HPLC Tech-Info（20） ELSD：蒸発型光散乱検出器-紫外光吸収の巻 昨今、蒸発型光散乱検出器（ELSD）は、HPLCの一検出器として使用者に広く認知されるようになってきました。しかし、 現在HPLCにおいて最も使用されている検出器はUV（-Vis）検出器です。UV（-Vis）検出器は、光吸収のある物質であれば検 出できる、汎用性の高い検出器です。ELSDもまた、検出対象物質が検出途中で気化しなければ、ほとんどの物質を検出できる、 汎用性の高い検出器です。ELSDは、UV検出器と比べてシグナルが小さいと言われていますが、UV(-Vis)検出器のように検出 波長によってシグナルの大きさに影響を受けないため、検出器の選択波長によってはELSDに利点がある場合もあります。それ 故、ELSDの1つの使い方として、UV(-Vis)検出器とELSDを直列につなぐことがあります。より多くの情報があるクロマトグラ ムを得ることが出来るからです。ここでは、検出波長ごとによるUV(-Vis)検出器とELSDの違いについて記載します。 190 吸収波長（nm） 物質名 ・フルクトース ・グルコース ・スクロース 構造式 272 吸収波長（nm） 物質名 ・ニコチン酸 ・テオフィリン ・カフェイン 構造式 210 230 ・クエン酸 ・アラントイン ・琥珀酸 ・p-フェノールスル ・ピログルタミン酸 ホン酸亜鉛 254 ・ウラシル ・グリチルリチン酸 300 ・インドメタシン Gilson 社 HPLC 用ポンプ 321 と SofTA 社 ELSD モデル 300S HPLC Tech-Info（20） ELSD と UV-Vis：絶対量と検出波長（短波長領域） （検出波長：190nm フルクトース、グルコース、スクロース ： ELSD が向いている場合） 分離条件： ELSD 移動相 ACN/水＝80/20 流速 1.0ml/min,、T=40℃ Shodex AsahipaK NH2P 4.6X150mm SC/DT＝30/60、各 1μg 注入 UV 検出器では、移動相に吸収があるような分 UV インジェクション 析系の場合、インジェクションショックなどが ショック クロマトグラムにそのまま影響します。ELSD では、S/N 比が良好で感度もよく、また、吸光 係数のような化合物特有の性質の影響を受け ることが少ないため、その応答性も均一です。 （検出波長：210nm クエン酸、琥珀酸、ピログルタミン酸：ELSD が向いている場合） 分離条件： 移動相 0.1%蟻酸（pH 2.8） ELSD 流速：0.3mL/min、T=40℃ インタクト社 Unison UK-C18 3x75mmL SC/DT=25℃/50℃, 各 1μg 注入 有機酸を UV 検出器で測定する場合、210nm とい う短波長を使用するので、サンプルの応答性の違 インジェクション UV いが問題となります。一方、他社 ELSD では、揮 発性緩衝液を移動相に用いても、ベースラインノ ショック イズが問題となることがあります。しかし、SofTA 社 ELSD では、揮発性緩衝液を移動相として使用 できる機構を持っています。また、サンプルは同 量であるにもかかわらず、210nm の検出では応答 に大きく差が出ていますが、ELSD ではそのよう なことはありません。 www.technosaurus.co.jp □東 京 □大 阪 □福 岡 〒162-0805 〒532-0005 〒812-0054 TEL:03- 3235-0661/FAX:03-3235- 0669 TEL:06-6396- 0501/ FAX:06-6395-2588 東 京 都 新 宿 区 矢 来 113 番 地 大阪市淀川区三国本町 2 丁目 12 番 4 号 福 岡 市 東 区 馬 出 1 丁 目 2 番 23 号 TEL:092-631-1012 / FAX:092-641-1285 HPLC Tech-Info（20） ELSD と UV-Vis：絶対量と検出波長（230～254nm） （検出波長：230nm：アラントイン：ELSD と UV がほぼ同等感度の場合） ELSD 分離条件： アラントイン p-フェノールス 移動相 0.1%蟻酸（pH 2.8） ルホン酸亜鉛 流速：0.3mL/min、T=40℃ UV では見えて インタクト社 Unison UK-C18 3x75mmL いない不純物 SC/DT=25℃/50℃ アラントイン：1μg 注入 p-フェノールスルホン酸亜鉛：2μg 注入 UV p-フェノールス ルホン酸亜鉛 S/N 比により、アラントインのピークを p-フェ ノールスルホン酸亜鉛は、230nm での吸光係 数が大きく、UV 検出器で高感度に検出するこ アラントイン とが出来ます。それとは対照的に、アラントイ ンで比較すると、ELSD と UV ではさほど感度 に違いはありません。UV 検出器は吸光係数に 依存しますが、ELSD では物質によらず注入絶 対量と ELSD 条件に依存したピークの大きさ が得られます。 （検出波長：254nm ウラシル、グリチルリチン酸：UV が ELSD よりも感度が良い場合） 分離条件： ELSD ELSD 移動相 水/メタノール/蟻酸=30/70/0.1 流速：0.3mL/min、T=40℃ インタクト社 Unison UK-C18 3x75mmL SC/DT=25℃/50℃, 各 1μg 注入 UV UV UV 検出器でよく用いられるサンプルは、この 250～280nm あたりに吸収があるものが多く、 この波長範囲での感度比較で、UV が数 ng に 対して、ELSD が数十 ng といわれています。 左クロマトからもそのことが見て取れます。 www.technosaurus.co.jp □東 京 □大 阪 □福 岡 〒162-0805 〒532-0005 〒812-0054 TEL:03- 3235-0661/FAX:03-3235- 0669 TEL:06-6396- 0501/ FAX:06-6395-2588 東 京 都 新 宿 区 矢 来 113 番 地 大阪市淀川区三国本町 2 丁目 12 番 4 号 福 岡 市 東 区 馬 出 1 丁 目 2 番 23 号 TEL:092-631-1012 / FAX:092-641-1285 HPLC Tech-Info（20） ELSD と UV-Vis：絶対量と検出波長（272～300nm） （検出波長：272nm：ニコチン酸、テオフィリン、カフェイン：UV が ELSD よりも感度が良い場合） 分離条件： ELSD ELSD 移動相 水/メタノール/蟻酸=30/70/0.1 流速：0.3mL/min、T=40℃ インタクト社 Unison UK-C18 3x75mmL SC/DT=28℃/55℃、各 1μg 注入 吸収極大がより長波長側へシフトした場合、一 UV UV 般的にはより吸光係数が大きくなる傾向があ りますので、UV 検出器の感度がより上昇しま す。それに対し、ELSD は物質によらず注入絶 対量と ELSD 条件に依存したピークの大きさ となります。 当システムについてのお問い合せは、エムエス機器株式会社にお願い致します。 （ 検 出 波 長 ： 300nm ： イ ン ド メ タ シ ン ： UV が ELSD よ り も 感 度 が 良 い 場 合 ） 分離条件： ELSD 移動相 水/メタノール/蟻酸=50/50/0.1 流速：0.3mL/min、T=40℃ インタクト社 Cadenza CD-C18 2x75mmL SC/DT=25℃/60℃、各 1μg 注入 300nm 位から可視光領域となります。このあ たりからより長波長の吸収を持つものは、その UV 水溶液に色が付き出します。インドメタシンの 場合、その水溶液は若干ですが薄い黄色です。 もちろん UV-Vis 検出器で非常に感度よく検出 できますが、ELSD でも検出できています。 www.technosaurus.co.jp □東 京 □大 阪 □福 岡 〒162-0805 〒532-0005 〒812-0054 TEL:03- 3235-0661/FAX:03-3235- 0669 TEL:06-6396- 0501/ FAX:06-6395-2588 東 京 都 新 宿 区 矢 来 113 番 地 大阪市淀川区三国本町 2 丁目 12 番 4 号 福 岡 市 東 区 馬 出 1 丁 目 2 番 23 号 TEL:092-631-1012 / FAX:092-641-1285
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