Reverse Transcriptase XL

Reverse Transcriptase XL (AMV)
Code No. 2620A
Size: 500 units
Shipping at ー 80℃
Store at ー 80℃
Supplied Reagents: 10X/5X Reaction Buffer
Storage: In order to conserve optimal activity, it is strongly
suggested that the enzyme be aliquoted and stored at -80℃,
although storage at -20℃ is adequate for short periods of time.
Repeated freezing and thawing results in loss of enzyme activity.
Do not store this enzyme in a frost-free freezer.
Lot No.
Conc.:
Volume:
Expiration Date:
units/μl
μl
Description:
Reverse Transcriptase XL (AMV) is a RTase that is isolated from Avian
myeloblastosis virus.
It consists of the αβ holoenzyme of molecular weight 157,000 daltons.
This enzyme is highly purified, free of nucleases, and is qualified for use in
cDNA synthesis using RNA templates approaching 10 kb in length.
This enzyme has an associated RNase H activity independent of cDNA
synthetic activity.
Storage Buffer:
200 mM
2.0 mM
0.2 %
50 %
Source: Potassium Phosphate, pH7.2
DTT
Triton X-100
Glycerol (v/v)
Purity:
1. RNase Assay
RTase XL (AMV) was incubated with an RNA Ladder (0.5 to 9.0 kb) at a
ratio of 20 units of RT per μg of RNA for 2 hours at 37℃. Electrophoretic
analysis of the RNA in an agarose gel indicated no greater than the
equivalent of 8 x 10-8 units of RNase A.
2. DNase (endonuclease and exonuclease) Assay
50 units of RTase XL (AMV) was mixed with 0.5 μg of φX174 Hae III
fragments and incubated for 3 hours at 37℃ in a reaction buffer. No
more than the equivalent of 1.25 x 10-4 units of DNase I was detected
after electrophoretic analysis.
Note :
The optimum temperature rage appears to be 42 - 58℃. When performing
cDNA synthesis at temperature higher than 50℃, a short pre-incubation at
42℃ for 4 minutes is recommended.
Composition of Supplied Reagent:
10X/5X Reaction Buffer
250 mM Tris-HCl, pH 8.3
500 mM KCl
20 mM DTT
50 mM MgCl2
※It is recommended to use this buffer at 10-fold dilution for usual cDNA
synthesis.
References:
1) Hellman GM, Shahabuddin M, Shaw JG, and Rhoads RE (1983)Virology
128 , 210-220.
2) Houts GE, Miyagi M, Ellis C, Beard D, and Beard JW (1979) J.Virol .29 , 517522.
3) Shimomaye E, and Salvato M (1989) Gene Anal.Tech . 6 , 25-28.
4) Fuchs B, Zhang K, Rock MG, Bolander ME, and Sarkar G.(1999) Mol.
Biotechnol . 12, 237-40.
5) Maniatis T, et al (1982) Molecular Cloning, Cord Spring Harbor Laboratory,
217-229.
Avian myeloblastosis virus
Unit definition:
One unit is defined as the amount of RTase XL (AMV) required to catalyze
the incorporation of one nmol of [3H]dTTP into an acid-insoluble product
in 10 minutes at 37℃ using poly (rA)･(dT)12-18 as template primer.
Assay Conditions for unit definition:
50 mM Tris-HCl, pH8.3
40 mM KCl
6.0 mM MgCl2
4.0 mM DTT
0.4 mM poly (rA)･(dT)12-18
0.5 mM [3H]dTTP
2-4 units RTase XL (AMV)
cDNA Synthesis Test:
1.0 μg of Poly A-tailed RNA Ladder (0.5 - 9.0 kb) was incubated with 5.0 units
of RTase XL (AMV) at 41℃ for 1 hour.
The transcription efficiency and the rate of full length cDNA was analyzed
by alkaline gel electrophoresis and TCA precipitation.
This product is manufactured by Life Sciences, Inc.
Note
This product is for research use only. It is not intended for use in
therapeutic or diagnostic procedures for humans or animals. Also, do
not use this product as food, cosmetic, or household item, etc.
Takara products may not be resold or transferred, modified for resale
or transfer, or used to manufacture commercial products without
written approval from TAKARA BIO INC.
If you require licenses for other use, please contact us by phone at
+81 77 543 7247 or from our website at www.takara-bio.com.
Your use of this product is also subject to compliance with any
applicable licensing requirements described on the product web
page. It is your responsibility to review, understand and adhere to
any restrictions imposed by such statements.
All trademarks are the property of their respective owners. Certain
trademarks may not be registered in all jurisdictions.
v201403_3
Reverse Transcriptase XL (AMV)
Code No. 2620A
Size: 500 units
Shipping at ー 80℃
Store at ー 80℃
添付試薬 :10×／5×Reaction Buffer
保存：ー 80℃凍結保存。短期間（6 ヵ月）であればー 20℃保存
でもよい（凍結、融解の繰り返しは、活性が低下する可能性が
あるため避けること）。
Lot No.
濃度
容量：
品質保証期限：
（英分面をご覧ください。）
（英分面をご覧ください。）
（英分面をご覧ください。）
（英分面をご覧ください。）
●製品説明
本酵素は、Avian myeloblastosis virus から単離された、分子量約
157,000 daltons のαβ型 holoenzyme の逆転写酵素である。本酵素は、
Nuclease-free にまで高純度に精製したものであり、約 10 kb の RNA を
鋳型とした cDNA 合成に使用できることを確認している。
本酵素は cDNA 合成活性とともに、RNase H 活性も保持している。
●形状
200 mM Potassium Phosphate, pH7.2
2.0 mM DTT
0.2% Triton X-100
50% Glycerol（v/v）
●起源
Avian myeloblastosis virus
●純度
1．RNase Assay
本酵素と RNA Ladder（0.5 ～ 9.0 kb）を 1 μg RNA あたり 20 units の
割合で 37℃にて 2 時間反応させ、RNA のアガロースゲル電気泳動に
より、RNase A 当量として 8×10-8 units 以下であることを確認して
いる。
2．DNase Assay（endonuclease、exonuclease）
50 units の本酵素と 0.5 μg のφX174 Hae III fragments を、反応液
中 37℃にて 3 時間反応させ、電気泳動により DNase I 当量として
1.25×10-4 units 以下であることを確認している。
●使用上の注意
本酵素の最適反応温度は 42 ～ 58℃であるが、
50℃以上で反応を行う場合、
42℃で 4 分間インキュベート後、50℃以上で反応を行うことが望ましい。
●添付試薬組成（保存：ー 20℃）
10×／5×Reaction Buffer
250 mM Tris-HCl, pH8.3
500 mM KCl
20 mM DTT
50 mM MgCl2
※通常の cDNA 合成には 1／10 希釈での使用をお勧めします。
● 参考文献
1）
Hellman GM, Shahabuddin M, Shaw JG, and Rhoads RE (1983)Virology
128 , 210-220.
2）
Houts GE, Miyagi M, Ellis C, Beard D, and Beard JW (1979) J.Virol .29 , 517522.
3）
Shimomaye E, and Salvato M (1989) Gene Anal.Tech . 6 , 25-28.
4）Fuchs B, Zhang K, Rock MG, Bolander ME, and Sarkar G.(1999) Mol.
Biotechnol . 12, 237-40.
5）Maniatis T, et al (1982) Molecular Cloning, Cord Spring Harbor Laboratory,
217-229.
●活性の定義
Poly(rA)・oligo(dT)12-18 を鋳型／プライマーとし、37℃、10 分間に 1 nmol
の [3H]dTTP を取り込む酵素活性を 1unit とする。
●活性測定用反応液組成
50 mM Tris-HCl, pH8.3
40 mM KCl
6.0 mM MgCl2
4.0 mM DTT
0.4 mM poly (rA)･(dT)12-18
0.5 mM ［3H］dTTP
2-4 units RTase XL (AMV)
本製品は Life Sciences 社で製造されたものです。
● cDNA 合成試験
Poly A-tailed RNA Ladder（0.5 ～ 9.0 kb）1.0 μg と本酵素 5.0 units を 41℃
で 1 時間反応後、アルカリゲル電気泳動および TCA 沈澱により、転写効
率および完全長 cDNA 合成率を確認している。
● 注意
本製品は研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床
診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、家
庭用品等として使用しないでください。
タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための
改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。
ライセンスに関する最新の情報は弊社ウェブカタログをご覧ください。
本データシートに記載されている会社名および商品名などは、各社の
商号、または登録済みもしくは未登録の商標であり、これらは各所有
者に帰属します。
v201403_3
製品についての
技術的なお問い合わせ先
TaKaRa テクニカルサポートライン
Tel 077-543-6116
Fax 077-543-1977

Download Report