Kobe
University Repository : Kernel
Title
黴類のタンニン分解酵素に関する研究 (第1報) : 酵素力
測定法及び選択菌の酵素力
Author(s)
西羅, 寛 / 麦林, 楢太郎
Citation
兵庫農科大學研究報告. 農芸化学編 , 1(1): 6-10
Issue date
1953-12
Resource Type
Departmental Bulletin Paper / 紀要論文
Resource Version
publisher
URL
http://www.lib.kobe-u.ac.jp/handle_kernel/81008118
Create Date: 2015-02-01
徽類のタンニシ分解酵素に関する研究
(
第 1報)酵素力測定法及び選択菌の酵素力
西羅
寛，衰林檎太郎(政経学講座)
StudiesontheTanninDecomposingEnzymeofMolds.
ぜ
(
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.)Method，cif ，~ dètermination o
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ルのみを炭素源とする誌養基に生育し得 T
こ事等から，
苦
言F
緒
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"
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Tannase の認をさしひかえタンニン分解酵素を称して
著者等は当大学の立地条件から，称産物利用加工部面
おく.伺普通商品のタンユンは生極的夜殴に対して病的
の基礎的研究として， 徽類のタンエン分解酵素の実験を
緊酸とも言はれるヒ・ロガロ戸、 1~ 1ff酸に属するガ 17 P!:/ ニ
a
企図した.タンニン分解酵素所謂 T
annaseとは， 1786
年
S
Cl
IEELE1)が発見した酵素でi 甑めて復維な化学主要成
ンである J今回は共の実際的及応用方面を考え日本薬局
法の T
a
n
n
i
c
a
c
i
dを慈賞として用いる事にした.
を持ち街化学構造の詳細は不明である夕、
ン=ンを加水分
n
.汁タン=ン分解カの強い伎用菌穫の選択 ー
解して，浸食子酸と他の物質にする酵素である.
T
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eは2つ
以上の OHをもった P
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n核平置換せ る C
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}基と任意
接せ、
子に直接 B
H之の聞の Esterァ結合に特異性を有する 1種の酵
のO
その他合計 2
3
:
S
t
r
a
i
n
sのタンニン含有培地で、の試験の
素であるよ放に次の諸物質も基質どなり得るわけであ
結果， p!ンニン 10%の高濃度域地でも何生育し符たもの
る:.
Mdhy}.
:
g
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1a
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)，A
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DYOJrERfIÓÙ 及 .AR~!BRUSTER21 によると :
a
OHOH
l Lベ
)
ーCO・
0
:
:
(
，
.
'HO"
HzO
)ー→ 2
COOH
る.紛状菌については
の 4株であったと報告している.小田氏10)は6
1菌株から
A
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s，A
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eFor例 aTannaseの2株を，
福木氏11)は多数の菌株から P
e
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-
→
CHs'
叫
Q
ー
'
，" .
'
.CH
下
1
〈0
OH
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り炭素源としてタン二ンのみを加え
H
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山
CH
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叫
-COOH 等
1OQ
〈OOHJ2HO
OH
OH
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，
株)から， "
'(NH
，
hSO
，B
'，Aの3
T
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n
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i
n5%合成績地を用いて N
o
.
8
0
、
菌を選択した. (福本博士に厚く感
謝申し上げる). 更に問主主地を用い
各種資料の中から分解カの強い菌の
.分離を試みたが， 得た菌株は Pen
'
ic
i
l
l
i
u
ms
p
.，A
.o
r
-
今回使用の降素は純イむしておらず従って他の諸酵素を
含んでおり
た培地にもよく生育し得る事実に基
き
の
， 福本鰐土より御分譲頂いた
，
首
ロ
"
の
i
l
l
i
u
m 属の強力機を夫々分離選択
している之等菌種は他の菌類と泉
HO
..HO
!
.
.
.
¥
HzO. ... ~
HO-( "
')-CO・
OCHa
HO-( ー
)COOH +
: CHsOH
古0 ・ーー・
8
KNUD30N
)
9
)の広汎な研究があり，
氏によれば P
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u附属， A
s
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u
s属，
Mucor属 '
H
日 0-(
.
・
H-
、
レ(
O 一一八 U
HI/¥fH
ι
HO
，
該酵素は徽績苦手苔績等に認められているのみで川町高
等の動樋物組織については研究わめ7)はあるが倫疑問であ
y
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.，
'A
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g
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r‘s
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.の 3種演のみであって，その菌
}hOf
I
OLSON 等坊が生巳た没食子酸を更に分
解する P
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eを c
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l
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e
e に証明しており事実
総の発育と分生芽胞の形成状態から標準菌株に比べで胞
今回の使用菌類が強弱はあるが没食子酸或はピロガロ戸
子f
資生能の大変亭く且強い A.njgers
p
・
.
(分離 1
0
号)を
6
XI
I
，1953
農 芸 化 学 篤
選ぴ，標準菌株として A
.njger，以上3菌株を用いる事
A
.
O
.
A
.
C
.17)によると骨炭の使用も可能でふるが，今回入
手出来た C
aseinumn
a
c
hHammarsten，市販カゼインを
にした.
脱閉したもの，標準として皮粉の 3者について光づタン
m
. タン 二ン分解酵繁カ;則 J定法の検討
=ン吸着能を比較した.その結果は T
ab!e1
.に示す様
にC
aseinumn
a
c
hHammarsten，皮粉は相違がなく市販
慈賞としてタンエンを用いたから，測定法として 1
)生
成する没食子酸の定量，2)未分解残タンニン量の定量が
カゼインを脱指したものは劣る事を知った.RHIND-SMI-
考えられる.中和;
商定による
TH 主主使用の結果隣」題?
と なるのは
FREUDENBZRG法的及 DICK-
7
*).上七色7
ど量による DEYS-DIJKMAN
法
， NICHOLS開放:の及
NICHOL3EN
良法H〉
，沃素滴定に基礎をおく
樹齢鋼その他の試薬を用いる
作の点
， 3
)終末点， 4
)唆茂カゼインの務返の点の 4点で
と N IER B: NS~'EIN の改
)
2
)の点は Tab!e2
. より明らかな様に，!
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g
oある. 1
F EJ{DINAND JEAN法的，
DREAPER 留め， A.
O人
1
)!
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n2
0
c
c
と更に蒸潤7
.
1
<7
5
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c
cを用いる点， 2
)カゼイン 2回媛着操
ERHOI
'F-ARMBR
U3TER
C
.
c
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i
n，蒸溜水の使用量は原法の 1
/
4
査でも低濃度タンユ
記載の各種の方法的等があるが .KNUDSO目的も指摘して
.1-0.15%のタンニンの低濃度
ン溶液で、は差異なく，又0
いる様に現在何普扇適確な方法がない.福木氏 11)は Lo
・
であればカゼイン 1回吸鷲で略脱タンニンの目的を達す
~ENTHAL 法的を，小田氏 10) は RRIND-SMITR 法を採用して
る事が出来た.何 1
/
4量使用の方が終末点距離で取扱が
いる
LOVENTHAL 法 I
S
)は皮粉或はゼラチンにてタンニ
非常に簡便である. 3
)の終末点はl
京法その他によれば溶
ンを除きインヂゴカルミンを指示薬として其の前後を
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n
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o
!
o
r
) の現われる点と
液の周聞に淡赤色 (
KMnO
，にて滴定し， その差に係教を乗じて測定する方
O.
A.C.
あるが，如何にしても此の点、を見出し得ず， A.
1
旨肪のカゼインにてタ
によれば i
b
!
u
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o
!
o
rが g
r
e
e
nに変化するまで、 KMnO
，
法であり，
RHIND-SMITR法的も無
ンユンを除 t
rLoVENTHAL 法と問燥にして測定する方法
を加えた後，更に数滴の KMnO
，の添加により， g
o
!
d
e
n
で，何れにしてもタンユン吸着除去の唆清浄j
が問題にな
y
e
l
l
o
wにな る点が終末烹」とあり，これによればflF.礁に
るわけである，住木氏刊〉は鮫，鯨，いるかの皮を用いるタ
知り得るので此の点を終末点とした. 4
) の点について
ンユン定量用皮粉代用品の探;f;を行っている が，従:
東輸
，層を通して
は，小田氏に よれば猿紙とに保った BaSO
入している皮粉に優るものはないと報告し てい る. 他に
務過した{通俗に上り街!指示頂いた小田博士に感謝申し
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7
。
~.l O
兵庫農科大学研究報告
第 1巻 第 1号
上げる)との事であるが，東洋穣紙 No.5Cのみで充分そ
s.
食塩水 30cm
1:加え，
重量麹を乳鉢にてよく砕腐して 1%
の目的を達する事を知った.以上の点を考慮に入れて次
2
50Cで3-4
時間抽出(トルオ戸ル添加 の もと)淀過し滞
の様?こ R
E
I
I
N
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S，
¥
I
I
T
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I法を少し変えて用いる事にした.
液をそのまま酵素液とした. a
)タンニン添加重量産量と怒の
即ち該酵素液と基質タンニン，緩衝A{， トルオ【;1.-を加
みの麹との分解力の比較試験.反応混液組成:基質 O.1~;>
え恒温水槽にて所定の温度に保ちタンニンの按少量を測
タンニン溶液l
O
cc，酵素液2
c
c，焼駿綬衡液 N 溶液 (pH
定する.試薬1.約 0.1~品 KMnO，液:既知濃度の蕗酸
1
0
5
.
8
)
ηを2
c
c
，蒸溜水 4
c
c，トルオ戸;1.-を 1-2滴，総容
アンモニウムに て共 の 濃 度 を 決 定 す る . 試 薬 2.0.5%
2
0
c
c
.作用温度 4
00C
2
)， 作用時間信時間，
I
n
d
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g
o
c
a
r
m
i
n液 : 稀硫酸溶液とする. この溶液を指
における諸実験の中 No.80菌鼠についての 1例をあげ
示薬として用いるのでゐるが先づ此の指示薬によ って使
a
b
!
e3
.の如く である.タンニン分解酵素はタン
ると T
以上の条件
，溶液の量を測定する.その為に此の
用される KMnO
長生 される所謂適応的に産生
ニンの存在する時にの み E
c
cを1L
容磁製ピ【カーに取り蒸溜水 1
80
ccを
指示薬液5
される酵素である . A
s
p
.n
i
g
e
r，分離 1
0号も適応的酵
加えよく振皇室しながら KMnO
，溶液にて滴廷する.実
素の点に於ては同犠な結果を得た. b
) 酵素と基質濃度
.mし 基 質 濃 度 の み
の終末点は前述の通りである.此の滴定で指示薬によ っ
) と同じ
との関係・各種条件は a
，溶液の量を知る. タン ニンの定
て消費される KMnO
を1
.5%， 1%
， 0
.
5%
， O.l~;> とかえて実験した.タン
量法.反応混液25-2
O
ccをとり，其の中 4
c
cを磁製ピ戸
ニンは玄白質系統の沈殿剤でもあり，現在までの知見に
カー (
1L容)にピベ 7 トし，これに I
n
d
l
g
o
c
a
r
m
i
n液 5
c
c
より加水分解酵素の殆んど大部分が産自或は蛋白 に密接
と蒸溜水1
80
c
cとを加え前述の如く KMnO
，溶液にて滴
な関係のある物質とすれば，備更該酵素の基質濃度が問
足する.次に残りの 2
1cc-16ccに Caseinumn
a
c
hHa-
題になる. この実験が T
a
b
l
e4
.で
， 0
.]%では明らか
mmarsten1
9を加えて良く振還し 1
5分間放置後東洋湾
に分解作用を認めるが 0
.5%では給、弱く，それ以上の基質
紙 No.5Cにて滞過する.この様にし てタンニンが除去
濃度では認めなかった
c
cをヒ・ベットし前述の如く KMn
された後の耀液中より 4
分解酵素力試験.慕貿濃度 0
.]%，]%， 2%につ いては
0，溶液にて滴定する.前後2回の滴定値の差が末分解残
T
a
b
l
e
5
.の如く. 1
9
6，2~().基質漣度では ，
タンニンの量を示す.確酸アンモニウム 1
9ばガロタンニ
8時間或は
時聞が 5日で も分解を認めない. 0.]%では 4
.
め4
8
gに相当する.
ンo
c
) 時間的経過に伴うタンユン
t
ことえ作用
それ以内で分解し得る長高に達する様である.基質濃度
W
. REIINP-SMITEI法によるタンこン分解酵素カ実験
0.3% (
R
E
I
I
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P
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I
T
E
Iの用いている濃度)で、
の実験 !
l
F
i
g
.
酵素液の調整.種々実験の結果，滋5
gに所用量のタン
タンユン分解力主主く No.80は比鮫的徐々に分解，最後
1
. (A)(B)の如く，使用した 3菌株の中分離 1
0
号が最も
t
ニンを加え(対照はこの弱合タンニンを加えない)水道7
には 3菌株共に路間程度ま で分解し得る.併し培養日数
3
4
.
5
c
m
5l
b
s3
0分加圧殺菌後，
を添加してよく混合し，1
の長い麹では (B) の如くタンニン分解カは減少するが
0cC で所用日数 (
2
新しい勉汁培養菌株を1白金鈎移植， 3
No.80で』主特に甚しい. d
)製勉に際しタンニン添加量
-3日培養が最適であった)培養した.この様に して得た
の該酵素生産に及ぼす影轡.前述の試験結果の如く該酵
Table3
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長庫渓科大学研究報告
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