セルブロック 活用術 独立行政法人地域医療機能推進機構 埼玉メディカルセンター 鶴岡慎悟 肺癌患者におけるEGFR遺伝子変異検査の手引き 第2.1版 肺癌患者におけるALK遺伝子検査の手引き2015 セルブロックを作製することで 多種多様なアプローチが可能となる 目次 １．当院のALK・EGFR検査の流れ ・・・検体が届いてから ２．セルブロック作製 ・・・作製方法・利点・問題点 ３．セルブロック活用 ・・・運用・活用方法 臨床からのセルブロック依頼 分子標的薬治療の患者選択 原発不明癌の検索 悪性中皮腫における労災認定 等々・・ 分子標的薬の隆盛により， 遺伝子検査が出来るよう準備が必要 当院の肺癌におけるEGFR/ALK検査の流れ 検体提出 •気管支洗浄 •胸水・・等 体腔液のみ 迅速Giemsa染色 検体に応じた ｾﾙﾌﾞﾛｯｸ作製 必須 細胞診 •Pap.染色 •Giemsa染色等 検体量が多ければ EGFR用 冷凍検体 （EGFR/ALK検査における）細胞検査の理想 臨床 臨床情報の記載を徹底 出来るだけ多くの検体を提出してもらう 病理 診断的価値のある細胞を集める 性状に応じた検体処理 原発巣の推定 細胞転写、戻し電顕などの技術的熟練 セルブロックの積極的な作製 当院で経験した悪性細胞が少数の原因 他院で穿刺されて間もなく受診 複数回、継続的な穿刺 提出された検体量が少ない 10mmスピッツ… 集細胞、検体処理の諸問題 大量に提出してもらう 集細胞、検体処理の改善 良質な遺伝子検査・細胞診検査は 臨床・病理との連携．技師のスキルアップが重要 目次 １．当院のALK・EGFR検査の流れ ・・・検体が届いてから ２．セルブロック作製 ・・・作製方法・利点・問題点 ３．セルブロック活用 ・・・運用・活用方法 セルブロック作製 現在様々な方法が考案されている。 現在当院では検体に応じて 遠心管法 ｴｯﾍﾟﾝﾄﾞﾙﾌ･ﾁｯﾌﾟ法 アルギン酸ナトリウム法 使用器具（遠心管法） エッペンドルフ・チップ法 毛細管現象でパラフィンを入れる セルブロック作製（遠心管・ｴｯﾍﾟﾝﾄﾞﾙﾌﾁｯﾌﾟ法） 遠心管法 アルギン酸ナトリウム法 原理：アルギン酸ナトリウム水溶液にCaイオンを加 えると瞬時にイオン架橋が起こりゲル化する 試薬： 1%アルギン酸ナトリウム・20%緩衝ホルマリン混合液 →１％アルギン酸ナトリウムを20%の 中性緩衝ホルマリンに溶解する 1M塩化カルシウム水溶液 →11.1gの塩化カルシウムを約100mlの蒸留水で 水溶液とする アルギン酸ナトリウム法 アルギン酸ナトリウム法 同一坦癌症例 遠心管法 各方法の利点と問題点 遠心管法・ｴｯﾍﾟﾝﾄﾞﾙﾌﾁｯﾌﾟ法 利 点：添加をしないので細胞変性が少ない． 問題点：やや煩雑で難，トレーニングが必要 微量検体では難しい場合がある メスによる怪我の可能性 アルギン酸ナトリウム法 利 点：安価，簡単，作製者間での差異が少な い．微量検体に長けている 問題点：やや細胞が変性する． 問題点 アルギン酸ナトリウム法では細胞の収縮し 細胞の間にアルギン酸が入り込む アルギン酸ナトリウム法（バック） ホルマリン固定した検体にアルギン酸を加え，遠心 余分なアルギン酸を除去し，沈渣に塩化Caを加える アルギン酸ナトリウム法 アルギン酸ナトリウム法（バック） 同一坦癌症例 各方法の運用 当院では検体量の豊富な体腔液検体は遠心管法を用 いている． 気管支洗浄液や細胞少量の検体はｴｯﾍﾟﾝﾄﾞﾙﾌ･ﾁｯﾌﾟ法 や作製者間差の少ないアルギン酸ナトリウム法 （バック）で作製している 各方法の利点と問題点を理解する 検体，細胞量で作製する方法を変える 各方法で免疫染色の染色性に問題はない 目次 １．当院のALK・EGFR検査の流れ ・・・検体が届いてから ２．セルブロック作製 ・・・作製方法・利点・問題点 ３．セルブロック活用 ・・・運用・活用方法 セルブロック作製によるメリット 分子標的薬治療の患者選択 原発不明癌の検索 悪性中皮腫における労災認定 等々・・ 将来の分子標的薬などの研究分野 出現細胞に客観性をもたせる コントロールブロックの作製 微量生検材料について ハンクス液中で増殖した真菌 アルギン酸ナトリウム法 グラム染色 細菌検査室より菌液の提供 アルギン酸ナトリウム法 終わりに 作製によって様々なメリットがあり，分子標的薬，将 来の網羅的な遺伝子解析，研究が可能であり積極的に 作製する事が望ましい コントロールブロック作製への応用 細胞診材料で出現していた細胞に客観性を持たせるこ とが出来る 標本作製コスト（医事点数）の問題がある．今後とも 動向を注視しつつ研究したい
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