pUC 118 Eco RI/ BAP

pUC 118 Eco R I/ BAP
Code No. 3320
Purity :
1. This product shows single band on 1% agarose gel electrophoresis.
2. When transformation was performed by this product after treated
with T4 DNA Ligase, background transformants was detected below
1% compared with the case of using uncleaved pUC118.
3. When this product was used for transformation of E. coli JM109
competent cells (1 x 107 transformants/ 1 μg pUC118) after treatment with T4 Polynucleotide Kinase and subsequent treatment with
T4 DNA Ligase, it was shown that the efficiency of transformation
was above 1 x 106 transformants/ 1 μg DNA. White colonies were
detected below 1% in addition of IPTG and X-Gal.
Shipping at － 20℃
Size: 5 μg (0.1 OD)
Store at － 20℃
＊ 2 years from date of receipt under proper storage
conditions.
Lot No.
Concentration :
μg/μl
Volume :
Application example :
μl
pUC118 DNA Eco R I/ BAP
DNA fragment/Eco R I
TE buffer
50 ng (25 fmol)
25 fmol - 250 fmol
up to 5 μl
DNA Ligation Kit <Mighty Mix> (Cat. #6023) Ligation Mix
Description :
This DNA is a useful cloning vector, prepared by cleavage with Eco R I
which is an unique site in multi-cloning sites of pUC118, then dephosphorylated with alkaline phosphatase purified from E. coli (BAP). This
DNA is able to prevent self-ligation of vectors, and also able to decrease
blank value of transforming cells. Thus, this DNA is available to cloning
without other treatment.
Form :
5 μl
16℃ , 30 min
Transformation
Reference :
1) Vieira, J. and Messing, J. (1987) Methods in Enzymolgy , 153, 3-11.
M13IG
10 mM Tris-HCl, pH8.0
1 mM EDTA
Preparation :
Plasmid DNA pUC118 prepared by CsCl-EtBr ultracentrifugation was
digested with Eco R I, followed by dephophorylation with Alkaline Phosphatase (BAP).
pUC118
Ampr
(3,162 bp)
Base pairs :
3,162 bp
(Calculated from the construction methods used by Messing, et al. )
lacZ
P
GenBank :
pUC 118 : Accession No. U07649
ori
O
multi-cloning site
Cloning site of pUC118 :
lacZ
231
287
5’ ー G A A T T C G A G C T C G G T A C C C G G G G A T C C T C T A G A G T C G A C C T G C A G G C A T G C A A G C T T G G C ー 3′
Eco R I
Sac I
Kpn I
Sma I
Xma I
Bam H I
Xba I
Pst I
Sal I
Acc I
Hin c II
Sse 8387 I
Sph I
Hin d III
Note
This product is for research use only. It is not intended for use in
therapeutic or diagnostic procedures for humans or animals. Also, do
not use this product as food, cosmetic, or household item, etc.
Takara products may not be resold or transferred, modified for resale
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v201106Da
pUC 118 Eco R I/ BAP
Code No. 3320
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Size: 5 μg (0.1 OD)
Store at － 20℃
＊適切に保存し、受取り後 2 年を目途にご使用ください。
Lot No.
（英文面をご覧ください。）
濃度：
容量：
（英文面をご覧ください。）
（英文面をご覧ください。）
●製品説明
pUC118 Eco R I / BAP は、マルチクローニングサイトで１か所のみ切断す
る制限酵素 Eco R I を用いて pUC118 を消化し、大腸菌由来アルカリホス
ファターゼ (BAP) により脱リン酸化を行ったクローニングベクターであ
る。ベクターだけのセルフライゲーションが妨げられ、形質転換細胞の
ブランク値を下げることが出来るため、そのままクローニングに使用す
ることが出来る。
●形状
●純度
1. 1% アガロース電気泳動において単一バンドを示す。
2. pUC118 Eco R I/BAP を T4 DNA Ligase で処理し、形質転換を行った
場合の background transformants は未切断 pUC118 を用いた場合の
1% 以下である。
3. pUC118 Eco R I/BAP を T4 Polynucleotide Kinase により、5'- OH 末端
をリン酸化し、T4 DNA Ligase で処理し、E. coli JM109 Competent
Cells (1 × 107 transformants/ 1 μg pUC118) を用い形質転換した場
合 1 × 106 transformants/ 1 μg DNA 以上の効率が得られることを確
認している。なお、IPTG、X-Gal を添加した場合の白色のコロニー出
現率は 1% 以下である。
●使用例
pUC118 DNA Eco R I/ BAP
DNA fragment/Eco R I
TE buffer
50 ng (25 fmol)
25 fmol ～ 250 fmol
up to 5 μl
DNA Ligation Kit <Mighty Mix>（製品コード 6023）の Ligation Mix
5 μl を添加
16℃、30 min 反応
形質転換を行う。
●参考文献
1) Vieira, J. and Messing, J. (1987) Methods in Enzymolgy , 153, 3-11.
M13IG
10 mM Tris-HCl, pH8.0
1 mM EDTA
●調製
CaCl-EtBr 超遠心により精製したプラスミド DNA pUC118 を制限酵素
(Eco R I) により完全分解し、大腸菌由来アルカリホスファターゼ (BAP) を
用いて脱リン酸化を行った後、精製した。
pUC118
Ampr
(3,162 bp)
●鎖長
3,162 bp（Messing らの構築方法より計算した値）
lacZ
● GenBank への登録
pUC 118 : Accession No. U07649
P
ori
● pUC 118 クローニングサイト
O
multi-cloning site
lacZ
231
287
5’ ー G A A T T C G A G C T C G G T A C C C G G G G A T C C T C T A G A G T C G A C C T G C A G G C A T G C A A G C T T G G C ー 3′
Eco R I
Sac I
Kpn I
Sma I
Xma I
Bam H I
Xba I
Pst I
Sal I
Acc I
Hin c II
Sse 8387 I
Sph I
Hin d III
● 注意
本製品は研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨
床診断用には使用しないようご注意ください。また、食品、化粧品、
家庭用品等として使用しないでください。
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v201106Da
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