Library Quantification by qPCR NEBNext Library Quant Kit for Illumina® NGS ライブラリー定量キット（qPCR） NEBNext Library Quant Kit はリアルタイム qPCR により NGS ライブラリーを定量するキットです。Bioanalyzer® などの機器による定量と比較して正確に NGS ライブラリーの収量を定量することができる上、他社同等品よりも高い正 確性と再現性でライブラリーを定量することができます。 品質の高い NGS データを得るためには、最適な量のライブラリーを NGS 機器にアプライすることが必要不可欠です。 本キットはライブラリーの濃度を正確に定量することができるので、フローセル上で最適な密度のクラスターを形成させる ことができ、品質の高い NGS データをもたらします。 特長 • Illumina® NGS 用ライブラリー定量キット • 定量用プライマーミックス付属 • qPCR により正確かつ高い再現性で定量 • スタンダード DNA 付属（4 種類の濃度） • 最適密度のクラスター形成に不可欠な定量性 • ROX 付属（2 種類の濃度）で様々な qPCR 機器に対応 Bioanalyzer® や他社同等製品より高い正確性と再現性で定量 （A）Bioanalyzer® より正確に定量 Jurkat (924 bp) E. coli P. falciparum 140 Bioanalyzer 120 100 Library Quant (nM) User 1 NEB Bioanalyzer NEB 80 60 40 20 0 様々な NGS ライブラリーを Bioanalyzer® と NEBNext Library Quant Kit で定量 した結果、Library Quant Kit の方が高い正確性と再現性でライブラリーを定量する ことができることが示された。定量性はヒト、大腸菌、マラリア原虫をそれぞれ 2-4 回定量することにより検証した。 H. influenzae E. coli IMR-90 qPCR Quant (nM) qPCR Quant (nM) qPCR Quant (nM) Jurkat (633 bp) （B）他社同等品より正確に定量 User 2 User 3 User 4 NEB NEB 他社製品 200 他社製品 100 200 100 200 100 NEBNext Library Quant Kit と他社同等製品の定量性を検証した結果、 Library Quant Kit の方が高い正確性と再現性でライブラリーを定量する ことができることが示された。定量性は 4 名の研究者がヒト、大腸菌 のライブラリーをそれぞれ 2-4 回定量することにより検証した。 NGS ライブラリー定量キット（qPCR） 様々な GC 含有量とサイズのライブラリーより最適な密度のクラスターを形成 E. coli Jurkat Jurkat E. coli H. influenzae GC Content: Input: R. palustris H. influenzae 65% 38% 51% 41% R. palustris H. influenzae R. palustris 65% 38% 65% 41% 51% 38% Library Size (bp): 310 311 341 633 638 656 900 946 958 963 qPCR Quant (nM) 100 50 0 Target Density Cluster Density (k/mm2) 1,200 800 400 0 様々な GC 含有量とサイズのライブラ リーを Library Quant Kit で定量した後、 それぞれを 8 pM に希釈して MiSeq ® （v2 chemistry; MCS v2.4.1.3） に ア プライした。その結果、全てのライブラ リーは最適な密度のクラスター（965– 1300 k/mm2, ave.=1199）を形成する こと が 示 され た。 ライブラリー 濃 度 （7–120 nM）は上段のドット、クラスター 密度は下段のカラムで表示している。 NEBNext Library Quant Kit により最適な密度のクラスターを形成 NEBNEB Target Density 他社製品 他社製品 200 qPCR Quant (nM) 150 100 50 様々なライブラリーを NEBNext Library Quant Kit と他社同等 製品で定量した後にクラスター密度を比較した結果、当社製品 で定量した方が、最適な密度のクラスター（900–1300 k/mm2, ave.=1160）を形成することが示された。定量したライブラリー （2–200 nM の濃度）は 8 pM に希釈して MiSeq®（v2 chemistry; MCS v2.4.1.3）にアプライして検証した。 0 500 600 700 800 900 1,000 1,100 1,200 1,300 Raw Cluster Density (k/mm2) NEBNext Library Quant Kit for Illumina 製品内容 • PCR マスターミックス • Illumina® ライブラリー定量用プライマー • 4 種類の濃度のスタンダード DNA（濃度検証済み） • ROX（2 種類の濃度）など 製品番号 容量 希望小売価格 E7630S 100 reactions ¥ 17,800 E7630L 500 reactions ¥ 75,500 ILLUMINA® and MISEQ® are registered trademarks of Illumina, Inc. BIOANALYZER® is a registered trademark of Agilent Technologies, Inc. ご質問は弊社テクニカルサポート（Tel：0120-963-650、E-mail：[email protected]）までお問い合わせください。 ニュー・イングランド・バイオラボ・ジャパン株式会社 〒１ ３０-００２２ 東京都墨田区江東橋２-２-３倉持ビル第２ カスタマーサービス 電話：03-5669-6193 FAX：03-5669-6194 テクニカルサポート 電話：0120-963-650 FAX：03-5669-6194 Email: [email protected] Web-site: www.nebj.jp
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