トランスフェクション試薬 製品ガイド DNA / RNA トランスフェクション エレクトロポレーション 2015年10月改訂版 ◆ 低毒性かつ高い導入効率を実現 ◆ 遺伝子発現解析やタンパク質生産に対応した多彩な製品ラインナップ リポソーム／ポリマー （陽電荷） 複合体形成 DNA／RNA （陰電荷） エンドサイトーシス 細胞質 リソソームとの融合や 浸透圧差により膜が開裂 核 ウェブサイト http://www.takara-bio.co.jp THE TRANSFECTION EXPERTS Mirus Bio 社は、 新たな トランスフェクション試薬の開発と販売を目的として、 1995 年にウィスコンシン大学の 3 人の研究者、Jon A. Wolff、Vladimir Budker、 James E. Hagstrom らにより設立されました。設立から現在に至るまで、有機化学 者、分子生物学者、細胞生物学者、生物学者などのエキスパートで構成されたチームによ る科学的な発見と開発に基き、高効率で細胞毒性の低いトランスフェクション試薬を提 供し続けています。 目次 P2∼3 DNA／siRNA／miRNAを培養細胞へトランスフェクション P4∼7 DNAを培養細胞へトランスフェクション P7 DNA／siRNAをマウス生体内へ導入 P7 mRNA／ウイルスRNAを培養細胞へトランスフェクション P8（裏表紙） エレクトロポレーション TransIT-X2® Dynamic Delivery System DNA / siRNA / miRNA 初代細胞を含む様々な細胞に、DNA および siRNA／miRNA を高効率に導入するための遺伝子導入試薬です。 DNA と siRNA／miRNA のコトランスフェクションにも使用することができます。 ● ● ● ● ● ■ siRNA／miRNA やプラスミド DNA を導入可能 正常初代細胞など様々な細胞に使用可能 細胞毒性が低く、培地交換は不要 動物由来成分フリー 優れたコストパフォーマンス IT-X2® Dynamic Delivery System は、様々な細胞で高い遺伝子発現レベルを示します。 IT-X2 または L 社試薬を用いてルシフェラーゼ発現プラスミド DNA を各 細胞にトランスフェクションし、24 時間後にルシフェラーゼアッセイを行った。 41 種類の細胞のうち 36 種類の細胞で、 IT-X2 は L 社試薬と同等以上の結 果を示した。そのうち 17 種類の細胞においては、L 社試薬の 2 倍以上の発現レベ ルを得ることができた（‡を付した細胞）。 IT-X2® Dynamic Dalivery System A549‡ AsPC-1 BHK-21‡ BJ‡ HCC38 HEK 293 ‡ HMEC（epithelial） HUVEC‡ （Mirus 社取得データ） Immortalized Keratinocytes‡ FreeStyle™ 293-F AU565 MDA-MB-468‡ BxPC-3 MDCK‡ COS-7 NHDF‡ HeLa DI-TNC1 NIH3T3 HCT 116 DU-145 L929‡ MCF-7 HepG2‡ LNCaP‡ MDA-MB-231 HCC1143‡ PC-12 PC-3 RAW 264.7 T47D‡ BT-20 Caco-2 C2C12 CFPAC-1‡ CHO-K1‡ 28 L社試薬 5 製 品 名 TransIT-X2 Dynamic Delivery System ® 2 Mirus 社 トランスフェクション試薬 製品ガイド Keratinocytes‡ MDA-MB-453 Neuro-2a SH-SY5Y SK-N-MC ★ 無料サンプル配布中！ 製品コード 価格（税別） 0.3 ml 容 量 MIR6003 ¥21,000 1.5 ml MIR6000 ¥85,000 1.5 ml×5 MIR6005 ¥362,000 ■ 各種株化細胞および初代細胞へのトランスフェクションが高効率 100 IT-X2 を用いて、A549、CHO-K1、HepG2、MDCK、LNCaP、PC-12、 ヒト乳腺上皮細胞（HMEC）および正常ヒト皮膚線維芽細胞（NHDF）に EGFP 発現プラスミド DNA をトランスフェクションした。 トランスフェクションは 96 ウェルプレートで培養した各細胞に対して 0.2∼ 0.4 μl の本試薬と 0.1 μg の DNA（試薬 ： DNA 比＝2：1、3：1 または 4：1）を用いて行い、48 時間後にフローサイトメーターを用いて測定を行っ た（n=3） 。 90 EGFP Positive（%） 80 70 60 50 40 30 20 10 0 A549 CHO-K1 HepG2 MDCK LNCaP PC-12 HMEC* NHDF* *indicates primary cell types 8,000,000 50 7,000,000 45 40 6,000,000 35 5,000,000 30 4,000,000 25 3,000,000 20 15 2,000,000 細胞障害性（%） Luciferase（RLU） ■ 高い遺伝子発現効率と低い細胞毒性（他社試薬との比較） 10 1,000,000 5 0 2:1 3:1 4:1 5:1 1.5:1 IT-X2 3:1 4:1 5:1 1.5:2:1 2:2:1 他社試薬 A 3:2:1 他社試薬 B 0 4:2:1 CA IT-X2 または他社トランスフェクション 試薬 A、B を用いて、ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞 （A549）にルシフェラーゼ発現プラスミドをト ランスフェクションした。 トランスフェクションには 96 ウェルプレート で培養した細胞と 0.1 μg のプラスミド DNA を 使用した。横軸に試薬：DNA 比を示す。 ルシフェラーゼ発現（棒グラフ）と LDH 活性レベ ル（折れ線：細胞障害性）はトランスフェクショ ン 24 時間後に測定した。 RLU：Relative Light Units （Mirus 社取得データ） ■ siRNA のノックダウン効率（他社試薬との比較） 100 GAPDH および AHA1 に対する siRNA とネガティブコントロール siRNA を IT-X2 または他社試薬 A を用いて正常ヒト皮膚線維芽細胞（NHDF）にトラ ンスフェクションした。 トランスフェクションは、6 ウェルプレートで培養した細胞に対して、4 μl の IT-X2 または 6 μl の他社試薬 A と 25 nM の siRNA を使用して行った。 48 時間後、リアルタイム PCR にて 18S rRNA に対する GAPDH および AHA1 の相対発現量を測定し、ネガティブコントロールによりノーマライズを行った。 Knockdown（%） 90 80 70 60 50 40 30 （Mirus 社取得データ） 20 10 0 IT-X2 siRNA Target 他社試薬 A GAPDH IT-X2 他社試薬 A AHA1 ■ プラスミド DNA と siRNA のコトランスフェクションも可能 IT-X2 を用いて、Cy5 標識した核局在性 YFP 発現プラスミドと Cy3 標識 した siRNA を HeLa 細胞へコトランスフェクションした。 アクチンフィラメントを Alexa Fluor 350 Phalloidin により染色し、トランス フェクション 24 時間後に共焦点顕微鏡により観察を行った（倍率 63 倍）。 黄：核局在性 YFP 赤：Cy3 標識 siRNA 青：Cy5 標識 DNA 緑：アクチンフィラメント Mirus 社 トランスフェクション試薬 製品ガイド 3 TransIT®-LT1 Transfection Reagent ● 様々な細胞に DNA を高効率に導入可能 ● 細胞毒性が低く、培地交換は不要 ● 豊富な実績あり DNA ★ 無料サンプル配布中！ 製品コード 価格（税別） 0.4 ml 容 量 MIR2304 ¥33,000 1 ml MIR2300 ¥50,000 1 ml×5 MIR2305 ¥205,000 1 ml×10 MIR2306 ¥383,000 操作フロー 1 本のチューブで試薬と DNA を混合し（20 分程度）、完全培地（血清含）で培養している細胞（50∼70% コンフルエントが望ま しい）に添加するだけです。培地交換の必要はありません。 ■ 高い発現効率と低い細胞毒性 40 2,500,000 Luciferase（RLU） 2,000,000 30 25 1,500,000 20 1,000,000 15 10 500,000 細胞障害性（%） 35 IT-LT1 と他社トランスフェクション試薬を用い て、HepG2 細胞にルシフェラーゼ発現プラスミドをト ランスフェクションした。 トランスフェクションは、96 ウェルプレート培養した細 胞と 0.1 μg のプラスミドを使用して行った。横軸に、試 薬：DNA 比を示す。 ルシフェラーゼの発現（棒グラフ）と LDH 活性レベル（折 れ線：細胞障害性）をトランスフェクション 24 時間後に 測定した。 5 0 2:1 細胞 のみ 3:1 4:1 1.5:1 3:1 5:1 他社製品 A IT-LT1 0 1.5:1 3:1:1 5:1:1 1.5:1 2:5:1 3:5:1 他社製品 C （Mirus 社取得データ） 他社製品 D ■ 血清を含む完全培地でも高いパフォーマンスを示す HepG2 NIH3T3 4.0×109 IT-LT1 Transfection Reagent を用いて、ルシ フェラーゼ遺伝子をコードするプラスミドを、HepG2 細 胞または NIH3T3 細胞に以下の 3 種類の培地条件でトラ ンスフェクションした。 3.5×109 2.0×109 RLU/35 mm well RLU/35 mm well 2.5×109 1.5×109 1.0×109 0.5×109 3.0×109 2.5×109 2.0×109 1.5×109 1.0×109 0.5×109 0 0 1 2 3 1 2 3 トランスフェクション時の培地 培地交換 1 無血清培地 2 完全培地 3 完全培地 4 時間後に交換 4 時間後に交換 なし トランスフェクションから 48 時間後に、各ウェルのルシ フェラーゼの活性を測定した。 いずれの細胞株においても、完全培地でトランスフェク ションを行い、培地交換を行わない場合に最も高いルシ フェラーゼ活性が得られた。 ★ お客様より良好な結果報告のあった細胞種一覧 A1847, AR42ce4, ARP1, 3T3-L1, C2C12, CHO-K1, corneal endothelium, COS-1, COS-7, chicken embryo fibroblast, CV-1, CVEC, ECV 304, HCT-116, HEC-1A, HEC-1B, HEK 293, HeLa, HepG2, H1299, Hs578T, human bladder carcinoma, HUVEC, LLC-PK, M19, MA-10, MC3T3-E1, MCF-7, MDA-MB-231, MDA-MB-435, MDCK, melanocyte, Mv 1 Lu, myometrial, neuroepithelial, NIH3T3, OV-1063, ovarian cancer, OVCAR3, OVCAR4, OVCAR7, OVCAR8, OVCAR10, PC3, PC-12, PE01, PE04, primary human astrocytes, primary human melanoma cells, primary human skin fibroblasts, primary mouse embryonic cells, primary mouse fibroblasts, primary mouse hepatocytes, primary mouse myotubles, primary mouse thymocytes, primary rat osteoblasts, rat smooth muscle cells, RAW 264.7, RBL-2H3, RBL, SJPL, SK-BR-3, SKOV3, U266, U20S, UPN251, Vero, WB rat liver epithelial cells, WiDr 4 Mirus 社 トランスフェクション試薬 製品ガイド TransIT®-293 Transfection Reagent DNA ● HEK 293 細胞に最適化したトランスフェクション試薬 ● 75∼85％の遺伝子導入効率を実現 ● 組換えレトロウイルスやレンチウイルス作製に使用可能 ★ 無料サンプル配布中！ 容 量 適用できる細胞株や細胞のタイプ HEK 293, HEK 293T 製品コード 価格（税別） 0.4 ml MIR2704 ¥36,000 1 ml MIR2700 ¥55,000 1 ml×5 MIR2705 ¥238,000 1 ml×10 MIR2706 ¥438,000 遺伝子導入効率 75 ∼ 85% IT®-293 を用いて、完全培地中で HEK 293 細胞に GFP（緑色蛍光タンパク質）発現 プラスミドをトランスフェクションし、24 時間後に蛍光顕微鏡を用いて GFP の発現を確 認した。 ■ その他、細胞株に特化したトランスフェクション試薬 製 品 名 適用できる細胞株や細胞タイプ ★ 無料サンプル配布中！ DNA 導入効率 TranslT -BrCa Transfection Reagent 容 量 製品コード 価格（税別） 0.4 ml MIR5504 ¥38,000 1 ml MIR5500 ¥58,000 1 ml×5 MIR5505 ¥250,000 1 ml×10 MIR5506 ¥480,000 0.4 ml MIR2174 ¥38,000 1 ml MIR2170 ¥58,000 1 ml×5 MIR2175 ¥253,000 1 ml×10 MIR2176 ¥467,000 0.4 ml MIR2904 ¥38,000 1 ml MIR2900 ¥58,000 1 ml×5 MIR2905 ¥253,000 1 ml×10 MIR2906 ¥467,000 0.4 ml MIR2124 ¥38,000 1 ml MIR2120 ¥58,000 1 ml×5 MIR2125 ¥253,000 1 ml×10 MIR2126 ¥467,000 0.4 ml MIR2804 ¥36,000 1 ml MIR2800 ¥56,000 1 ml×5 MIR2805 ¥238,000 1 ml×10 MIR2806 ¥445,000 0.4 ml MIR6104 ¥22,000 1 ml MIR6100 ¥45,000 1 ml×5 MIR6105 ¥186,000 1 ml×10 MIR6106 ¥341,000 ® MCF-7, MDA-MB-231, MDA-MB-453, MDA-MB-468, T47D 40-80% TranslT®-CHO Transfection Kit CHO-K1 and related 50-60% TransIT-HeLaMONSTER Transfection Kit ® HeLa and related 50-60% TranslT -Jurkat Transfection Reagent ® Jurkat, Jurkat-E6, RAW264.7, THP-1, K562, and other lymphoid cell lines 10-25% TranslT -Keratinocyte Transfection Reagent ® Immortalized Keratinocyte 20-30% TranslT®-Insect Transfection Reagent High Five, S2, Sf9 − Mirus 社 トランスフェクション試薬 製品ガイド 5 TransIT-PRO® Transfection Kit DNA ★ 無料サンプル配布中！ ● 浮遊培養の CHO 細胞、HEK 293 細胞用 ● 少ない条件検討で再現性の高いタンパク質発現を実現 ● 優れたコストパフォーマンス ■ 容 量 製品コード 価格（税別） 1 ml MIR5700 ¥61,000 10 ml MIR5760 ¥485,000 IT-PRO® Transfection Kit を使用したヒト IgG1 の高発現例 A. 400 浮遊培養 CHO 細胞での高タイター抗体生産 Day 3 Human Fc (µg/L) Day 5 IT-PRO ： PRO Boost Reagent ： DNA（1：1：1）、25 kDa linear PEI ： DNA（6：1） 、 FreeStyle MAX ： DNA（1：1） の各条件で、 FreeStyle CHO-S 細胞に一過性に遺伝子導入してヒト IgG1 を産生させ た。 プラスミド DNA （CMV プロモーター下で発現） は 1 ml 培養液につき 1 μgを使用し、 0.5×106 細胞 / mlでトランスフェクションを行った。 Day 7 300 200 パネル A：3、5、7 日後に培養上清を human IgG-Fc sandwich ELISA により測定 100 パネル B： 7 日後の上清をウェスタンブロット法により解析。S1、S2、 S3 は IgG スタンダード 1.6 mg/L、3.2 mg/L、6.3 mg/L を示す。 0 TransIT-PRO＋ PRO Booster Reagent B. ー 25 kDa linear PEI PRO PEI FS S1 FreeStyle MAX S2 IT-PRO を用いた遺伝子導入により、FreeStyle MAX を用いて遺 伝子導入した場合と同等以上のヒト IgG1 高発現が認められた。 S3 hlgG1 新製品のご紹介 優れたコストパフォーマンスでタンパク質大量生産に最適 CHOgro® Expression System ● ● ● ● ● DNA 浮遊培養の CHO 細胞用 条件検討不要で高いタンパク質発現が可能 トランスフェクション試薬、細胞培養用培地などを含むオールインワン 全てのコンポーネントが動物由来成分フリー 優れたコストパフォーマンス ■ 浮遊 CHO 細胞において高密度培養が可能 100 90 12 80 10 70 60 8 50 6 40 30 4 20 2 0 Viability（%, dotted lines） Million cells / ml（solid lines） 14 CHOgro Growth FreeStyle CHO Growth CHOgro Viability FreeStyle CHO Viability 浮遊 CHO 細胞（FreeStyle CHO-S cells）を CHOgro Expression Medium または FreeStyle CHO Expression Medium に、細胞密度 0.5×106 cells/ml にて 40 ml 分培養した（125 ml フラスコ使用）。 細胞数のカウントと細胞生存数（ヨウ化プロピジウム染色による）の計 測結果を左図に示す。 10 0 1 2 3 4 5 Day post seeding 6 製 品 名 CHOgro® Expression System 7 8 0 内 容 ・CHOgro Expression Medium ・CHOgro Complex Formation Solution ・Poloxamer 188 Solution ・L-Glutamine ・ IT-PRO Transfection Reagent 1 L×2 100 ml 100 ml 100 ml 1 ml 容 量 製品コード 価格（税別） 1 Kit MIR6260 ¥95,000 ※細胞とタンパク質発現ベクターは別途ご準備ください。 6 Mirus 社 トランスフェクション試薬 製品ガイド ● ● ● DNA トランスフェクションが困難な細胞や初代細胞などにも 高効率で導入 細胞毒性が低く、培地交換は不要 動物由来成分フリー ★ 無料サンプル配布中！ 容 量 ■ 初代ヒト小気道上皮細胞への高効率導入 製品コード 価格（税別） 0.4 ml MIR5404 ¥33,000 1 ml MIR5400 ¥66,000 1 ml×5 MIR5405 ¥285,000 1 ml×10 MIR5406 ¥530,000 900,000 IT-2020 を用いて、初代ヒト小気道上皮細胞 （HSAEpic）に GFP 発現プラスミドをトランスフェク ションし、24 時間後に蛍光顕微鏡を用いて GFP の発 現を確認した。 70 ■ 高い発現効率と低い細胞毒性 IT-2020 と他社トランスフェクション試薬を用いて、ヒト臍帯静脈内皮細胞 （HUVEC） にルシフェラーゼ発現プラスミドをトランスフェクションした。 トランスフェクションは、96 ウェルプレート培養した細胞と 0.1 μg のプラスミド を使用して行った。横軸に、試薬：DNA 比を示す。 ルシフェラーゼの発現（棒グラフ）と LDH 活性レベル（折れ線：細胞障害性）をトラン スフェクション 24 時間後に測定した。 （Mirus 社取得データ） Luciferase（RLU） 800,000 60 700,000 50 600,000 500,000 40 400,000 30 300,000 20 200,000 10 100,000 TransIT® Hydrodynamic Delivery System 0 細胞障害性（%） TransIT IT®-2020 Transfection Reagent 2:1 3:1 4:1 1.5:1 3:1 5:1 1.5:1:1 3:1:1 5:1:1 他社製品 A IT-2020 0 他社製品 C DNA / siRNA ● マウスの尾静脈に注射するだけの簡単な手法で、マウス生体内のさまざまな組織に核酸（DNA、siRNA） を効率よく、再現性良く導入可能 ● 肝臓で高い発現が期待できるほか、脾臓、腎臓、肺、心臓などの実質細胞への導入も可能 ★ 無料サンプル配布中！ 製 品 名 導入可能な核酸 特 徴 容 量 製品コード 価格（税別） TransIT®-QR Hydrodynamic Delivery Starter Kit siRNA、DNA 尾静脈注射後のマウスの心拍出量 の減少を最小限にし、マウスを迅 速に回復 10回 MIR5210 ¥24,000 TransIT®-EE Hydrodynamic Delivery Starter Kit DNA 上記製品に比べて約2∼3倍の高い遺 伝子発現レベルだが、 マウス回復に 要する時間がやや長い。 10回 MIR5310 ¥26,000 45,000 Total Luciferase Activity /Organ（ng） Total Luciferase Activity /Liver（ng） ■ 各臓器への導入効率の比較 40,000 35,000 30,000 25,000 20,000 15,000 10,000 5,000 0 IT-QR IT-EE 10 IT-EE と IT-QR Hydrodynamic Delivery Solution を用いて、ルシフェラーゼ遺伝子を搭載した発現プ ラスミド DNA（pCIluc、CMV プロモーター使用）10 μg をマ ウスの尾静脈から注射し、24 時間後の各臓器（肝臓、脾臓、肺、 心臓、腎臓）におけるルシフェラーゼ活性を測定した。 8 6 4 2 0 Spleen Lung IT-QR Heart Kidney IT-EE TransIT®-mRNA Transfection Kit mRNA / viral RNA ● mRNA やウイルス RNA など、様々な RNA の導入が可能 ● 細胞毒性が低く、培地交換は不要 ● 血清を含む培地でも使用可能 製品コード 価格（税別） 0.4 ml 容 量 MIR2225 ¥60,000 1 ml MIR2250 ¥105,000 1 ml×5 MIR2255 ¥440,000 Mirus 社 トランスフェクション試薬 製品ガイド 7 Ingenio® Electroporation Kit DNA / RNA ● 遺伝子導入困難な細胞への高効率なエレクトロポレーションを実現 ● キュベット式エレクトロポレーション装置のほとんどに適合 ● 優れたコストパフォーマンス Ingenio® Electroporation Kit は、核酸導入が困難な哺乳類細胞、特に初代細胞に対して、高い核酸導入効率と低毒性を実現する独自 のエレクトロポレーション用試薬です。キットには 0.2 cm または 0.4 cm のキュベット、Cell Dropper が含まれます。 12-72 hours 細胞を採取して数を計測。 遠心分離し、Ingenio エレクト ロポレーション試薬に再懸濁 DNAを添加して、 DNAと細胞の混合液 をキュベットに移す エレクトポレーション後、 すぐに細胞を培地に移す 12 ∼ 72 時間培養 アッセイを行う ★ 無料サンプル配布中！ 製 品 名 Ingenio Electroporation Kit with 0.2 cm cuvettes Ingenio® Electroporation Kit with 0.4 cm cuvettes Ingenio® Electroporation Solution ® 容 量 製品コード 価格（税別） 50回 MIR50115 ¥64,000 50回 MIR50116 ¥64,000 50回 MIR50114 ¥40,000 Ingenio Electroporation Kit は、Lonza 社（amaxa Nucleofector Device）、Bio-Rad 社（Gene Pulser Xcell Electroporator）、BTX 社、 Eppendolf 社などが販売するキュベット式エレクトロポレーション装置に適合します。詳細はウェブカタログをご覧ください。 オンラインツール ウェブサイトのタイトル（下記の青字）で検索、もしくは、以下の QR コードを読み取り、アクセスしてください。 『遺伝子導入試薬 選択ガイド（Mirus 社）』 実験目的別に、標的細胞に最適な試薬がぱっとわかる表を掲載！ 無料サンプルお申込みフォームともリンクしています。 Search Reagent Agent ® The Mirus Transfection Datebase 『 IT® シリーズ 無料サンプルお申込みフォーム』 Enter Cell Type: 小容量サイズを無料でお試しいただけます。 複数の種類のお申込みも可能です。 Select Nucleic Acid: 『遺伝子導入試薬 検索ツール Reagent Agent』 Show Recommendations 細胞と導入する核酸の種類を選択して入力すれば、推奨試薬を表示します。 ※ IT シリーズの各製品ページからご利用いただけます。 ・本パンフレットで紹介した製品はすべて研究用として販売しております。 ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。 また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。 ・タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。 ・ライセンスに関する情報は弊社ウェブサイトでご確認ください。 ・本パンフレットに記載された社名および製品名は、特に記載がなくても各社の商標または登録商標です。 ・本パンフレット記載の価格は2015 年 10月1日現在の希望小売価格です。価格に消費税は含まれておりません。 取扱店 東京支店 関西支店 TEL 03-3271-8553 FAX 03-3271-7282 TEL 077-565-6969 FAX 077-565-6995 TaKaRa テクニカルサポートライン TEL 077-565-6999 FAX 077-565-6995 Website Facebook http://www.takara-bio.co.jp http://www.facebook.com/takarabio.jp 2015年10月作成30K
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