringer
ausfielen.
60
40
6
g IF/kg Klee TM
80
5
20
4
0
G ly c ite in
10
3
A gly ko n
D a idzin
15
20
25
30
35
40
2
1
0
EtOH
0%
EtOH
10%
EtOH
12%
EtOH
17%
EtOH
25%
EtOH
50%
EtOH
75%
EtOH
83%
EtOH
88%
EtOH
90%
EtOH
100%
Abb. 2: Gesamtisoflavon (IF) -Gehalte in verschiedenen Ethanol/WasserMischungen
Bei der Methanol/Wasser-Extraktion wurden bei dem 1:1- Verhältnis
ein ähnlicher hoher Isoflavongehalt wie bei Ethanol/Wasser (1:1)
bestimmt, während der Gehalt bei den 9:1-Extrakten bei Methanol
wesentlich höher war.
Die Isoflavone wurden auf einer Reversed-Phase C18-Säule mit einem
Wasser-Acetonitril-Gradienten getrennt und bei einer Wellenlänge von
260nm detektiert (nach [3]).
Fazit
Die Extraktion von Isoflavonen aus Rotklee ist mit
Ethanol/Wasser-Mischungen möglich. Der Gehalt lag bei der 1:1Mischung mit 5,5g Isoflavone/kg Klee (TM) am höchsten. Damit
können mit herkömmlichen Lösungsmitteln Isoflavone aus
Rotklee gewonnen werden. Die hier verwendete HPLC-Methode
eignet sich zur Charakterisierung der verschiedenen Isoflavone.
8
Literatur
7
6
g IF/ kg Klee TM
m
Abb. 5: HPLC-Chromatogramm von hordengetrocknetem (60°C) Klee
[1] Kallela, K. (1975) Nord. Med. Vet., 562-69
[2] McMurray, C.H. , Laidlaw, A.S. , Mc Elroy, M. (1986)
J. Sci. Food Agr., 333-40
[3] Lin, L.Z. , He, X.G. , Lindenmaier, M. , Yang, J. , Cleary, M. ,
Qiu, S.X. , Cordell, G.A. (2000), J. Agr. Food Chem., 354-65
5
4
3
2
1
0
MeOH 50%
EtOH 50%
MeOH90%
EtOH 90%
Abb. 3: Gesamtisoflavon-Gehalte (IF) in Ethanol- und Methanol- WasserMischungen
Kontakt
www.foodtech.uni-kiel.de
[email protected]

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