バッファー・ 色素 制限酵素 Appendix Appendix TOYOBO販売制限酵素における基質DNAのメチル化の影響 大腸菌に含まれるdam Methylase（GATCの塩基配列中のアデニンのN6をメチル化）やdcm Methylase（CCAGGまたはCCTGGの塩 、制限酵素認識部位MethylaseなどのMethylaseにより制限酵素の認識部位にメチル化 基配列中の2番目のシトシンのC5をメチル化） された塩基を含んでいる場合、切断が阻害される場合があります。メチル化により切断阻害を受ける酵素と塩基配列を以下に示します。 酵素名 AluⅠ 切断される 塩基配列 ↓ AGCT 影響を及ぼす Methylase ↓ m M.PstⅠ ＣＴＧＣＡＧＣＴ M.TaqⅠ ＴＣＧＡＧＣＴ M.MboⅡ ＧＡＡＧＡＧＣＴ 酵素名 切断される 塩基配列 ↓ Eco RⅤ GATATC m m ＡＧＣＴＮＡＧ M.AluⅠ ＡＧＣＴ m HaeⅢ ↓ GGCC m ＣＡＧＣＴＧ m M.Sau3AⅠ ＧＧＡＴＣＣ M.MspⅠ ＧＧＡＴＣＣＧＧ m m M.BamHⅠ （4m） ＧＧＡＴＣＣ 制 限 酵 素 ↓ BclⅠ TGATCA BglⅠ GCCN4NGGC M.ApaⅠ BglⅡ DdeⅠ Dam ↓ ↓ AGATCT ↓ CTNAG CH3 ＧＣＣＮ4ＹＧＧＣＣＲ M.BalⅠ ＧＣＣＮ4ＴＧＧＣＣＡ M.HhaⅠ ＧＣＣＮ5ＧＧＣＧＣ M.MspⅠ ＧＣＣＮ5ＧＧＣＣＧＧ M.Cfr10Ⅰ ＧＣＣＮ5ＧＧＣＣＧＧＹ M.Cfr13Ⅰ ＧＣＣＮ4ＧＧＧＣＣ M.DdeⅠ ＧＣＣＮ5ＧＧＣＴＮＡＧ M.HaeⅢ ＧＣＣＮ5ＧＧＣＣ M.Sau3AⅠ ＡＧＡＴＣＴ M.DdeⅠ ＡＧＡＴＣＴＮＡＧ M.Sau3AⅠ ＧＡＴＣＴＮＡＧ m HincⅡ ↓ GTYRAC m m m m HindⅢ ↓ AAGCTT m m m m m HinfⅠ ↓ GANTC m m ＣＴＮＡＧ m M.AluⅠ ＡＧＣＴＮＡＧ M.Sau3AⅠ ＧＡＴＣ M.MspⅠ ＧＡＴＣＣＧＧ M.DdeⅠ ＧＡＴＣＴＮＡＧ m m MscⅠ ↓ TGGCCA m m ↓ Eco RⅠ GAATTC M.EcoRⅠ M.MboⅡ 5-24 m NheⅠ ＣＧＡＴＣＧ m ＧＡＡＴＴＣ m ＧＡＡＧＡＡＴＴＣ m M.DdeⅠ ＧＡＡＴＴＣＴＮＡＧ M.MspⅠ ＧＡＡＴＴＣＣＧＧ m Osaka TEL.06-6348-3786 FAX.06-6348-3833 Tokyo TEL.03-6887-8819 FAX.03-6887-8951 E-mail [email protected] m ＴＣＧＡＴＡＴＣ M.BanⅢ ＡＴＣＧＡＴＡＴＣ m m ＧＡＴＡＴＣ m M.MboⅡ ＧＡＡＧＡＴＡＴＣ M.ApaⅠ ＧＧＧＣＣＣ M.XmaⅢ ＣＧＧＣＣＧ M.EaeⅠ ＹＧＧＣＣＲ M.BalⅠ ＴＧＧＣＣＡ m m m m m M.MspⅠ ＧＧＣＣＧＧ M.Cfr10Ⅰ ＧＧＣＣＧＧＹ m m ＧＧＧＣＣ m M.HaeⅢ ＧＧＣＣ M.TaqⅠ ＧＴＣＧＡＣ M.HincⅡ ＧＴＹＲＡＣ M.HpaⅠ ＧＴＴＡＡＣ M.HhaⅡ ＧＴＹＧＡＣＴＣ M.HindⅢ m m m m m ＡＡＧＣＴＴ m M.TaqⅠ ＴＣＧＡＡＧＣＴＴ M.MboⅡ ＧＡＡＧＡＡＧＣＴＴ m m M.DdeⅠ ＡＡＧＣＴＴＡＧ M.AluⅠ ＡＡＧＣＴＴ m m M.TaqⅠ ＴＣＧＡＮＴＣ M.BanⅢ ＡＴＣＧＡＴＴＣ M.HincⅡ ＧＴＹＧＡＣＴＣ M.HhaⅡ ＧＡＮＴＣ M.MboⅡ ＧＡＡＧＡＮＴＣ Dcm ＴＧＧＣＣＡＧＧ M.BalⅠ ＴＧＧＣＣＡ m m m m m m M.EaeⅠ M.HaeⅢ M.BamHⅠ （4m） ＧＧＡＴＣＣ M.PvuⅠ （4m） 切断阻害を受ける 塩基配列 M.TaqⅠ M.Cfr13Ⅰ m M.EaeⅠ │ ↓ GATC m ＧＣＣＮ4ＧＧＧＣＣＣ ＧＣＣＮ4ＣＧＧＣＣＧ M.DdeⅠ DpnⅠ m ＴＧＡＴＣＡ M.XmaⅠ 影響を及ぼす Methylase M.EcoRⅤ m M.DdeⅠ M.PvuⅡ （4m） Bam HⅠ GGATCC 切断阻害を受ける 塩基配列 ↓ GCTAGC m M.HhaⅠ ＧＣＴＡＧＣＧＣ M.MspⅠ ＧＣＴＡＧＣＣＧＧ M.Chr10Ⅰ ＧＣＴＡＧＣＣＧＧＹ M.DdeⅠ ＧＣＴＡＧＣＴＮＡＧ M.AluⅠ ＧＣＴＡＧＣＴ m m m m テクニカルライン TEL.06-6348-3888 FAX.06-6348-3833 E-mail [email protected] 開設時間：９：００∼１２：００ １３：００∼１７：００ （土、日、祝を除く） URL http://www.toyobo.co.jp/bio バッファー・ 色素 制限酵素 酵素名 NotⅠ 切断される 塩基配列 ↓ GCGGCCGC Appendix 影響を及ぼす Methylase M.XmaⅢ M.EaeⅠ 切断阻害を受ける 塩基配列 m ＧＣＧＧＣＣＧＣ 酵素名 SpeⅠ 切断される 塩基配列 ↓ ACTAGT M.HaeⅢ PstⅠ ↓ CTGCAG M.Sau3AⅠ M.AluⅠ PvuⅠ PvuⅡ SacⅠ SacⅡ SalⅠ SfiⅠ ↓ CGATCG ↓ CAGCTG ↓ GAGCTC ↓ CCGCGG ↓ GTCGAC m ＡＧＣＴＧＣＡＧ m M.PvuⅠ （4m） ＣＧＡＴＣＧ M.DdeⅠ ＣＡＧＣＴＧＡＧ M.AluⅠ ＣＡＧＣＴＧ M.PvuⅡ （4m） ＣＡＧＣＴＧ M.DdeⅠ ＧＡＧＣＴＣＡＧ M.AluⅠ ＧＡＧＣＴＣ M.Sau3AⅠ ＧＡＴＣＣＧＣＧＧ M.XmaⅠ ＣＧＧＣＣＧＣＧＧ M.EaeⅠ ＹＧＧＣＣＧＣＧＧ M.Cfr13Ⅰ ＧＧＮＣＣＧＣＧＧ M.HaeⅢ ＧＧＣＣＧＣＧＧ M.TaqⅠ M.HincⅡ ＧＴＣＧＡＣ M.HhaⅡ ＧＴＣＧＡＣＴＣ ↓ ↓ m ＧＡＴＣＴＧＣＡＧ ＣＧＡＴＣＧ GGCCNNNNNGGCC Dcm CCCGGG ＣＴＧＣＡＧ M.Sau3AⅠ CG Methylase SmaⅠ m M.PstⅠ m ↓ CTCGAG M.TaqⅠ m 切断阻害を受ける 塩基配列 m ＴＣＧＡＣＴＡＧＴ m M.HincⅡ ＧＴＹＲＡＣＴＡＧＴ M.HpaⅠ ＧＴＴＡＡＣＴＡＧＴ M.MboⅡ ＧＡＡＧＡＣＴＡＧＴ m m m M.TaqⅠ ＣＴＣＧＡＧ M.HhaⅡ ＣＴＣＧＡＧＴＣ M.Sau3AⅠ M.AluⅠ m m ＧＡＴＣＴＣＧＡＧ m ＡＧＣＴＣＧＡＧ m m m m m m m m m m m 制 限 酵 素 m ＧＧＣＣＷＧＧＮＮＧＧＣＣ m m ＧＧＣＣＧＮＮＮＣＧＧＣＣ m M.Sau3AⅠ ＧＡＴＣＣＣＧＧＧ M.ApaⅠ ＧＧＧＣＣＣＧＧＧ m m M.HpaⅡ M.SmaⅠ M.Cfr13Ⅰ XhoⅠ 影響を及ぼす Methylase ＣＣＣＧＧＧ m ＧＧＮＣＣＣＧＧＧ M.HaeⅢ m ＧＧＣＣＣＧＧＧ m M.BamHⅠ （4m） ＧＧＡＴＣＣＣＧＧＧ M.BcnⅠ （4m） m ＣＣＣＧＧＧ 参考文献 1：C. Kessler et al., Gene, 33: 1−102（1985） 2：M. Nelson et al., Nucl. Acids Res., 12: 5165−5173（1984） ※Methylaseの後の（4m）は、メチル化された塩基がC-4-Methylcytosineであることを示します。 ※Single Letter Code R=A/G Y=C/T M=A/C K=G/T S=C/G W=A/T H=A/C/T B=C/G/T V=A/C/G D=A/G/T N=A/C/G/T Osaka TEL.06-6348-3786 FAX.06-6348-3833 Tokyo TEL.03-6887-8819 FAX.03-6887-8951 E-mail [email protected] テクニカルライン TEL.06-6348-3888 FAX.06-6348-3833 E-mail [email protected] 開設時間：９：００∼１２：００ １３：００∼１７：００ （土、日、祝を除く） URL http://www.toyobo.co.jp/bio 5-25
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