CytoFLEX システムの性能評価 James Tung1 、 Dan Donnenberg4 、 Erika Condello3 、 Albert MATERIAL AND METHODS Duggan3 、 Jesus VSSC（Violet laser Side Scatter Channel）をオプション装備 Lemus1 、 John Nolan3 、 Kathy Ragheb2 、 した CytoFLEX マルチカラーフローサイトメーター（ベックマン・コール Jennifer Sturgis2、J Paul Robinson2、Zhao, ター製）を使⽤。 Jing1 、Domenic Fenoglio1 、Yijun, Huang5 、 Paul Scibelli1 1. ベックマン・コールター株式会社（⽶国フロリダ州マ イアミ）、2. パデュー⼤学 サイトメトリー研究所、3. ラホヤ バイオエンジニアリング研究所、4. ピッツバーグ ⼤学 がんセンター、5. 中国広州 中⼭⼤学医学部 CytExpert ソフトウェアによる毎⽇の精度管理項⽬である rCV （robust CV）値を算出には、CytoFLEX 精度管理⽤（QC） ビーズを⽤いました。QC ビーズによるデータは、異なる 3 台の CytoFLEX 機器で取得しました。robust CV 値は、概ね 75 パーセ ンタイル値から 25 パーセンタイル値を差し引いた値を中央値で除した 値になります。robust CV 値は、CV 値よりも外れ値により歪みを⽣ じません。 Abstract サイトメトリー機器の性能試験は、サイトメーターによるきわめて複雑 なアプリケーションを⾏うことへの可能性を明らかにするため⾏われます。 今回、感度、ダイナミックレンジ、集団の分解能、リニアリティ、安定性、 再現性、ナノ粒⼦分解能の性能測定について新製品 CytoFLEX フローサイトメーターについて検討しました。市販のスタンダードビーズ を⽤いて、複数のパラメータの性能について評価しました。 CytoFLEX フローサイトメーターの評価は、ラホヤ バイオエンジニアリ ング研究所、パデュー⼤学 サイトメトリー研究所（PUCL）、ベック マン・コールター（所在地：マイアミ）で⾏いました。追加データは、 ピッツバーグ⼤学がんセンターの Al Donnenberg ⽒、中国広州 中 ⼭⼤学医学部との共同研究の取り組みを通じ収集しました。3 レー ザー（405 nm、488 nm、638 nm）、蛍光検出器 9 個 12 パラメータの機器を使⽤しました。ナノ粒⼦の検出には、散乱光検出 機能強化した VSSC（Violet laser Side Scatter Channel）を 使⽤しました。 分解能、リニアリティ、安定性、分離能の試験については、 Spherotech 社製 8 Peak Rainbow ビーズを⽤いました。 微粒⼦試験については、以下材料を⽤いました。 Laboratory1：ベックマン・コールター（マイアミ） Spherotech 社製ビーズ：0.5 μm および 0.2 μm Laboratory 2：ラホヤ バイオエンジニアリング研究所 Polybead Polystyrene Sampler Kit III：PolySciences 社 製# 16905-1 Polybead Polystyrene Sampler Kit II：PolySciences 社製 # 21756-1 Laboratory 3：PUCL PolySciences 社製ビーズ：0.5、0.4、0.35、0.3、0.2 μm ビー ズ Laboratory 4：中国広州 中⼭⼤学医学部 図 3. ベックマン・コールターParticle Sizing Standard 0.5 μm、0.3 μ 2 台の機器で Spherotech 社製 8 Peak Rainbow ビーズを 17 m、0.2 μm ラテックスビーズ（⾮蛍光）を試験⽤に混合。ビーズ ⽇間毎⽇測定し、ピーク#5 の rCV データをプロットした結果。 は UPW（超純⽔）を⽤いて希釈。 同等のレーザーとフィルターのセットアップで構成される他社システムと、 サイトメーターの⽐較を⾏いました。 分離指数（Separation Index）は、隣接する Rainbow ビーズ のピークの分離度（隣接するピークの平均蛍光強度（MFI）間の 差）をピークの標準偏差の幾何平均により除した値として⽰されま す。 分離指数は、次の式を⽤いて測定されました。 分離指数＝（ピーク 2 の MFI－ピーク 1 の MFI）／（SQRT （ピーク 1 の標準偏差 2＋ピーク 2 の標準偏差 2）／2） Results 図 1. QC ビーズによる 18 ⽇間の rCV 値解析 QC ビーズを本機器で 18 ⽇間実⾏しました。スタートアップおよび シャットダウン 12 サイクルを捉え、rCV 値を Levey-Jennings プロッ トによりトラッキングしました。下記データは、各レーザーに関連するパ 図 4. ラメータです。 CytoFLEX（ 3 レーザー10 カラー）の Spherotech 社製 8 Peak Rainbow ビーズのデータ。（データはピッツバーグ⼤学がんセンターよ りご提供いただきました。） 図 2. 8 Peak Rainbow ビーズにより連続 1 時間実⾏した場 合の rCV 値 CytoFLEX で Spherotech 社製 8 Peak Rainbow ビーズを連続 1 時間測定しました。ピーク#5 の rCV データでは、PE：2.12%、 APC：4.40%、BV421：2.34%となり、本システムの安定性を ⽰しました。 図 5. 図 7. Spherotech 社製 8 Peak Rainbow ビーズよるビーズのピーク間の 微粒⼦の検出。4 施設において、側⽅散乱チャンネルおよび VSSC 分離指数算出データをハイエンドタイプの標準的なフローサイトメー を⽤いたビーズによるナノ粒⼦の測定を⾏いました。（データはピッツ ターとの⽐較した結果。（データはピッツバーグ⼤学がんセンターより バーグ⼤学がんセンター、PUCL、ラホヤバイオエンジニアリング研究所、 ご提供いただきました。） 中⼭⼤学医学部よりご提供いただきました。） 図 6. Spherotech 社製 8 Peak Rainbow ビーズによるピーク間の分離 指数算出データをハイエンドタイプの標準的なフローサイトメーターと ⽐較した結果。データは、特に⾚⾊チャンネルの感度に関して表⽰い ます。（データはピッツバーグ⼤学がんセンターよりご提供いただきまし た。） SUMMARY 性能評価結果から、CytoFLEX サイトメーターの安定性、再現性、 感度が、特に紫⾊チャンネルおよび近⾚外チャンネルにおいて⽰され ました。分離指数により CytoFLEX の分離能は、⼀般的なセルアナ ライザーよりも優れていることが⽰されました。 ナノ粒⼦の評価では、VSSC を⽤いた場合、ノイズから 0.2 μm の 粒⼦の明確な分離検出できることが⽰されました。さらに、 CytoFLEX フローサイトメーターは、サブミクロンビーズの各サイズを明 確に識別できます。 CytoFLEX および CytExpert は、Beckman Coulter company の 1 社 Xitogen Technologies, Inc.（蘇州）の商標です。Fast track to success は Beckman Coulter, Inc.の商標です。Beckman Coulter および Beckman Coulter ロゴは、Beckman Coulter, Inc.の商標であり、⽶国特許商標庁 （USPTO）に登録されています。 2015.9
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