22 フナコシ試薬ニュース 2006年9月1日号 ● http://www.funakoshi.co.jp/ New アポトーシス原理 JC - 1 は正常細胞では細胞質にモノマー（緑）として，およびミトコ Caspase - 3 / 7 活性のハイスループット解析ンドリア内に凝集（赤）して存在する。一方，アポトーシス／ネクローシス細胞では細胞質のみにモノマー（緑）として存在する。 10 FL2 - H 2 10 1 10 0 0 ら解離することで生じる蛍光強度の変化により Caspase - 3 / 7 活性を測定します。 ◆ 試料：接着細胞，浮遊細胞 ◆ 測定波長：励起 488 nm ／蛍光 515 ∼ 530 nm 5000 4000 3500 3000 10 2 10 FL1 - H 3 10 0 4 10 6.1％ 10 0.0％ 10 1 2 3 10 FL1 - H 10 4 10 42.0％ Jurkat 細胞を DMSO（左）または staurosporine（右）で 3 時間処理し，本製品で 15 分間ラベリングした。洗浄後，フローサイトメトリーで解析した（縦軸：赤，横軸：緑）。アポトーシス細胞ではミトコンドリア膜電位消失により，赤の蛍光が減少した。キット内容 U937 細胞を staurosporine （ 1μM ）で 5 時間刺激し，本製品を用いてCaspase - 3 / 7 活性を測定した。 4500 RFU 1 10 0.2％消光状態の標識ペプチドが酵素により切断され，クエンチャーか ◆ 10 10 特長 57.9％ 3 10 3 10 FL2 - H 2 10 1 10 0 細胞に直接試薬を加えるワンステップの操作で Caspase 3 / 7 活性を同時にハイスループット解析できます。酵素活性を損なわない画期的な細胞溶解液を用いることにより，洗浄操作が不要です。 0.0％ 4 93.2％ 4 0.5％ 10 Apo 3 / 7 HTS ● JC - 1 reagent ● Assay buffer 品名 2500 メーカー商品コード 2000 包装 / 価格（￥） Mitochondrial Membrane Potential Detection Kit, JC - 1（ 100 tests ） CTI JC100 1 kit / 045,000 1500 1000 500 0 Positive Negative キット内容細胞情報伝達 ● Caspase 3 / 7 reagent（（ z - DEVD ）2 - Rhodamine 110 ） ● Cell lysis buffer 核内受容体エストロゲンレセプターのリガンド検索に！品名メーカー商品コード EnBio Estrogen Receptor / Coactivator Ligand Assay System 包装 / 価格（￥） Caspase - 3 / - 7 Detection Kit, High Throughput Screen 〈 Apo 3 / 7 HTS 〉 CTI APO200-2 100 tests 1 kit / 049,000 CTI APO200-3 500 tests 1 kit / 139,000 CTI APO200-4 1,000 tests 1 kit / 259,000 New お問い合わせ先 JC - 1 Mitochondrial Membrane Potential Detection Kit ：蛍光色素 JC - 1＊を用いて，細胞内のミトコンドリア膜電位消失によりアポトーシスを簡単かつ迅速に検出するキットです。試薬＊5, 5', 6, 6' - tetrachloro - 1, 1', 3, 3' tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide ＴＦＥＡＬＸ００３３特長５５６６８８４４ ◆ 培養培地で希釈した試薬と細胞を 15 分間インキュベートするだけ特長 ◆ 操作は約 3 時間で終了します。 ◆ ELISA と同様の操作方法や必要器材で測定できます。 ◆ アポトーシスを検出できます。 ◆ 測定波長：励起 550 nm ／蛍光 600 nm（赤）励起 485 nm ／蛍光 535 nm（緑） 96 ウェルプレートはストリップタイプなので，分割して使用できます。で，フローサイトメトリー／蛍光プレートリーダー／蛍光顕微鏡で１１６７２７０５コアクチベーター（ SRC1 ）を固相化した 96 ウェルプレートにより，エストロゲンレセプターのリガンドをアゴニストとアンタゴニストに区別してスクリーニングできます。エストロゲンなどのホルモン様化学物質が生体内で作用するためには，レセプターとの結合だけでなくコアクチベーターの関与が必要です。本製品はエストロゲンとレセプターの複合体に SRC1 が結合することを利用し，エストロゲン α または β のリガンドを定量的に測定できます。アポトーシス ◆ 測定に必要な試薬類はすべてキットに含まれています。 http://www.funakoshi.co.jp/ ● フナコシ試薬ニュース 2006年9月1日号ユビキチン化操作法概略 1. ビオチン標識コアクチベーターをプレートに固相化する。タンパク質のユビキチン化キット 2. プレート内で試料とヒト組換え体エストロゲンレセプターをインキュベートする。 Ubiquitinylation ( Ubiquitin Conjugation ) Kit 3. 洗浄後，HRP 標識抗レセプター抗体を加えインキュベートする。 4. TMB 基質を加え，吸光度（ 450 nm ）を測定する。 1. 23 ビオチン標識コアクチベーターアビジンエストロゲンレセプター in vitro でタンパク質のユビキチン化を行うキットです。タンパク質とユビキチンの結合（ユビキチン化）およびその後のプロテアソームを介したタンパク質の分解は細胞周期，分化，免疫反応，DNA 修復，染色体構造およびアポトーシス等の生体機能の調節を担っています。リガンド 2. レセプター - リガンド複合体の形成特長 HRP 標識抗レセプター抗体 TMB 基質 3. 4. ◆ タンパク質のユビキチン化をウエスタンブロッティングで検出できます。 ◆ タンパク質のユビキチン化処理やユビキチン化関連因子の研究に最適です。・特定の E3 ligase による目的タンパク質のユビキチン化解析に。・新規 E2 酵素へのユビキチンチオエステル結合に。検出複合体のコアクチベーターへの結合・目的タンパク質のユビキチン化における新規 E3 ligase 検索に。リガンドがアゴニストである場合，レセプターの立体構造の変化を引き起こし，複合体は固相化したコアクチベーターと結合する。アンタゴニストでは立体構造の変化が異なるために，複合体はコアクチベーターと結合しない。試料がアンタゴニストである場合，既知濃度の 17β- エストラジオールを試料と混合し，吸光度の減少によって測定できる。・新規 E3 ligase 候補の活性／特異性解析に。 ◆ 識ユビキチンなどが含まれています。 ◆ 50 μl の反応系で 50 回反応させるのに十分な量の試薬が含まれています。 3.5 ◆ 3.0 2.5 OD450 ユビキチン - E2 を形成するカスケードに関わる酵素類，ビオチン標ストレプトアビジン検出系＊によってユビキチン化を高感度に検出できます。 2.0 ＊VECTOR LABORATORIES 社 VECTASTAIN Elite ABC Kit 1.5 （ #PK-6100 ）のご使用をお勧めします。 1.0 ＋− ＋− ＋− ＋− ＋− ＋− ＋− ＋− ＋− ＋− ＋− kDa 0.5 0.0 58.1 ＞ 39.8 ＞（ 0.5 ） 1 × 10−2 1 1 × 102 1 × 104 1 × 106 1 × 108 29.0 ＞ Chemical Concentration（ nM ） 17β- estradiol Bisphenol A Tamoxifen ＋ 17β- estradiol（ 1 nM ） Diethylstilbestrol 20.1 ＞ M 4 - Nonylphenol Genistein 数種の化学物質に対するエストロゲンレセプターαの反応性キット内容 A B C D E F G H I J K キットに付属の各 E2 とユビキチンの複合体をウエスタンブロッティングにより検出した。ATP を添加した反応系では，各 E2 のユビキチンチオエステル結合物が形成された。 M：分子量マーカー，A：UbcH1，B：UbcH2，C：UbcH3，D：UbcH5a， E：UbcH5b，F：UbcH5c，G：UbcH6，H：UbcH7，I：UbcH8，J：UbcH10， K：UbcH13 / Mms2，それぞれ＋：ATP 添加反応系，−：ATP 未添加反応系。キット内容 Avidin coated microtiter plate（ 8 × 12 strips ） ● Biotinylated coactivator peptide（ SRC1 ) ● Ubiquitin activating enzyme（ E1 ） ● Recombinant estrogen receptor ● Ubiquitin conjugating enzyme（ E2 ） ● Anti - ER / HRP antibody ● Wash buffer ● TMB substrate ● Stop solution ● Biotinylated ubiquitin ● Non - reducing gel loading buffer ● DMSO ● Ubiquitinylation buffer ● Mg - ATP ● E2 standard ● ● 試薬 UbcH1，2，3，5a，5b，5c，6，7， 8，10，13 / Mms2 Assay buffer Plate sealer ： ● お問い合わせ先ＴＦＥＡＬＸ００３３ - 品名品名メーカー商品コードメーカー商品コード包装 / 価格（￥） Ubiquitinylation Kit〈 Ubiquitin Conjugation Kit 〉 MOL UW9920 −80℃ ■ 1 kit / 105,000 関連製品 VECTASTAIN Elite ABC Standard Kit VEC PK-6100 毒 1 kit / 33,000 ５５６６８８４４ - Estrogen Receptor α / Coactivator, Ligand Assay System, EnBio EBT ERA-SRC 1 kit / 098,000 Estrogen Receptor β / Coactivator, Ligand Assay System, EnBio EBT ERB-SRC 1 kit / 098,000 包装 / 価格（￥）１１６７２７０５