要 1 サ ケ ・マ ス 卵 の ミ ズ カ ビ病 防 除 に 関 す 約 上 より、アユ卵消毒 方法 として 「 過峻化水繁濃 1虻 6 0 0 p p m , 6 0 分処理を受精 1 時 間後に行 う。」 る研 究 独 立 行政 法 人 さけ 。ます資 源 管理 セ ン タ ー を提案 した。アユ卵消毒試験水槽実験操作マニ ュアル作成のため にアユ卵消お試験 方法及 び 条 来剤 をl t 用しない ミズカビ病防 1 1 1 方 策 の 開発 件 について 8 件 の検証実験 を行った。そ して、 を目指 して研究 を実施 した。親魚苔養条件 の卵 得 られた知見、 これ までに報告されてい る角1 見 に ケえ る影響 、お、 化サ ￨ ! 水中の ミズカビ遊走子 の 及びアユ種苗生産における経験則を基にアユ卵 動態、減菌 サ ケ卵 を用 い た ミズカビ増殖速度、 消毒試験水槽実験操作マニ ュアルの作成を行 っ 卵膜軟 化症 につい て検討 した, サ ケ親魚 の苔養 た. 本 報告 を未にアユ卵消キ の実用化 を行 う場 条得1によ り死卵率が変化す る ことが明 らか にな 合、過酸化水素製剤処理に対するアユ卵 の安全 った , フS 、 11 で i I フ 性 の評価基準が必要となるが、現れ明確化 され た r 放 は9 4 1 1以下 化用 木中 の , と あったが、 お、 化相 の排水部 では増加す ること、 ていない。そのため、魚卵消毒剤 の魚卵 に対す ミズカビの減 菌サ ケ卵 での増殖 はお、 化場 によ り る安全性評価基準 の F I H 急 な提示が求め られる. 差があ ること等 の水 カビ病 のた学的知見を集積 した, 卵 膜軟化) i : が き 茶 カテキ ンによ り防 1 1 1 で る H r 能性がある こと も示 された. 3.ア ユ 冷 水病 の 高 度 診 断 技 術 等 に 関 す る 研究 群 馬 県水 産 試 験場 2 ア ユ 卵 の 消 毒 等 に 関 す る研 究 岐阜 県河川 環 境研 究所 現 在採 用 され て い る冷水病 P C R 診 断法 は環 境 山来 のサ ンプ ル に対 して特呉性や感度 の点 で ち ■に冷水病 原1 対 内 ( 以 卜、冷水病商) を 対象 問題があ る。本課題 では、 これ らの問題 点 を改 としたアユ 卵消毒 方法 の実用化 に必 要 な基礎 デ 良 した方法 を開発 し、 冷水病 の 中期高精度診断 ー タの 収 集 を行 った。過 般 化水 索製剤 処理 に や感染経路 の解明 に資す ることを 目的 とす る. 対 して ア ユ 卵 ( 湖産 系卵 、海 産系卵 ) が 影響 本年 度 は、 冷 水病 P C R 診 断 の 新標 的領域 を探 二 を受 けない作用濃度 ・時間 の_ 1限は過酸化水素 索 し、新規診 断用 プライマ ー設計を行った. 新 6 0 分で あ った, ま た、 受精0 5 濃 度2 7 0 0 p p n l ・ の邸冴 と して、 冷 水病 藤F 標 的 領城 を冷水病 休「 ∼ 6 時 間 後 で あ れ ば1 5 0 ( ) p p n l6・ 0 分の処理 に 2 9 株 と冷水病 歯担 似 内3 5 株 の邸, ガの塩 基配列 お い て も アユ 卵 に影響 は なか った。過 酸化 水 解析 の結果、冷水病菌特 巣的 プライマ ー を設計 索 製剤 処理 に 対 して アユ 卵 へ の 過酸 化 水素 の 残留 は認め られなか った。 一 方、冷水病発病履 す ることがで きた。そ のj 凸 柱 で、 従来冷水病内 雁 の ある親女【 山来卵 の冷水病 内汚染 レベ ル は最 ‐ 高で l C F 〔I ‐ 粒 であ り、 人為的 にその 1 0 倍以上 Ⅳ のB サ ブ ユ ニ ッ ト領域 けβ/ ご) で あ った こ の 1 6 9 C F U / 粒で 汚染 された アユ 卵 に対 して も ヽ θあ αて ルカr ″ ′属 と思われる非常 に 多 内近縁 の回″ど 600ppnl・ 6 0 分で消Ⅲ 能 であ った。以 拳処理が ! 可 種 の細商が多数存在す ることがわか った。 の3 ! / 丹とされて い た領 l t r k は トポ イソメラー ゼ とを明 らかに し、アユ 生, 8環境 、 水中 には冷 ホ病 ア ユ の 冷水病 ワクチ ン等 に関す る研 究 二 重大学生物資源学部 ヽ よ θあ αて β ガ′ r,″ 本年 度 は、 アユ によ り多 くの回″ど 6 ア ユ の 冷水病 ワ クチ ン等 に 関 す る研 究 神 奈 川 県水 産技 術 セ ンタ ー 内水 面 試 験場 アユ 冷水病 の 予防対策 として、微小 な油球 中 ″ ″7 包埋 ヤ ワ クチ ンを経 I J 投, す ￨￨1球 クいてみ/ ″″′ にアユ 冷水病 ワ クチ ン ( 冷水病 1 柏 P H 9 3 0 4 株の ることを 日指 して、 ペ レッ ト飼料へ の添加 に際 ホ ルマ リ ン死 菌) を 包埋 した油球 ワクチ ンお よ して吸収性 を高めるため水分散性 に優 れた油 球 び水溶性 アジュバ ン トを添加 したアユ 冷水病 ワ クチ ンを作成 した。 アユ における免技賦 包l l L ワ クチ ン を包埋 したI M S 油 球 ワ クチ ンの 予防効 与効果 を、徳 島県立農林 水産総合技術支援 セ ン ター水産研究所 の 十 あ力 を得 て、検討 した。作成 果 につ い て検討 した。平均 体■ 1 5 g お よび2 7 g した不活化菌体包埋油球 ワクチ ン、破壊 菌体包 はIMS,由 球 ワ クチ ンを 4g/kg(BW)/日 埋油 球 ワクチ ン、アジュバ ン ト添加破壊 菌体包 て配 合飼料 に吸 若 させ て延 べ 1 0 H 間 投 与 した 埋油 球 ワクチ ンの維 「 J 投 ケでは、注射 ワクチ ン ところ、ヤ 由球 ワ クチ ンのR P S は 8 7 ∼ 3 7 5 % 、 よ りも劣 る免疫効 果 しか得 られなか った。 I M S 油 球 ワクチ ンの R P S は - 6 6 7 ∼ 2 5 0 % で あ の 人 1 : アユ ( 継代 数2 8 ) に 油球 ワ クチ ン また とし り、 い ず れ も高 い 予 防効 果 は 認 め られ なか っ た。実用 化 には さらに 予防効果 を高め る必要が 5.ア ユ の 冷 水病 ワ クチ ン等 に 関 す る研 究 あった。 福 山大学 生命 工 学 部 アユ にウサギ赤 血 球膜 を結合 させた冷水病 菌 7 ア ユ の 冷 水病 ワ クチ ン等 に 関 す る研 究 の相 リポ 多糖 ( L P S ) あ るい はホ ルマ リ ン不活 化菌 体 ( F K C ) を 混 渡投 ′ チ後、血 中抗 休価 お 滋 賀 県水 産 試 験 場 よび頭腎 白 向球 の社 内能 を測定 した. ま た、混 アユ 冷 水病 に対 す る ウサ ギ赤 向と 膜 結 合L P S 漬投 ケ前 の供試魚 の体表粘液 レクチ ン活性 につ ( R a R B C L P S ) 浸 演 ワ クチ ンお よび培 養 時 間 い て調 べ た. の異 なる維 ロワクチ ンの 有効性 を評価す ること 向中抗体価 は膜結合 L P S I ズでわずか に高 い傾 を IJ白 匂とした。RaRBC一 LPSワ クチ ンは、ワ ク 向 を示 した。頭 腎 山血球 の殺菌能 は膜 結合 L P S チ ン処理後に冷水病が 自然発4 としたため、有効 区で最 も高 くな った。 混漬投 年前 の供試魚 の体 性 を評価す ることがで きなか った。培養時間の 表粘液 レクチ ン活1 ■は 1 : 4 以 下 の低 い値 を示 呉 な る経 ロ ワ クチ ンは、2 4 時 間、3 6 時間お よ した。 したが って、 膜 結 合L P S の ほ うが F K C び5 0 時問培 養 を行 った 3 種 の ホ ルマ リ ン不 活 よ りもアユ に対す る免疫 原性 は高 い と考 え られ 化 内体 ワクチ ンの 有効性 を血 中凝集抗体価お よ る。 しか し、体 表粘液 レクチ ン活性が低か った び攻撃試験 の結果か ら討を 価 した。血中凝集抗体 ことか ら、 レクチ ンの オプソニ ン効果が弱か っ 価 の上 昇 は全ての試験 区 で認 め られなかった. た と思 われる。 攻撃試験 では、対数増殖期後期 に当たる と考 え られ る2 4 時間培 養経 ロ ワ クチ ンにお い て有意 なワクチ ンのイf 効性が確 認 された。 8.ア ユ の 冷 水病 ワ クチ ン等 に 関 す る研 究 広 島 県立 水 産 海 洋技 術 セ ン タ ー 10 養 殖 ブ リの再 興 感染症 (ノ カル ジア症 ) に 関 す る研 究 鹿 児 島大 学 水 産 学 部 浅 渡 お よび維 ￨ ￨ ワクチ ンの イf 効性 を向上 さ せ る試験 を行った, 混 演 ワクチ ンでは、 ウサギ :の防嘘 対 策 として疫 差殖 ブ リの ノカル ジア)古 P S ワ クチ ンの有効性 につい て検 討 赤 m l 球結合 I フ 学情報 の収 集を し、感染初期 におけるフロルフ した ところイf 効性 は確認 されなかった。酵 け抽 ェニ コー ル による投薬治療、原体1内の遺伝的多 出R F A の 手 前維 「1 投r J による ワクチ ン有効性 様性 お よび原因内の大量培 養法 を検討 した。技 の 向 上を検吉 J した結 呆、高濃度短期 間投与 ( 2 学 調査 の 結 果、05年 の ノカル ジア症 の 発生 は % 添 加、1 週 間連 続 ) で 効 果が あ った。 市販 例年 よ りも少なか った。投栗治療i試 験 では、05 の 飼 料添加物 を 1 カ 月岡投 与 して効 果 を検 討 年 6∼ 11月 まで ブ リを剣 育 した ところ、 試験 した ところ、 有効性 は 向 ￨ と しなか った。経 日 期 間中、実験魚群 には本症が発生 せ ず、そ の効 ワクチ ンで は、ヤ ワ クチ ンの効 果を検討 した ￨￨1球 果を明 らかにす ることはで きなか ったが、投栗 ところ水浴性 ア ジュバ ン トを加 えた超 洋波破砕 によ り,チ 臓 中の 原因内数 の減少が観容 された。 F K B ワ クチ ンにお い て、 対照 と して' ￨ ! い た他 また、投 楽 に よる成 長 の 阻年 は 認 め られ なか の! ビ 1 球ワクチ ンよ りも有効率が高か った. ヤ￨ ￨ 1 球 った。 遺伝的多様性 を明 らかにす るため、1990 ワクチ ン と酵 け抽 出R N A を 況 合 して経 同投 r 」 年 以 前分離株 8株 と1997年以 降 の 17株 を調 べ す ることで有効性が向 l i した. た 結 果、最近 の 分離株 は1990年以 前 の 分離 株 とは異 なった遣伝的多形14を示 した。 また、原 凶菌 は、 バ ッフル付 フラス コにガラスビー ズ を 9 ア ユ の 冷 水病 ワ クチ ン等 に 関 す る研 究 徳島県立農林水産総合技術支援センター水産研究所 加 え、BIIIある い はTIIBを 用 い て、25℃ で 7 H問 、旋 阿I占養 (100∼200rpm)す ることによ って大量培養が 可椛であった。 i然発病 に症状が近 い混漬攻撃法 に 冷水病 の ド よ り、安 定 したL D 抑の 測 定 が可 能 な方法 を校 討 した。生 残“t の向清抗体価 の L 昇 等 によ り感 染 の成 立を確認 したが、 菌濃度に比例 した安定 的な結 果 は得 られ なか った。 1 1 ` 養 殖 ブ リの再 興 感 染症 ( ノカル ジア症 ) に 関 す る研 究 大 分 県農林 水 産研 究 セ ン タ ー水 産 試 験 場 抗 原 の取 り込み を向 にす るために破壊 菌体 を 包理 した もの と、 水溶性 アジュバ ン トを添 加 し 養殖 ブ リの ノカル ジア症 の 感染助 長要 因 に た油 球 ワ クチ ンの 効 果 を、 2 段 階 の投 与 量 で つ い て、 物叫 的 な体 表損 傷 の 影響 の 調査 を行 検討す る とともに免嘘の持続期 間を検討 した。 った。 また、養 殖環境 中 の 原 因細 体i の分布 に 内体 を破壊 す ることで有効率 はわずかに向 上 し つい て、 調査方法 の検 討を行 った。 ブ リ体去 に た. ア ジュバ ン トを添加す ることで効 呆 に布, ま B C G 注 射針 を用 い て ム 定 の損 傷 を r 」 ぇたI X と な差が認め られたが、注射 ワクチ ンには及ばな 未 処理 区 を設 定 し、N s で ガθF r r β 0 2 4 0 1 3 株を用 か った. 4 9 H 後 の イr 効■ は1 4 H 後 に比 べ て 低 ^し 卜 た。投 r J 上の増加 による効 果 は明 らかでは い て浸漬感染 を行 った。感染実験 の結 果、体衣 で死亡が r l l く 損傷 1 文 進む傾向が兄 られ、体衣 の なか った。 損傷部分に潰場が形成 されたじ よって、体表損 傷 が 感染助 長 要囚 の 1 つ で あ る こ とが 明 らか に 対 して発揮 され た こ とか ら、 そ の主 体 は リゾ の ある 2 養 となった. ま た、 ノカルジア症発イ 4と チ ー ム であ る と判 断 された. マ ガキの リゾチ ー 殖漁場 にお い て氏泥 を採取 し、抗酸 丙培養用培 ム は消化 首袋 に二次半管 お よび和‖ 待 ) お よび外 地 に よる培 養法 とP C R 法 及 びL A M P 法 に よる 資膜 に存在す る こ とが 免疫組織 化学 的 手法 に よ 生 物学的手法 によって原因和‖ 菌 の検 出を行 分 rム り確 かめ られ た。 ったこそ の結 果、L A M P , 去 のみでH s ご ガθ筋ご遺 が検 出 され、養殖漁場 における分布調介が 伝 rム 日 J t・旨となった。 14`二 枚 貝類 の 寄 生 虫症 に 関 す る研 究 東 京 大学 大学 院農 学 生命 科 学 研 究科 1 2 . 養 殖 カ ンパ チ の 新 興 感 染症 ( 仮称 : 新 型 レンサ 球 菌症 ) に 関 す る研 究 鹿 児 島 県水 産 技 術 開発 セ ン タ ー アサ リのPβ/力 ″ ″s″ rs原虫 に つ い てITS1 5 8S rRNA ITS2領 域 の焔 基 配列 の 解析 な らび に病 Jql組 sパ原 織像 の 観容 に よ り、 アサ リのPで/あ′ 虫 は ヨー ロ ッパ アサ リや 家州 の ア ワ ビ類 の 死 新型 レンサ 球 菌お: は尾柄部 の潰場が顕者 で、 亡原 因 となって い るPビ/″,″ ,′ s″ rざθ′ sで ″と同定 さ 眼球 に共常が無 いこ とや脳和1 織内か らの 菌体確 ′ 〔 れ た。瀬戸 内海 の アサ リにお けるPで,チ ″ 樹rs坊 で ある と昨年度 に報告 したが、本年度 認が f H l 難 虫 の 奇 /L状況、lt殖度、肥満 度 の 季 節 変化 を の調介 では尾柄部 に症状が無 く、脳か ら容易 に ,′ ざ ″ rs原虫が アサ リの仕残 や 調 べ た結 果、Pビカよ 歯体 を確 認出来 る事例 がみ られた. ま た、ブ リ 生 殖 に 与え る影響 は低 い こと、 また、 ￨￨1然 感染 での発生が 増 え、 カ ンパ チでは 当歳魚 での発生 二 したアサ リを用 い て感染強度が アサ リの4十 】‖ 状 が増 えるな ど新 たな傾 向が み られた。 態 (潜砂能、ろ水と、高温而J‖:)に 及 ぼす 影響 は、S r ィタ′ θ fθ ご ご ″ r ざい甲 ′ αご ′ ブ αβ 本疾病 の原閃1 柏 を調べ た結 果、影響 は非常 に小 さい ことがホ峻 に分類 され、古産動物 出来の 同極商株 との性状 ,2ざ され た.さ らに、 アサ リをβげ力″ ″ rs原虫 で 人 比較で も数似 して い ることは既 に‖ 件 したが、 ￨:的に攻撃 した ところ、FHM時 地で は 3H後 統米 配列、遺 伝 F ム 〔 ! 、S O F i 舌1 1 セみ た 部 分ナ 多サ に、病理組織 標 本 で は29H日 に感染が 確 認 で 結果、魚類 出来菌株 と畜産出来商株 には明確 な きた。FHM培 地 に よる定甘 的検 出 で は、虫 体 C R で は魚類 由米 遣 い が あ る こ とが 判 明 し、I 〕 に1 0 ' ( c e l l s r g g i l l w e t w e i g h t ) 数は3 3 H I I は 山株 のみ を確認す ることが可能 になった. に進 したが、和1 織学的 に検 出 される虫体放は き わめて少な く、感染初期 には きわめて小 ' 4〔のま ま増殖す ることが推祭 されたち 1 3 二 枚 貝類 の生 体 防御 に 関 す る研 究 東 北 大 学 大 学 院農 学研 究科 2 0 0 5 年にアサ リか ら和[ 織化学 的 に確 認 され ヽ rデ ″ たl r t r / ′ θ ″ 〃ご ざて 力′ r , 7 g , 7,7S′ 7木 r様 で原 虫 は、P C R 反応 の結 果、M 協 1 枚サt 類の 液性 生 体 防御 囚 r の うち殺丙素 お よび リゾチ ー ム につ い て検 討 した. マ ガキ 外 会膜 の 殺 休「 活性 お よび リゾチ ー ム活性 には 似 た よ うな季節 的変化 が 見 られ、殺 内活性 は ヽ ヽ l 方ご 〆 θて θて ご ′ r ざ′ 2 rご ′ r s を代 友 とす る グラ ム 陽性 菌 と考え られた. 〃′ rで , 2木とは ざ 別租 である ぱ″? ′ 1 5 養 殖 トラ フグの血 管 内吸 虫 に 関 す る研 究 東京大学大学院農学生命科学研 究科 トラ フグにおける血管 内吸虫 の寄 生状 況 を調 の 3 県 の 中国産種苗 を用 い た 査 し、九州 ・P L l 回 養殖 トラフ グお よび 中国か ら正 送 され た トラ フ グで 奇 イ ￨ ￨ を確 認 した. 寄 生種 はす べ て 同 一 rrrん ″″s p ) 。国産種苗 を用 い 種 であった ( A でど た養殖 トラフグ、天然 トラフグお よび福井県 の 暮養 トラフグにはm l 管内吸虫 の寄生 はみ られな かった。今回採 集 した中国産 トラ フグの虫体 と 1 9 9 3 年に採 集 した福 井県産苔養 トラフ グの虫 体 の形態学 的比較 を行 ったが、共同につい て結 論 は得 られ なか った。寄生 を受 けた中卜1 産トラ フグの寄生虫学的 ・病理組織学的検査 の結果、 虫体 はお もに腹陛動脈 にみ られたが、組 織学的 には人船動脈や腎動脈内に も観察 された。血管 は虫 体 によって栓楽 し、航管内腔が拡張 して い た。 牌臓、肝眸臓、腎臓、消化管寺の腹腔内臓 器に は虫卵 のおびただ しい集積 とその周囲にお ける肉オ」 こ形成が み られた. 寄 生虫検杏 では、 虫体 よ りも虫卵 の検 出が容易 で あ り、現状 では 腸管 とい臓 の押 しつ ぶ しによる虫卵 の確 認が最 も確実 な寄生 の確認方法 と考 え られる。
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