研究用 http://www.biodynamics.co.jp/ 省ステップを実現した miRNA のクローニングキット DynaExpress miRNA Cloning Kit, High Efficient miRNA などの small RNA（18∼28 mer）を包括的にクローニング するキットです。キットに含まれる試薬は Ready-to-use で，ラジオア イソトープを用いずにクローニングを行えます。新規 miRNA の探索や 配列決定に有用です。 操作法概略 miRNA 1. 3' リンカーのライゲーション 5'P OH 3' ◆ miRNA の脱リン酸化，再リン酸化のステップが不要となり，より効 率的なクローニングが可能です。 ◆ クローニング過程での small RNA のライゲーション産物は，着色済 みのサイズマーカー（Colored guide size marker）により可視光条 件下で確実に除去でき，クローニングで問題となる副生成物を除くこ とができます。ゲルの染色は不要です。 イチ押し！ 5'App MI-A3' Linker (3' linker) L ゲルからの抽出 2. 5' リンカーのライゲーション 5'P L MI-R5' Linker (5' linker) ◆ 詳細な step-by-step のプロトコルが添付されています。 OH 3' 5'HO L 5'HO キット内容 ● MI-A3' linker ● MI-R5' linker ● Ligase 3' ● Ligase 3' buffer ● Ligase 5' ● Ligase 5' buffer ● RNA loading buffer PA ● Control RNA（21 mer） ● Colored guide size marker ● PEG solution ● Reverse transcriptase ● RT buffer ● Taq DNA polymerase ● 10 mM dNTPs mixture ● Amplification buffer ● Nuclease-free water ● 3' RT primer ● 5' primer ● Glycogen ● RNA extraction buffer ゲルからの抽出 3. 逆転写反応 L 5'HO 3' RT Primer 4. PCR 5' Primer 3' RT Primer 5. T ベクターへの クローニング T ● Sodium acetate solution miRNA（microRNA）は長さ 20 から 25 塩基ほどの一本鎖 RNA で，タンパク質に翻訳されないノンコーディング RNA の一 種です。他の遺伝子の翻訳阻害や，mRNA 分解を引き起こす機能 があると考えられています。 現在までに 1,000 種類近くのヒト miRNA が発見されています が，ヒト miRNA はおよそ 3,000 種類あると予測され，未発見の T T ベクター ※本キットに T ベクターは含まれていません。DynaExpress TA Cloning Kit（♯DS125：『BioDynamics Laboratory 社製品カタログ2010』 ） p.5 参照）のご使用をお勧めします。 新規 miRNA 探索の重要性 A A 1. miRNA を直接 MI-A3' linker とライゲーションさせ，ガイドサイズ マーカーを指標にポリアクリルアミドゲルで電気泳動する。miRNA の脱リン酸化は不要。 2. MI-A3' linker 結合 miRNA をゲルから抽出し，MI-R5' linker とラ イゲーションする。miRNA の再リン酸化は不要。 3. MI-R5' および MI-A3' linker と結合した miRNA をゲルから抽出後 に逆転写する。 4. PCR を行うことにより，T ベクターにクローニング可能な cDNA が得られる。 5. T ベクターにクローニングする。 ものが多数あります。また他の生物種についても同様に，未発見の miRNA が多数あると予測されています。 腫瘍，アポトーシス，各種疾患の組織・細胞において特異的に発 現している新規 miRNA を探索することにより，これらのメカニ ズムを解明する新たなアプローチになることが期待されます。 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） miRNA Cloning Kit, High Efficient, DynaExpress BDL DS330 5 units / 58,000 5 クローニング分。全 RNA からの small RNA 抽出試薬 2 回分を含む。 総代理店 着色済みの small RNA サイズマーカー DynaMarker Prestain Marker for Small RNA ® 着色済みの核酸で構成された，新しいタイプの低分子量一本鎖 RNA サ イズマーカーです。変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動のモニタリング や，ノーザンブロッティングに最適です。 DynaMarker® Prestain Marker for Small RNA イチ押し！ base 50 40 30 (#DM250) ◆ 低分子有機色素とは違い，独自の色素結合方法により核酸鎖へ直接色 素を導入しているため，使用ゲル濃度が変わっても正確な分子量を示 します。 転写後 20 ◆ 電気泳動中にも分離状況を確認できるため，最適な時間で泳動を停止 できます。 ◆ ナイロンメンブレンへの転写も可能で，RNA が転写されているかど うかを確認することができます。 ゲル ゲル組成： 12.5％ ポリアクリルアミド， 7.5 M 尿素／ 1 × TBE ◆ 加熱変性操作せずに，そのままアプライできます。 DynaMarker® Prestain Marker for Small RNA Plus ◆ 未着色 RNA で構成される DynaMarker® Small RNA Ⅱ （ #DM192 ：下記参照）と高い一致率を示します。 base 100 75 (#DM253) 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） DynaMaker, Prestain Marker for Small RNA BDL DM250 メンブレン 75，100 base のバンドが追加され， miRNA 前駆体までカバーしています。 50 40 30 転写後 20 150 μl / 20,000 約30回分。 DynaMaker, Prestain Marker for Small RNA Plus BDL DM253 150 μl / 25,000 約30回分。 ゲル組成： 10％ ポリアクリルミド， 7.5 M 尿素／ 1 × TBE ゲル メンブレン small RNA サイズマーカー DynaMarker Small RNA Ⅱ ® miRNA や siRNA 等をはじめとする small RNA の分析に最適な一本 鎖 RNA サイズマーカーです。変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動に適 しており，各バンドはシャープで視認性に優れています。 売れ筋 ■ DynaMarker® Small RNA Ⅱ ◆ 5 種類の一本鎖 RNA （20，30，40，50，100 base）で構成 されています。 ■ DynaMarker® Small RNA Ⅱ Easy Load 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） DynaMaker, Small RNA Ⅱ BDL DM192 −80℃ 30 μl / 25,000 容量 ： 30 μl（約 30 回分） DynaMaker, Small RNA Ⅱ Easy Load BDL DM197 −80℃ 1 kit / 25,000 ◆ DynaMarker® Small RNAⅡ（#DM192）と 同じサイズの RNA 断片から成る Ready - to use タイプの RNA マーカーです。熱変性処理 後，すぐにアプライできます。 base 100 50 40 30 ◆ 変性ポリアクリルアミドゲル用のローディングバッ ファーが添付されています。 DynaMarker® Small RNA Ⅱ（1μl） ゲル組成：12.5％ アクリルアミド， 7.5 M 尿素／ 1 × TBE Loading buffer 添付。 容量 ： 125 μl（約 25 回分） 20 全 RNA から small RNA を精製 miRNA Fractionation Kit 変性アクリルアミドゲルで全 RNA から分画した miRNA を抽出でき るキットです。キットに含まれるカラーマーカーにより，染色せずに miRNA を切り出すことが可能です。 品 名 メーカー キット内容 ● RNA extraction buffer ● RNA loading buffer PA ● Colored guide size marker ● Glycogen ● Sodium acetate solution 商品コード 包装 / 価格（￥） miRNA Fractionation Kit ( 10 reactions ) BDL DS315 10 units / 25,000 ※本紙に記載されている価格は，2010 年 3 月 1 日現在です。 ※本紙に掲載されている製品はすべて研究用です。臨床用途には使用できません。 ※記載されている会社名および商品名は BioDynamics Laboratory 社の商標または登録商標です。 ※ご注文の際には，［ 品名，メーカー，商品コード，包装，数量 ］をお知らせ下さい。 ※−80℃ 印は，−80℃ での保存を要する製品です。ドライアイス包装で配送していますが，製品到着後，直ちに −80℃ のフリーザー等に保存して下さい。 ※表示価格に，消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので，あらかじめご 了承下さい。 販売店 総代理店 〒113-0033 東京都文京区本郷 2 丁目 9 番 7 号 http : //www.funakoshi.co.jp/ e-mail : info＠funakoshi.co.jp 紙へリサイクル可 不要となった際 は、古紙回収・ リサイクルに出 してください ISO 14001 試薬に関して：Tel.03-5684-1620 Fax 03-5684-1775 e-mail : reagent＠funakoshi.co.jp 機器に関して：Tel.03-5684-1619 Fax 03-5684-5643 e-mail : kiki＠funakoshi.co.jp Z7-T03T-02 ( 2010.03 )
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