HS! ０ １ 実験的上室頻拍性不整脈の犬に対するアップ ストリーム治療としてのアンジオテンシン変 換酵素阻害剤の有効性 HS! ０ ２ 僧帽弁閉鎖不全症の犬におけるパルス組織ド プラ左室 Tei index を用いた左室機能評価 ○福 島 隆 治１，２、小 山 秀 一１、青 木 麻 莉 子１、 土肥あずさ１、持田比佐子１、松本浩毅１、内 野富弥２、廣瀬昶１（１日本獣医生命科学大学・ ・動物エムイーリサー 獣医内科学教室、２（株） チセンター） ○手島健次１、浅野和之１、上地正実２、鯉江 洋２、菅野信之１、関真美子１、久楽賢治１、枝 村一弥１、長谷川篤彦３、田中茂男１（１日本大 学・獣医外科学研究室、２日本大学・獣医内 科学研究室、３日本大学・臨床病理学研究室） 【背景】上室頻拍性不整脈の発生とその持続に関与する基質の形成 因子として、RAA 系の関与が注目されている。また、不整脈の発 生とその持続に関与する基質を制御することで治療する、アップス トリーム治療が注目されつつある。【目的】上室頻拍性不整脈モデ ルである高頻度心房刺激犬に対して、RAA 系のうちアンジオテン シンⅡ生成を制御する ACEI を投与し、心室の収縮機能、心房の 電気的リモデリング、心室の構造的リモデリングに関して無投薬群 と比較する。それにより、上室頻拍性不整脈のアップストリーム治 療薬として ACEI の有効性を評価する。 【材料と方法】１ ２頭の高頻 度心房刺激犬（３ ９ ０bpm）を無作為に、無投薬群７頭とベナゼプリ ル群（塩酸ベナゼプリル０． ５mg／kg、SID）５頭に分けた。術後７ 日間の回復期間後より、高頻度心房刺激を、または刺激と共に投薬 を２ １日間継続した。そして、刺激開始前と刺激開始７、１ ４、２ １日目 に高頻度心房刺激を一時的に停止し検査を行った。QOL の指標と して食欲、心電図から心拍数、心エコーから心室収縮機能の指標で ある FS、PEP／ET などを測定した。心房の電気的リモデリング指 標として、バースト刺激後に上室頻拍性不整脈誘発の有無を確認し た。２ １日目に全頭の心室の内腔、中隔そして自由壁の観察を行った。 【結果】ベナゼプリルの投与は、無投薬群で認められた心室収縮機 能の低下、心房電気的リモデリング生成、心室構造的リモデリング 生成の３者を軽減し、さらに、QOL の低下を軽減する作用を示し たが、HR を低下させなかった。【結論】ACEI は、犬の上室頻拍性 不整脈に対するアップストリーム治療薬として適用できると判断し た。 【背景】我々は以前にパルスドプラ心エコー法を用いた左室 Tei index （PD Tei index）が、犬の僧帽弁閉鎖不全症（MR）の重症度評価 に有用であることを報告した。しかし、PD Tei index は２つの波 形から算出する必要があり、１心拍の間に測定することができない。 一方、パルス組織ドプラ法を用いた左室 Tei index（TD Tei index） は１心拍の間に測定が可能である。本研究の目的は、犬の TD Tei index が心機能を反映するか否かを検討すること、および TD Tei index と PD Tei index を比較すること、さらには MR 犬における TD Tei index の有用性を検討することである。 【材料と方法】実験１：全身麻酔下の健常犬６頭を用いて左室 peak +dP／dt および!dP／dt を記録し、同時に TD および PD Tei index を測定した。実験２：非心疾患犬７ ３頭、MR 犬（無症候性２ ３頭、症 候性１ ０頭）を対象に TD および PD Tei index を無麻酔下にて測定 した。 ０． ６ ９） 、 【結果】実験１：TD Tei index と左室 peak+dP／dt（r＝! ６ ０） 、および PD Tei index（r＝０． ７ １）との間に有 !dP／dt（r＝０． 意な相関を認めた。実験２：TD Tei index は非心疾患犬において のみ PD Tei index と相関が認められた（r＝０． ５ ４） 。TD Tei index は MR 犬で高値を示したものの、無症候性と症候性 MR との間に 有意差は認められなかった。 【考察】実験１より TD Tei index は犬の収縮機能および拡張機能 を反映していた。実験２では MR 犬の重症度評価には PD Tei index の方が優れた指標であると考えられたが、今後 TD Tei index の有 用性に関してさらなる検討が必要である。 HS! ０ ３ HS! ０ ４ 僧帽弁逆流犬におけるアドレノメデュリン投 与の循環動態に及ぼす影響 ○菅野信之１、浅野和之１、手島健次１、久楽 賢 治１、関 真 美 子１、枝 村 一 弥１、田 中 茂 男１ （１日本大学・獣医外科学研究室） 【背景】アドレノメデュリン（AM） はヒトの褐色細胞腫より分離・ 同定された血管作動性ホルモンであり、血管拡張作用や利尿作用な どの生理活性を有し、心機能を改善する効果を持ち合わせているた め、循環器医学領域では心不全治療薬としての可能性が検討されて いる。一方、獣医学領域においては AM 投与の効果に関する報告 はない。【目的】本研究は僧帽弁逆流（MR） 犬に AM を投与し、循 環動態変化を評価することを目的とした。【材料および方法】実験 には実験的に作出した MR モデル犬４頭を用いた。AM は橈側皮 ０分 間 投 与 し た 後、０． ０ ５ ０µg／kg／min 静脈より０． ０ ２ ５µg／kg／min で３ で同様に３ ０分間投与し、投与開始から投与後６ ０分間まで心拍数 （HR） 、 平 均 動 脈 血 圧（MAP） 、平 均 肺 動 脈 圧（MPAP） 、肺 動 脈 楔 入 圧 （PCWP） 、中心静脈圧（CVP） 、全身血管抵抗 （SVR） 、心拍出量 （CO） を１ ５分ごとに測定した。最初に、生理食塩水を投与した実験 （コン トロール群） を行い、２週間後に AM を投与した実験（AM 投与群） を行った。【結果】AM 投与群において、AM０． ０ ２ ５µg／kg／min 投与 開始１ ５分後から血行動態は変化し始め、０． ０ ５ ０µg／kg／min ではさら に有意な変化が認められた。特に、コントロール群と比較して PCWP、 SVR および MPAP は有意に低下し、CO は有意に増加した。一方、 HR および MAP は投与中に変化は認められなかった。【考察】犬 の MR において、AM 投与は後負荷を低減するとともに、MAP を 有意に低下することなく、CO を増加することが示された。したがっ て、AM は犬の MR の急性増悪例に対して有用な治療薬になりう る可能性が示唆された。 犬の僧帽弁閉鎖不全症（Mitral Regurgitation；MR）に 対 す る 僧 帽 弁 形 成 術（Mitral valve plasty；MVP）の検討∼至適腱索長の 推定∼ ○青木卓磨１、藤井洋子１、伊藤雄介１、梅原 庸平１、若尾義人１（１麻布大学・外科学第一 研究室） 【背景および目的】イヌの MR に対する MVP の詳細な検討は少な く、特に至適腱索長の決定に関しては術中の目測によるのみで、逆 流防止は主に弁輪縫縮術に頼るのが現状である。そこで我々は、至 適腱索長を知ることの重要性を考え、術前および術中に至適腱索長 を推定し、手術時間短縮も考慮しつつ、一定の条件下の MR 犬に 対して MVP を実施した。【材料と方法】Ⅰ．正常犬１ ７頭を用いて、 僧帽弁前尖の形態ならびに心エコーを用いた正常腱索長（前・後乳 頭筋からの僧帽弁前尖への腱索をそれぞれ AMS１， ２， ２’ 、AMS ３’ ，３， ４とした）の推定法を検討した。Ⅱ．正常犬４頭を用いて、 Ⅰ．の結果を元に術前に人工腱索を作成後、腱索再建術を実施し、 Ⅰ．の 方 法 が 応 用 可 能 か 否 か を 検 討 し た。Ⅲ．自 然 発 症 MR 犬 （ISACHC 分類、Ⅰ a−ｂ）４頭を用い、心エコーにより逆流部位 を検討し、次いでループテクニック変法で腱索再建術が可能か否か を検討した。【成績】①心エコーにより、正常 AMS１長の推定が 可能であった。②正常犬では、前乳頭筋側は推定値とその１ １ ０％の 長さ２本、後乳頭筋側は AMS４の実測値３本の人工腱索で逆流防 止が可能であった。③ MR 犬において、腱索の伸展部位は超音波 検査により推定可能であった。④ MR 犬において、AMS１， ４の腱 索の２ ０％短い人工腱索を、それぞれ AMS２，３に２−３本適用す ることによって、逆流防止が可能であった。【考察】AMS１のみが 心エコーにより推定可能であったが、罹患犬では AMS２， ３が MR の主たる原因であった。術中における推定では、AMS１， ４の実測 値から２ ０％減じたループを各々 AMS２， ３に適応することによっ て腱索が再建される可能性が示唆された。 HS! ０ ５ 犬の全肝阻血における血行動態の変化 ○関真美子１、浅野和之１、小泉裕美１、菅野 信之１、久楽賢治１、手島健次１、枝村一弥１、 田中茂男１（１日本大学・獣医外科学研究室） HS! ０ ６ 犬における腹腔鏡下手術時の気腹および体位 変換が循環および呼吸器系に及ぼす影響 ○朴永泰１、岡野昇三１、奈須俊介１、藤塚淳 史１、佐野忠士１、高瀬勝晤２（１北里大学・小 動物第３外科、２北里大学・小動物第１外科） 【背景】ヒトの肝切除では肝阻血手技が一般的に用いられており、 それによって術中出血量の軽減が図られている。一方、犬の肝切除 においても肝阻血手技は報告されているものの、阻血法の検討、阻 血中の血行動態や肝障害の程度の評価、合併症の発生に関する詳細 な報告は認められない。 【目的】犬の全肝阻血モデルにおいて、術 中の血行動態の変化について調査した。【材料および方法】正常犬 １ ２頭を以下の３群（n＝４） に分けた；対照（Sham ope） 群、腹腔動 脈遮断（CA） 群（腹腔動脈、前腸間膜動脈、肝動脈、門脈および肝臓 前後の後大静脈を遮断） 、大動脈遮断（Ao） 群（胸部大動脈、肝動脈、 門脈および肝臓前後の後大静脈を遮断） 。CA 群および Ao 群にお ける血行遮断は２ ０分間実施し、Sham ope 群では血管の遮断は実施 しなかった。頚動静脈、大腿動静脈、腸間膜静脈に各々カテーテル を挿入し、血流遮断前、遮断１ ０、２ ０分後、再灌流１ ５、３ ０分後に各血 圧を測定した。【結果】CA 群は Sham ope 群と比較して、遮断中 に頚動脈圧と大腿動脈圧の低下が認められた。特に、CA 群の遮断 中の頚動脈圧は Ao 群と比較しても有意に低下していた。また、大 腿静脈圧は CA 群、Ao 群とも Sham ope 群と比較して、遮断中に 上昇が認められた。門脈圧は CA 群において、遮断中に上昇が認め られた。【考察】CA 群では Ao 群と比較して、遮断中の動脈圧が 低下し、静脈圧と門脈圧が増加する傾向が認められた。したがって、 阻血手技としては大動脈を遮断する方が安定した血行動態を維持で きることが明らかになった。しかし、その機序については不明な点 もあり、今後さらなる検討が必要であると思われる。 【目的】腹腔鏡下手術の際、手術部位によりトレンデレンブルグ体 位（低頭位） 、あるいは逆トレンデレンブルグ体位（高頭位）をと ることが多い。しかし、犬における腹腔鏡下手術での気腹および体 位変換による循環ならびに呼吸器系へ与える影響については十分に 検討されていない。そこで、犬におけるトレンデレンブルグ体位、 および逆トレンデレンブルグ体位での気腹が、循環および呼吸器系 におよぼす影響について検討した。【方法】実験には臨床上健康な ビーグル犬６頭を用いた。アトロピン、ブトルファノール、プロポ フォールで麻酔導入後、イソフルラン（１． ３ＭＡＣ）にて維持した。 呼吸換気条件は、人工呼吸器を用いて実験中一定にした。供試犬に 対して、頚動静脈および大腿静脈にカテーテルを留置し、循環動態 および、血液ガスの測定に用いた。実験は、始めに水平位で CO２を 用いて腹腔内圧が１ ５mmHg になるように２ ０分間気腹した。各パラ メーターは、気腹前および気腹２ ０分後に測定した。測定終了後に脱 気し、体位変換した後に循環および呼吸器系を安定させた。その後、 引き続き水平位と同様に気腹および測定を実施した。体位は、水平 位、トレンデレンブルグ体位（１ ５度） 、逆トレンデレンブルグ体位 （１ ５度）の順に変換した。【結果と考察】全ての体位において気腹 後、大腿静脈圧、中心静脈圧、気道内圧、PaCO２の有意な上昇およ び、動脈血 pH の有意な低下が認められた。また、血圧も同様に全 ての体位において増加傾向を示した。さらに水平位、逆トレンデレ ンブルグ体位では気腹後、心拍出量の有意な増加が認められた。 HS! ０ ７ HS! ０ ８ Adenosine Deaminase Activity in Cats Infected with Feline Immunodeficiency Virus. ○Hankanga Careen 、小林沙織 、山田裕 一１、百田豊１、佐藤れえ子１、安田 準１（１岩 手大学・小動物内科） １ １ Adenosine deaminase （ADA）， an enzyme involved in purine metabolism， has been shown to be of clinical importance in several diseases in humans． To investigate whether ADA is of any clinical significance in cats， plasma ADA （P!ADA） and T cell ADA （T!ADA） activities were measured in feline immunodeficiency virus （FIV） negative and positive cats． Nylon wool fractionation was employed to separate T cells and the resulting suspension was measured for CD４ cell count and T!ADA activity． The AIDS!related complex （ARC） group showed a significant elevation in P! ADA activity compared to the asymptomatic carrier （AC）， and FIV!negative groups ． T!ADA activity was significantly elevated in the ARC group． A correlation was found between P!ADA and T!ADA activities in the FIV! negative group． T!ADA activity and CD４＋ cell number showed a strong negative correlation in FIV!positive cats CD ４＋ cell numbers were significantly reduced in the ARC group compared to the healthy controls. Our results showed that T!ADA activity is increased in FIV!positive cats during the ARC stage． These results also suggest that ADA may be an indicator of T cell activation in the ARC stage of FIV infection. 胸水または腹水を用いて猫伝染性腹膜炎の診 断を行った１ ２症例 ○輪田真 理１，２、谷 憲 一 郎２、相 馬 武 久３、田 島朋子１（１大阪府立大学・獣医微生物学教室、 ２ 谷動物病院・内科・外科、３マルピー・ライ フテック株式会社・臨床検査センター） 【はじめに】猫伝染性腹膜炎（FIP） の臨床診断は、貯留液の性状や 血液検査結果、および飼育状況などによっているが、確定診断は難 しい。そこで、胸水・腹水疾患を呈した猫１ ２症例で、貯留液塗抹標 本を用いた免疫蛍光染色による細胞内 FIP ウイルス（FIPV）抗原の 検出、貯留液上清ならびに貯留液細胞を用いた PCR を行い、確定 診断を行ったのでその概要と一部症例における経過を報告する。 【方法】大阪府（６例） 、埼玉県（２例） 、富山県（１例） 、静岡県（３ 例） の動物病院に来院した猫の腹水・胸水の細胞塗抹標本を作成し、 抗 FIPV マウス血清を用いて免疫蛍光染色を行った。細胞質内に蛍 光を認めたものを抗原陽性と判断した。また、貯留液上清および細 胞より抽出した RNA を用いて RT!PCR を行った。【結果】免疫染 色陽性は８例、貯留液上清 PCR が陽性は５例、貯留液細胞 PCR が 陽性は９例であった。免疫染色、貯留液上清の PCR、貯留液細胞 の PCR ともに結果が一致したのは７例で、そのうち陽性は５例で あった。免疫染色と貯留液細胞の PCR 結果が陽性となったのは２ 例であった。貯留液細胞の PCR のみ陽性となったものが２例、免 疫染色のみが陽性となったものは１例であった。当院に来院した症 例は４例で、いずれも貯留液細胞 PCR が陽性であり、FIP と確定 診断した。ステロイド、猫インターフェロン、塩酸オザグレル等に よる治療を試みたが、全例、診断から１ヶ月以内に死亡した。 【総 括】貯留液細胞を用いた RT!PCR が最も感度が高いと思われるが、 実際に病院でこの方法で確定診断を行うのは難しい。免疫染色は非 特異的蛍光が見られる場合もあり、モノクローナル抗体を用いるな ど特異性を高めるための検討が必要である。今後、さらに検討を重 ねて、実用的な方法を開発したい。 HS! ０ ９ １型糖尿病犬における血漿マンノースおよび ピルビン酸濃度の変動 HS! １ ０ ○森昭博１、武光浩史１、佐藤稲子２、田崎弘 之２、片 山 欣 哉２、左 向 敏 紀３、新 井 敏 郎１ （１日本獣医生命科学大学・獣医生化学教室、 ２ 日本獣医生命科学大学・生物構造情報学教 室、３日本獣医生命科学大学・保健看護学科 臨床部門教室） １型糖尿病犬の血液中免疫担当細胞数の変動 ○相良芙美１、森昭博１、新井敏郎１、植松洋 介１，２、山口智宏１，２（１日本獣医生命科学大学・ 獣医生理化学教室、２（有）ケーナインラボ・ 検査培養研究室） 近年、犬においても糖尿病の発症が増えている。犬ではインスリン 不足による１型糖尿病の発症が多いという特徴を示す。今回１型糖 尿病犬１ ７頭および正常犬１ ０頭を用いて、種々の血漿代謝産物量を測 定し、これらの変動が糖尿病診断マーカーとなるか検討した。血漿 代謝産物としてグルコース（Glu） 、マンノース、総コレステロール、 中性脂肪（TG） 、遊離脂肪酸（FFA） 、インスリン（IRI） 、ピルビン 酸、乳酸を測定した。正常犬では、食後血漿 Glu および IRI 濃度は 増加し、逆にマンノース、FFA 濃度は有意に低下した。マンノー スはグリコーゲン分解産物と考えられ、正常犬における食後のマン ノースの減少は、肝臓でのグリコーゲン合成が亢進したためと考え られた。糖尿病犬はインスリン注射による血糖コントロールを行なっ ていたため、血漿 TG、FFA、乳酸およびコレステロール濃度は正 常犬に比較的近い値であったが、糖尿病犬の血漿グルコース、マン ノース、ピルビン酸濃度および P／L（ピルビン酸／乳酸）比は有意 に増加していた。ピルビン酸濃度の上昇は糖尿病犬における TCA サイクルの活性低下により、ピルビン酸が他の代謝産物へ変化が阻 害されるためと考えられ、マンノース濃度の上昇は糖尿病犬におけ るインスリン作用の低下により、肝臓におけるグリコーゲン分解が 亢進したためと考えられた。血漿マンノースおよびピルビン酸濃度 は肝臓におけるグリコーゲン貯蔵状態および組織におけるエネルギー 代謝状況を反映し、糖尿病をはじめとする代謝性疾患において、体 全体のエネルギー代謝状況を評価するのに有用なマーカーとなるこ とが示唆された。本研究は「文部科学省学術フロンティア推進事業」 の助成を受けた。 近年犬においても糖尿病の発症が増えている。犬ではインスリン分 泌不足による１型糖尿病の発症が多い。ヒトでは１型糖尿病と免疫 機能の低下に強い相関があることが報告されている。今回１型糖尿 病犬１ ０頭および正常犬１ ３頭を用いて、血漿代謝産物量およびサイト カイン、免疫グロブリン（IgG） 、リンパ球数を測定し、これらの変 動が１型糖尿病犬における免疫機能の変動を評価するマーカーとな るか検討した。代謝産物としてグルコース、フルクトサミン、イン スリン、サイトカインとしてインターフェロン γ（IFN!γ）とイン ターロイキン６（IL! ６）の血漿中濃度を測定した。リンパ球は CD ３＋ （T 細胞） 、 CD４＋ （ヘルパー T 細胞） 、CD８＋ （細胞 障害性 T 細胞）数をフローサイトメーターを用いて測定した。糖 尿病犬はインスリン注射にもかかわらず血漿グルコースとフルクト サミン濃度は正常犬より有意に高かった。IFN!γ と IL! ６濃度に糖 尿病犬と正常犬の間に有意差はみられなかった。IgG 濃度は糖尿病 犬で有意に低下した。総白血球数と CD８＋ 細胞数は糖尿病犬と 正常犬の間に差はなかったが、CD３ ＋、 CD４＋、CD２ １＋細胞 数は糖尿病犬で減少し、そのため糖尿病犬の CD４／CD８比は正常 犬に比べ有意に低下した。IgG 濃度の低下は抗体産生を誘導する CD ４＋ および CD２ １＋ 細胞数の低下によるものと考えられる。IgG 濃度および CD４／CD８比は糖尿病犬における免疫機能を評価する 有用なマーカーとなることが示唆された。 本研究は「文部科学省 学術フロンティア推進事業」による私学助成を得て行われた。 HS! １ １ HS! １ ２ 糖尿病発症後の木酢液の効果 ○菅沼眞澄１、友田弥里２、浅田忠利３、七戸 和博１（１日本医科大学・実験動物管理室、 ２ 東京医科歯科大学・国際環境寄生虫病学、 ３ 日本獣医生命科学大学・獣医保健看護） ［目的］補完代替医療の一種として、糖尿病において血糖の降下作 用があるといわれている木酢液について、実験動物モデルを用いて その作用を検討した。 ［材料と方法］６週齢の ddY 系雄性マウスにアロキサン７ ０mg／kg を静注し、市販の齧歯類用固形飼料と水道水を自由摂取させた。２ 週間後随時血糖値が３ ５ ０mg／dl 以上に上昇したマウスを３群に分け、 飲料水として、水道水、木酢液（SF! ２；東海化成）１％あるいは ５％水溶液を自由摂取させた。５ヶ月間、体重、血糖値、摂餌・摂 水量を経時的に測定し、血液生化学的検査および病理組織学的観察 を行った。 ［結果］木酢液投与群の血糖値は５％では３ヶ月目から、１％では ５ヶ月後に、水道水投与群と比べて有意に低下した。飲水量は１ヶ 月目から木酢液投与群において有意に少なかった。病理組織学検査 からは、木酢液５％投与群では１ヶ月後から、１％群では３ヶ月後 から、水道水供与（コントロール）群よりインスリンの分泌が顕著 に増加したことが観察された。血液生化学的検査により、木酢液投 与群では、糖尿病によるアルブミンの低下と尿酸の増加が抑制され た。 ［考察］本実験系では、糖尿病発症後に木酢液を摂取することによ り、血糖値の低下やインスリン産生細胞の修復が観察された。また、 糖尿病進行によってコントロール群に観察された動きの鈍化や毛づ やの低下などの一般状態の悪化も木酢液摂取群では軽度であった。 これらの糖尿病症状の緩和は、５％木酢液の方が顕著であったが、 １％であっても長期間の継続摂取により徐々に症状が改善されるこ とが明らかとなった。また合併症としての腎機能低下を抑制する効 果も示唆された。 トリロスタンによる副腎皮質機能抑制が犬の 下垂体‐副腎軸に及ぼす影響について ○手嶋隆洋１、原康１、根津欣典１、余戸拓也１、 原田恭治１、長村義之２、寺本明３、多川政弘１ （１日本獣医生命科学大学・獣医外科学教室、 ２ 東海大学医学部・病理診断学教室、３日本医 科大学医学部・脳神経外科教室） 【背景】Cushing 病罹患犬の治療に使用されるトリロスタンに関し ては、臨床症状の改善に関する報告はあるものの、下垂体への影響 は健常犬においても詳細な調査がなされていないのが現状である。 今回、トリロスタンにより副腎皮質機能を抑制したモデル犬の下垂 体−副腎軸について調査した結果、若干の知見を得たので報告する。 【材料と方法】供試犬：健常ビーグル犬１ ８頭を無作為に対照群と TR 群に分けて使用した。プロトコール：TR 群に対してトリロスタン ５mg／kg を１日２回８週間、経口投与した。投与期間中は CRH、 および ACTH 刺激試験を実施し、頭部 MR 画像より下垂体脳比 （PBR）を算出した。投与期間終了後は安楽死を行い下垂体および 副 腎 組 織 を 採 取 し た。下 垂 体 に つ い て は 免 疫 組 織 化 学 に よ る Corticotroph の評価、POMC、Corticoid Receptor（−R） 、CRH-R、 １ １βHSD mRNA 定量を行った。副腎については副腎皮質の組織学 的評価、および ACTH-R mRNA 定量を行った。【結果】投与期間 中、TR 群において cortisol 濃度の減少、ならびに ACTH 濃度の上 昇がみられた。下垂体に関しては経時的な PBR の増加、および Corticotroph の細胞質面積の増加が認められ、副腎皮質には過形成 がみられた。mRNA 発現量に関しては、TR 群に POMC、ACTHR の増加、ならびに１ １βHSD１の減少が認められた。【考察】トリ ロスタンによる副腎皮質機能抑制の結果、Corticotroph の機能亢進 に起因した下垂体の腫大が認められたことから、Cushing 病罹患犬 に対する使用は下垂体腺腫の成長を助長する危険性があることが示 唆された。 HS! １ ３ 正常犬の血中遊離サイロキシン濃度および血 中 TSH 濃度の生理的変動の評価 HS! １ ４ 正常ネコの血漿インスリン濃度 ELISA 測定 系に対する抗インスリン自己抗体の干渉 ○佐々木東１、山崎真大１、大田寛１、前出吉 光１（１北海道大学・獣医内科学教室） ○西飯直仁１、高須正規２、Okkar Soe１、保 田恭志１、小島正章３、蜂巣達之３、岩澤淳２、 前田貞俊２、大場恵典２、北川均２（１岐阜大学・ 連合獣医学研究科、２岐阜大学・応用生物科 学部、３株式会社・シバヤギ） 【背景と目的】血中遊離サイロキシン濃度（FT４）には個体によ る独自の変動があると報告されており、それを元に基準値が定めら れているが、FT４のみで原発性甲状腺機能低下症と Euthyroid Sick Syndrome を 鑑 別 す る こ と は 困 難 で あ る。近 年、血 中 TSH 濃 度 （TSH）をこれらの症例の診断に応用することが考えられている が、犬の TSH の生理的変動には不明な点が多い。そこで、正常犬 の FT４と TSH の１日の変動を観察した。【方法】健康なビーグル 犬４頭および雑種犬５頭を用い、２時間間隔で２ ４時間にわたり採血 を行い、FT４および TSH を測定した。さらに別の日に、運動前 後の FT４の変化を観察した。FT４および TSH の測定には市販キッ トを用いた。【結果】FT４の変動と値は個体差が大きく、一般的な 基準値を下回る犬も存在した。一定の日内変動は認められず、年齢・ 性別による差も認められなかった。７頭の犬で１日の最大値は最小 値の２倍程度であり、さらに６頭の犬では運動・食事の後に FT４ の上昇が見られた。TSH はほぼ一定の低値を示したが、２頭の犬 で短期的な高値が観察されたことから TSH サージの存在の可能性 が示唆された。また、TSH が極めて高値を維持する犬も１頭存在 した。【考察】FT４はこれまでの報告と同様に不規則に大きく変動 するため、１点のみの測定で甲状腺機能を評価することは危険であ ると考えられた。運動や食事によって変動する犬もおり、測定のタ イミングにも注意が必要であることが示唆された。TSH はほぼ一 定の値を示すが、偶然 TSH サージと思われるものを捕らえしまう 可能性があり、TSH も１点のみの測定で評価することは危険であ ると考えられた。 【背景】我々はネコの血漿インスリン濃度 ELISA 測定系の確立の 過程において血漿中の測定阻害物質の存在を明らかにした。本研究 はネコの血漿インスリン濃度測定における測定阻害物質の同定を目 的とした。 【材料と方法】過去にインスリン投与歴のない正常ネコの血漿を用 いた。ウシインスリンを用いたアフィニティークロマトグラフィー によりインスリン結合物質を精製し、SDS!PAGE を行った。また ELISA によりインスリン結合物質中の IgG を検出した。１２５I 標識ウ シインスリンおよび抗ネコ IgG 抗体を用いた RIA を行い、スキャ チャードプロットにより抗インスリン抗体の解離定数と最大結合容 量を算出した。またインスリン蛋白を構成する合成ペプチドと抗ネ コ IgG 抗体を用いた ELISA により抗インスリン自己抗体のエピトー プマッピングを行った。 【結果】正常ネコ血漿中のインスリン結合物質の SDS!PAGE によ り５ ０kDa および２ ５kDa にバンドが得られ、ELISA により IgG であ ることが確認された。抗インスリン抗体の解離定数は９． ３ ４×１ ０!８∼ ０∼３ ０ ９nM であった。ELISA による ３． ８ ８×１ ０!７M、最大結合容量は９ エピトープマッピングでは、インスリン A 鎖の N 末端および B 鎖 の C 末端への結合が多くみられた。 【考察】正常ネコの血漿インスリン濃度の測定阻害物質として血漿 中に低親和性で高濃度の抗インスリン自己抗体が存在することが明 らかとなった。正常ネコにおける抗インスリン自己抗体の生理学的 な意義は不明である。 HS! １ ５ HS! １ ６ 犬のイソフルランの MAC-BAR に対するフェ ンタニル静脈内持続投与の効果 ○鎌田正利 、長濱正太郎 、村上勲 、金澤 秀子４、佐々木伸雄３、西村亮平１（１東京大学・ 獣医高度医療科学教室、２東京大学・動物医 療センター、３東京大学・獣医外科学教室、 ４ 共立薬科大学・創薬物理化学講座） １ ２ ４ 【背景と目的】演者らは第１ ４ ２回本学会で、犬のイソフルランの MAC に対してフェンタニルがおよぼす効果について発表した。今回、よ り臨床的意義が高いと考えられる MAC!BAR におよぼす効果を血 中濃度も含めて検討した。【方法】実験には、健康なビーグル犬６ 頭を繰り返し用いた。まず、イソフルランの MAC!BAR を測定し て対照値とした。次に、フェンタニルを負荷量に加え５、１ ０、２ ０、 ４ ０µg／kg／hr のいずれかで静脈内持続投与して、再度 MAC!BAR の測定を行った。実験中は心拍数と血圧を記録し、持続投与中の血 中フェンタニル濃度も測定した。【結果】対照値およびフェンタニ （mean±SD） は、 ル５、１ ０、２ ０、４ ０µg／kg／hr 投 与 時 の MAC!BAR ２． ４ ６±０． ２ ０、１． ４ ５±０． １ ４、１． １ ３±０． １ ３、０． ９ ３±０． １ ６、０． ７ ７±０． １ １％ であった。また、このときの平均血中フェンタニル濃度は１． ６ ９±０． １ １、 ３． ２ ８±０． ４ ９、７． ０ ９±１． ４ ０および１ ３． ５ ３±２． ５ ３ng／ml であ っ た。フ ェ ンタニルの血中濃度依存性に MAC!BAR は減少し、フェンタニル の血中濃度４ng／ml 程度までは、MAC!BAR は大きく減少したが、 以降は緩やかに減少した。また、フェンタニル投与量の増加に伴い MAC!BAR における心拍数は減少したが、血圧は上昇する傾向を 示し、４ ０µg／kg／hr 群では対照値より有意に上昇した。【考察】犬 において、フェンタニルをイソフルランと併用することでイソフル ラン単独時より良好な侵害刺激遮断効果が期待でき、同時に良好な 循環動態を得ることが可能と考えられた。 高齢犬におけるトラマドールの薬物動態 ○内田陽介１、北澤多喜雄２、井上博紀３、山 下和人１（１酪農学園大学・獣医学部伴侶動物 医療部門、２酪農学園大学・獣医学部生体機 能部門獣医薬理学教室、３酪農学園大学・環 境システム学部環境生化学研究室） 【目的】演者らは、第７ ２回獣医麻酔外科学会において、トラマドー ルは心血管系抑制が少なく、高齢犬のセボフルラン要求量を２ ０％程 度減少できることを報告した。今回、高齢犬におけるトラマドール の薬物動態を検討した。【方法】臨床上健康なビーグル犬６頭（８ ∼１ ０歳）にトラマドール４mg／kg を静脈内投与し、血漿トラマドー ル濃度（Cp）の変化を観察した。トラマドール投与直後から頚静 脈より経時的に採血して血漿を回収し、高速液体クロマトグラフィー （HPLC）で Cp を 分 析 し た。HPLC 分 析 に は、デ ュ ア ル ポ ン プ （DP! ８ ０ ２ ０， 東ソー，東京） 、HPLC カラム（Unison UK!C１ ８， 東ソー） 、 および蛍光検出器（FS! ８ ０ ２ ０， 東ソー）からなる HPLC システムを 用 い た。移 動 相 に は、A 液：メ タ ノ ー ル／水／酢 酸 ア ン モ ニ ウ ム （２ ４／７ ６／０． ０ ６）と B 液：１ ０ ０％メタノール溶液を用い、０． ３ml／分で 送液して１ ５分間で A 液から B 液に置き換わるリニアグラジエント とした。カラムで分離したサンプルは励起波長２ ７ ０nm および蛍光 波長３ ０ ４nm で蛍光検出し、インテグレーションソフトウェア（LC! ８ ０ ２ ０ Model，東ソー）でピーク面積を求めて Cp を算出した。ト ラマドールの薬物動態分析には、分析ソフト GraphPad PRISM version ４（GraphPad Software,San Diego,USA）を用いた。 【結 果】Cp は、投与後２分目に１， ０ ２ ０±２ ６ ０ng／ml、５分目に７９ １±２ ７ ８ ng／ml、１ ０分 目 に４ ７ ４±１ ２ ６ng／ml、２ ０分 目 に３ ４ ６±１ １ ８ng／ml、３ ０分 目に２ ９ １±８ ６ng／ml、６ ０分 目 に３ ０ ３±１ ９ ４ng／ml、１ ２ ０目 に１ ０ ６±５ ４ng／ ml、４時間目に７ ５±４ ５ng／ml、および６時間目に３ ７±５ng／ml となっ た。トラマドールの薬物動態は２ !コンパートメントモデルに良く適 応し、分布相における生物学的半減期（t１／２α）は０． ３ ２±０． ５ ８時 間、消失相における生物学的半減期（t１／２β）は１． １ ７±０． ７ ４時間 であった。 HS! １ ７ 鎮静・鎮痛薬が犬末梢血単核球の組織因子発 現に与える影響 HS! １ ８ ○藤塚淳史１、岡野昇三１、奈須俊介１、朴永 泰１、佐野忠士１、高瀬勝晤２（１北里大学・小 動物第３外科、２北里大学・小動物第１外科） 猫におけるメデトミジンとミダゾラムの併用 が神経内分泌および代謝に及ぼす影響 ○神田鉄平１、松鵜彩１、日笠喜朗１（１鳥取大 学・獣医内科学教室） 【背景】敗血症の病態には、組織因子（TF）を介する外因系凝固 による DIC が重要である。TF は、通常では単球に発現していない が、LPS やサイトカインなどの刺激により発現する。一方、敗血 症の治療に際して、感染巣の除去や動物の安定化のために麻酔、鎮 静・鎮痛薬を投与する場合が多い。しかし、鎮静・鎮痛薬が TF 発 現にどのような影響を与えているかは十分に検討されていない。そ こで、鎮静・鎮痛薬が犬末梢血単核球（PBMC）の TF 発現にどの ような影響を与えているかを検討した。 【材料と方法】実験は、ビー グル成犬４頭（雄２、雌２）を用いた。PBMC は、比重遠心法に ０％FBS 添加 より末梢血より分離し、１×１ ０６cell／ml になるように１ RPMI! １ ６ ４ ０で調製した。細胞浮遊液 は、LPS 群（LPS １ ０ ０pg／ml 添加） 、薬剤添加群（LPS １ ０ ０pg／ml＋各種薬剤添加）に群分けし た。検討した薬剤は、ミダゾラム、メデトミジン、ドロペリドール、 フェンタニルであり、最終添加濃度は文献的な臨床血中濃度（ミダ ０ ０ ゾラム １ ５ ０ng／ml、メデトミジン １ng／ml、ドロペリドール １ ng／ml、フェンタニル １ng／ml）および、その５倍量とした。各 薬剤を添加後３ ７℃、５％CO２ 下で６時間培養した後に PBMC を 回収した。TF は、犬プール血清を用いた凝固時間短縮の割合で評 価した。【結果と考察】ドロペリドールは臨床血中濃度，５倍量と もに TF 発現を有意に低下させた。メデトミジンは５倍量で、フェ ンタニルは臨床血中濃度で TF 発現を有意に低下させた。それに対 して、ミダゾラムは両濃度ともに有意な差はなかった。検討した鎮 静・鎮痛薬は、薬剤により TF 発現に与える影響に差が認められ、 敗血症の治療に際しては病態に適した薬剤の選択が必要であること が示唆された。 【目的】α２!アドレナリン受容体作動薬のメデトミジンは鎮静、鎮 痛あるいは筋弛緩薬として獣医学領域で広く使われている。しかし、 猫における本薬剤の神経内分泌や代謝に与える影響についての報告 は少ない。本研究は猫において、メデトミジンによる神経内分泌お よび代謝の変化に対するベンゾジアゼピン受容体作動薬のミダゾラ ムの併用効果を明らかにすることを目的とした。【材料と方法】健 康な猫５頭を用い、対照群（control） 、メデトミジン４ ０ µg／kg お よ び８ ０ µg／kg 群（Med４ ０，Med８ ０） 、ミ ダ ゾ ラ ム０． ５ mg／kg 群 （Mid０． ５） 、メデトミジン４ ０ µg／kg およびミダゾラム０． ５ mg／kg 併用群（Med４ ０ !Mid０． ５）に繰り返し使用した。各薬物投与前後の 経時的な採血を行い、血漿グルコース、インスリン、グルカゴン、 コルチゾール、遊離脂肪酸、ノルエピネフリン、エピネフリン濃度 を測定した。【結果】Med４ ０ !Mid０． ５は Med４ ０に比べて、血糖値の 上昇が軽減され、インスリン濃度は一過性の低下を示した後の回復 が早まる傾向を示した。Mid０． ５ではグルコースおよびインスリン 濃度の有意な変化は観察されなかった。Mid０． ５はノルエピネフリ ン濃度の有意な上昇を示し、Med４ ０ !Mid０． ５は MED４ ０に比べノル エピネフリン濃度の減少が軽減される傾向を示した。グルカゴン、 コルチゾール、エピネフリンは各群で有意な変化を示さなかった。 遊離脂肪酸は各群で同様の低下を示した。【結論】メデトミジンお よびミダゾラムの併用は猫において、同量のメデトミジン単剤投与 に比べ鎮静効果を増強させるにも関わらず、過血糖は軽度であるこ とが示された。 HS! １ ９ HS! ２ ０ 犬におけるキシラジンおよびメデトミジンの 利尿効果の比較 ○Talukder Hasanuzzaman１、高橋元１、佐 藤加奈子１、日笠喜朗１（１鳥取大学・獣医内 科学教室） 【目的】メデトミジン（MED）とキシラジン（XYL）は数種の動 物で利尿作用の報告があるが、犬における用量依存性効果と時間経 過に伴う反応の解析は未だ十分でなく、利尿作用の機序も明確でな い。本研究では健康犬における MED と XYL の利尿効果を比較す ることを目的とした。【材料と方法】実験には５頭の成犬を用い、 各群に繰り返し使用した。実験群は対照として生理食塩液、XYL ０． ２ ５，０． ５，１，２，４ mg／kg、MED ５， １ ０，２ ０，４ ０，８ ０ µg ／kg 筋肉内投与の計１１群を設けた。薬物投与前と投与後２ ４時間の 間に計１ １回の採血と採尿を行い、尿量、尿 pH、尿比重、尿中クレ アチニン濃度、尿中・血中の浸透圧、電解質、アルギニンバソプレ シン（AVP）濃度、および血中心房性 ナ ト リ ウ ム 利 尿 ペ プ チ ド （ANP）濃度を測定した。【結果】MED と XYL は投与後４時間ま で尿量を顕著に増加した。XYL は用量依存性に尿量を増加したが、 MED は今回の用量では用量依存性を示さなかった。両薬は尿比重、 尿浸透圧、尿中クレアチニン、ナトリウム、カリウム、クロールお よび AVP 濃度を用量依存性に減少し、尿中 pH の低下傾向を示し た。血漿浸透圧、ナトリウムおよびクロールは有意な変動がなかっ たが、血漿カリウムは両薬群で増加した。血漿 AVP は両薬物群に おいて初期に減少し、その後増加した。血漿 ANP は MED 投与に より用量依存性に増加し、その効果は XYL より強力であった。 【考察】 XYL と MED は顕著な利尿作用を示すが、MED の利尿 効果は XYL に反して用量依存性でないことを明らかにした。AVP と ANP の変化は利尿効果に一部影響したかもしれないが、両薬の 利尿作用機序には他の要因の関与も示唆される。 イヌの腕神経叢ブロックにおける神経刺激装 置の有用性 ○左近允巌１、前川良子１、前橋理恵１、角田 知子１、高瀬勝晤１（１北里大学・小動物第１ 外科学研究室） 【背景】腕神経叢ブロック（ABPB） は、前肢の手術時に有効な鎮痛 法であるが、従来の方法では穿刺法が盲目的であるがゆえに安定し た鎮痛効果を得ることが難しい。 【目的】本研究では、イヌの ABPB に対して神経刺激装置を神経の探査装置として使用し、その有用性 を検討すると同時に、ブピバカインとロピバカインのブロック効果 を比較した。【材料と方法】実験には、健康なビーグル犬１ ４頭を用 いた。実 験１で は、TOF （TB） 群： ０． ５％ブ ピ バ カ イ ン（Bupi） （MB） 群： ２mg／kg を神経刺激装置を用いて投与した群、Manual 同薬剤を従来の手法で投与した群の２群を設定した。実験２では、 ５ !Ropi 群：０． ５％ロ ０． ５ !Bupi 群：０． ５％Bupi ２mg／kg 投与群、０． ７ ５ !Ropi 群： ０． ７ ５％Ropi ピ バ カ イ ン（Ropi）２mg／kg 投 与 群、０． ３mg／kg 投与群の３群を設定した。ブロックの効果は、皮膚知 覚反応および神経学的検査所見 （BS）、ブロックの開始時間 （OT） 、 持続時間（DT） をスコア化して評価し、全検査項目でブロックが成 立した場合をフルブロック（FB）とした。 【結果】実験１において、 FB 成立率は、MB 群の２ ５％に対し TB 群で７ ５％と有意に高かった （p＜０． ０ ５） 。実験２では、FB の平均 OT は、０． ７ ５ !Ropi 群で他の２ 群よりも有意に低かったが（p＜０． ０ ５） 、平均 DT に有意な差は認め られなかった。また、各検査時間における総 BS では、０． ５ !Ropi 群 および０． ７ ５ !Ropi 群で３０ ０分付近まで高く、その後低下するのに対 し、０． ５ !Bupi 群では、３ ６ ０分以降も他の２群よりも高い値で推移し た。【考察】以上のことより、神経刺激装置の使用によって、より 確実な腕神経叢ブロックが可能になることが明らかとなった。また、 Bupi は Ropi と比較してブロック効果の発現は遅いが、長時間の 鎮痛効果が得られることが示唆された。 HS! ２ １ イヌの脳血流速度および血流量に対するデキ ストラン加高張食塩液の効果 １）正常モデルでの検討 HS! ２ ２ ○小林史奈１、福嶋知１、鯉江洋２、浅野隆司１ （１日大・獣医薬理学研究室、２日大・獣医内 科学研究室） イヌの脳血流量および血流速度に対するデキ ストラン加高張食塩液の効果 ２）実験的脱血モデルでの検討 ○福嶋知１、小林史奈１、鯉江洋２、浅野隆司１ （１日大・獣医薬理学研究室、２日大・獣医内 科学研究室） 【背景および目的】現在，イヌの脳循環改善のための第一選択薬と して，２ ０％マンニトール（MAN） が用いられているが，頭蓋内圧の リバウンド効果などの様々な副作用が報告されている．その代替薬 品として脳血管内浸透圧を持続的に高く維持できる６％デキストラ ン加７． ２％高張食塩液（HSD）が期待されている．本研究では，上 矢状静脈血流速度および血流量を測定し，HSD の脳循環に及ぼす 影響について MAN と比較検討した． 【材料および方法】イソフルラン吸入麻酔下のビーグル種イヌ（n に対して，５mL／kg の 生 理 食 塩 液（ISS） ， MAN ま た ＝６／群） は HSD のいずれかを１５分間で静脈内投与し，MRI を用いて下垂体 垂直断面軸位像で上矢状静脈の血流速度および血流量を Phase Shift 法により測定した．また，pre 値に対する循環血漿量の変化量 （rPV） を算出した．【結果】HSD 群の rPV は投与終了時の１ ２ ７． ３±４． ７％ を最高値として有意（ｐ＜０． ０ ５） に増加した．一方，MAN 群では投 与終了時に１ １ ５． ４±３． ７％の最高値を示したものの，その後 ISS 群に 比べて低値を推移した（ｐ＜０． ０ ５） ． HSD 群の血流速度および血 流量は投与開始３ ０分後にそれぞれ pre 値に対して１． ４ ７±０． ３倍，１． ５ ３ ±０． ３倍を最高値とする有意な増加が認められ，他群よりも有意 （ｐ＜０． ０ ５）に高値を推移した． 【考察】HSD 群は上矢状静脈血流速度および血流量のいずれにお いても，MAN 群より有意に高値を推移した．これらの結果から， イヌ医療分野においても HSD は MAN に代替する脳血液循環改善 薬として極めて有用であると思われる． 【背景および目的】現在，出血性ショック動物の脳浮腫に対する第 一選択薬は２ ０％マンニトール（MAN）であるが， ６％デキスト ラン７ ０加７． ２％高張食塩液（HSD）の脳循環改善効果が MAN の効 果よりも持続的かつ優れているのであれば，これに代替することが できる．本研究では脱血モデルを用いて，イヌの脳血液循環に対す る HSD の効果を，上矢状静脈血流速度および血流量を指標に検討 した． 【材料および方法】イソフルラン吸入麻酔下の正常ビーグル種イヌ ０mL／kg の血液を３ ０分間で （n＝６／群）における大腿股動脈より３ 抜き取り，脱血モデルを作出した．その後，５mL／kg の HSD また は MAN を１ ５分で静脈内投与し，MRI を用いて上矢状静脈血流速 度および血流量を PhaseShift 法により計測した．また pre 値に対 する循環血漿量の変化量（rPV）を算出した． 【結果】HSD 群の rPV は投与終了時に１ ５ ４． １±１ ７． ９％の最高値を 示し，MAN 群の１ ２ ７． ０±９． ６％と比べて有意（p＜０． ０ ５）に高値を 示した．MAN 群の上矢状静脈血流速度は投与終了時に pre 値の１． ８ ±０． ２倍の最高値を示し，同様に上矢状静脈血流量では１． ７±０． ２倍 の最高値を示した．一方，HSD 群では上矢状静脈血流速度で２． １± ０． １倍，上矢状静脈血流量は１． ９±０． １倍を示し，双方とも MAN と 比較して有意（p＜０． ０ ５）に高値を示した． 【考察】HSD は MAN と比較して有意に上矢状静脈断面積を拡張 させると同時に，上矢状静脈血流速度を増加させ，上矢状静脈血流 量も増加させた．これらの結果から，出血性ショックによる脳血液 循環不全の改善には MAN よりも HSD の方が有効であると思われ る． HS! ２ ３ HS! ２ ４ イヌ肥満細胞腫における腫瘍化抑制標的分子 の検討 ○雨貝陽介１、田中あかね１、松田浩珍１（１東 京農工大学・獣医分子病態治療学） 【目的】肥満細胞の腫瘍化には c!kit レセプター（KIT） の変異が関 与しているとされながら、KIT に変異を有するイヌ肥満細胞腫症 例は全体の２∼３割にすぎない。本研究では KIT 遺伝子の詳細な 変異解析に加え、腫瘍化への関与が示唆される受容体チロシンキナー ゼについて検討を行い新規腫瘍化機構を検索した。 【方法】８ ０症例 のイヌ肥満細胞腫サンプルより DNA および RNA を抽出し、PCR 法およびダイレクトシークエンス法にて KIT 遺伝子を解析した。 シグナル系の検討には初代培養から樹立した１種類を含む計３種類 のイヌ肥満細胞株を用い、様々なキナーゼの発現をウエスタンブロッ ト法で調べた。また、活性化キナーゼの特異的阻害剤を用いて、増 殖抑制効果を MTT 法で評価した。【結果】KIT 変異は全体の２割 以下で、８症例で膜直下 Juxtamembrane 領域に繰り返し配列が挿 入されていたほか、同領域の欠損・置換変異、また細胞外ドメイン の点突然変異が各２症例認められた。EGF 及び PDGF 受容体の発 現は一部の細胞株で認められたが微弱で、Flt３の発現はすべての 細胞株に検出できなかった。受容体チロシンキナーゼ特異的阻害剤 の増殖抑制効果は限定的であったが、PI３K シグナル伝達系および 転写因子 NF!κB 阻害剤はすべての細胞株で有効に増殖を抑制した。 【総括】以上の結果から、さらなる未知の腫瘍化メカニズムの存在 が示唆される一方で、PI３K シグナル伝達系や NF!κB が広く肥満 細胞の腫瘍性増殖を抑制するための標的分子となることが明らかと なった。このことは、これら分子を標的とした薬剤が、有効な治療 薬となる可能性を示唆するものである。 イマチニブが奏功した c!kit エクソン１１ non! ITD の肥満細胞腫の犬３例 ○冨永美樹１、大野耕平１、福岡由高１、礒谷 真弓１、八木原紘子１、田村恭一１、盆子原誠１、 小野憲一郎２、鷲巣月美１（１日本獣医生命科 学大学・獣医臨床病理学教室、２東京大学大 学院・獣医臨床病理学教室） 【背景と目的】KIT は c!kit 遺伝子にコードされるチロシンキナー ゼ受容体であり、c!kit 遺伝子の突然変異は KIT の自己リン酸化 を亢進し細胞の腫瘍性増殖を引き起こす。犬の肥満細胞腫では、KIT の細胞膜近傍領域をコードする c!kit エクソン１ １に重複配列の挿入 変異（ITD） が知られており、これらの症例ではチロシンキナーゼ阻 害剤であるイマチニブが著効を示す。人の腫瘍では、自己リン酸化 を引き起こす変異は膜近傍領域だけでなく、キナーゼ領域を含む細 胞内領域で多く見られている。今回、エクソン１ １に ITD が見られ なかった肥満細胞腫の犬３例においてイマチニブが著効を示したた め、c!kit 遺伝子の細胞内領域の変異を検索した。【症例】症例は皮 膚に多発性の腫瘤が認められ、針吸引生検により肥満細胞腫と診断 された。摘出手術が困難であることから、イマチニブを１ ０ mg／kg ／day で連日経口投与した。イマチニブの投与期間中は、他の抗癌 剤の投与を行わなかった。【材料と方法】腫瘍細胞を針吸引により 採取し、これらの細胞から RNA を抽出した。RT!PCR により細胞 内領域をコードする塩基を増幅し、その塩基配列を解析した。 【結 果と考察】全ての症例において、イマチニブ投与後１週間で部分寛 解が認められた。しかしながら、塩基配列の解析では３症例とも c !kit 遺伝子の細胞内領域には変異が認められず、KIT の細胞外領 域の変異あるいは他のチロシンキナーゼ受容体における異常である 可能性が示唆された。また、今回の結果から、KIT の膜近傍領域 およびキナーゼ領域をコードする遺伝子に変異が見られない場合で も、イマチニブに反応する可能性が示された。 HS! ２ ５ 猫の肥満細胞腫２ １例における c!kit 遺伝子変 異の解析 HS! ２ ６ ○礒谷真弓１、八木原紘子１、田村恭一１、盆 子原誠１、小野憲一郎２、鷲巣月美１（１日本獣 医生命科学大学・獣医臨床病理学教室、２東 京大学大学院・獣医臨床病理学教室） 【背景と目的】c!kit 遺伝子がコードする KIT は受容体型チロシン キナーゼであり、SCF の結合により細胞の分化・増殖が誘導され る。人ではいくつかの腫瘍で c!kit 遺伝子の変異が報告されており、 これらの変異により SCF 非依存性に KIT の自己リン酸化が亢進し、 細胞の腫瘍性増殖が惹起される。犬の肥満細胞腫では、KIT の細 胞膜近傍領域をコードするエクソン１ １に重複配列の挿入変異（ITD） が多発することが報告されている。一方、猫の肥満細胞腫における c!kit 遺伝子変異は、エクソン８における ITD が１症例で報告され ているのみで、変異多発部位は同定されていない。そこで今回、猫 の肥満細胞腫２ １症例の c!kit 遺伝子を解析し、変異の有無を検討し た。【材料と方法】細胞診あるいは病理検査により、肥満細胞腫と 診断された猫２ １症例の腫瘍細胞からゲノム DNA を抽出した。PCR 法により c!kit 遺伝子エクソン８およびエクソン１ １を増幅し、塩基 配列の解析を行った。【結果および考察】２ １症例中７症例でエクソ ン８に ITD が認められ、これらは全て以前報告された ITD と同一 の１ ２塩基が挿入されていた。また、２症例では、エクソン８におい て欠失!挿入変異が認められた。一方、エクソン１ １の挿入変異は１ 症例のみで認められた。他の１ １症例では、エクソン８および１ １に変 異は認められなかった。これらの結果から、猫の肥満細胞腫は犬と 異なり、エクソン８が変異多発部位であると考えられた。 演題取り下げ HS! ２ ７ HS! ２ ８ 犬組織球性肉腫細胞株７株におけるヌードマ ウス移植腫瘍の検討 ○呰上大吾１、岩城周子２、加藤里奈２、新倉 由美子２、盆子原誠２、鷲巣月美２、小野憲一 郎３（１日獣大・獣医保健看護、２日獣大・獣 医臨床病理、３東大・院・獣医臨床病理） 【目的】犬の組織球性肉腫（histiocytic sarcoma； HS）は有効 な治療法が報告されておらず，臨床挙動の非常に悪い腫瘍であり， その研究を行う上で有用な移植腫瘍系を確立することが必要である． 我々は既に in vitro にて犬 HS 細胞株７株を樹立したことを報告し たが，今回，これらの細胞株をヌードマウスに接種しその造腫瘍能 と移植腫瘍の性状を検討した．【方法】６週齡，雄のヌードマウス （BALB／cA Jcl!nu／nu）を実験に供した．これらのマウスは SPF 環境のアイソレーター内で，滅菌蒸留水および γ 線滅菌固形飼料を 不断給餌して飼育した．HS 細胞株は１株あたりヌードマウス３匹 に対し，左あるいは右の側腹部皮下に１×１ ０７個接種し，接種部位 における腫瘤の形成を７ ２日間観察した．観察期間終了後，常法に従 いヌードマウスを安楽死し，細胞学的検査とホルマリン固定組織の 病理組織学的検査を行った． 【結果・考察】樹立した株化細胞はい ずれもヌードマウスに腫瘍を形成した．また，形成された移植腫瘍 は，独立円形細胞の瀰漫性増殖で構成され，個々の腫瘍細胞は組織 球様の形態を示し，さらに細胞化学ならびに免疫組織化学的染色態 度（ペルオキシダーゼ陰性，非特異エステラーゼ陽性，サイトケラ チン陰性，ビメンチン陽性およびライソザイム陽性）が HS 腫瘍細 胞と一致しており，原発腫瘍と同様の腫瘍組織を形成した．一方， 腫瘍細胞のリンパ節転移や他臓器への遠隔転移は観察期間中には認 められなかった．以上の結果より，我々の樹立した HS 細胞株は， ヌードマウス皮下接種によって原発腫瘍と極めて類似した HS 腫瘍 組織を効率的に形成することが明らかになり，犬の HS の移植腫瘍 系として有用であると考えられた． マウス線維肉腫と皮膚に対する放射光マイク ロスリットビームの照射効果 ○武藤光 伸１、大 野 由 美 子２、古 澤 佳 也２、小 山田敏文１、鈴木雅 雄２、八 木 直 人３、小 池 幸 子２、鵜澤玲子２、柿崎竹彦１、和田成一１、取 越正己２、伊藤伸彦１（１北 里 大 学・獣 医 畜 産 学部、２放射線医学総合研究所・重粒子医科 学センター、３高輝度光科学研究センター・ 利用研究促進部門） 【背 景】薄 い 平 面 状 放 射 光 X 線 を 多 層 ス リ ッ ト 状 に 照 射 す る microbeam radiation（MR）は、新しいがん治療法として期待さ れており、MR の腫瘍や正常組織に対する影響の解明が試みられて いる。 【目的】マウス線維肉腫（NFSa）に対して MR を施し、腫瘍治療 効果と正常組織の耐容線量について検討する。 【材料と方法】実験は大型放射光施設 SPring! ８の共用ビームライ ン BL２ ８B２で行った。ビームラインに輸送される白色 X 線をタン グステンとカプトンフィルムの多層スリットコリメータ（幅２ ５µm、 ２ ０ ０µm ピッチ）に通過させて、多層の薄いスリット状のビームを 形成した。照射８日前に NFSa を C３H マウスの後肢に移植した。 一部のマウスは照射部位を剃毛し、皮膚反応を観察した。なお、皮 膚の評価は Skin Reaction Score に基づいて行った。 【結果】腫瘍体積が１cm３に達するまでの日数は、対照群に比べ、 MR で 有 意 に 延 長 し た。他 方、ス リ ッ ト を 通 さ な い broadbeam radiation（BR）では、組織に対する吸収線量が同一の場合でも MR よりさらに増殖抑制効果が強かった。 皮膚に対する影響は、約２ ０ ０Gy の照射において、MR 後１０日目に は、BR よりも Score が高くなったが、１ ４日目以降には BR よりも Score が低くなる傾向が認められた。 【考察】同等の増殖抑制効果を持つ MR と BR であっても、MR で は実際の照射面積は BR の１／８と少なく、かつビーム幅も極めて 小さいことから細胞の補填効果などで細胞の修復が早くなる。一方、 BR では照射面積が大きく、正常組織も多くの障害を受けることか ら皮膚の治癒も遅くなると考えられた。 HS! ２ ９ イヌ腫瘍細胞におけるウシラクトフェリンお よびプロポリスの抗腫瘍効果の検討 HS! ３ ０ ○森光俊晴１、山田裕一１、小林沙織１、百田 豊１、鈴 木 幸 一２、安 田 準１、佐 藤 れ え 子１ （１岩手大学・小動物内科学研究室、２岩手大 学・応用昆虫学研究室） 犬赤血球膜主要グライコフォリン遺伝子の同 定 ○佐藤耕太１、安達啓一１、新敷信人１、小松 智彦１、大塚弥生１、稲葉睦１（１北大・院獣医・ 臨床分子生物学教室） ［背景］ 腫瘍性疾患の治療法として行われる化学療法の問題点と しては、抗がん剤に対する多剤耐性の発現がある。そのため既知の 抗がん剤とは異なった作用機序を持ち、薬剤耐性の腫瘍細胞にも有 効な抗腫瘍性物質が求められている。本研究では、我々が BRM 療 法として用いているウシラクトフェリン（bLF） とプロポリスの直接 的抗腫瘍効果を検索した。また多剤耐性の機序の一つとして注目さ れている p!糖タンパク質の各種細胞における発現、bLF とプロポ リスがそれに及ぼす影響を検索することを目的とした。 ［方法］ イヌ乳腺腫瘍細胞に bLF とプロポリスの添加培養を行い、増殖 抑制効果を観察した。次に正常犬の臓器と培養細胞において、p! 糖タンパク質をコードしているイヌ MDR１の発現を RT!PCR で 検索した。更に培養細胞からイヌ MDR１cDNA をクローニングし た。また bLF とプロポリスをイヌ乳腺腫瘍細胞へ添加培養し、MDR １発現への影響を調べた。［結果と考察］bLF とプロポリスを添加 培養することにより、イヌ乳腺腫瘍細胞の増殖抑制効果が観察され た。正常犬の肝臓、腎臓、末梢血単核球では MDR１の発現が見ら れたが、末梢血多形核球では認められなかった。培養細胞では乳腺 腫瘍、腎臓由来細胞では発現が認められたが、リンパ系腫瘍細胞で は見られなかった。MDR１の発現が見られた腫瘍細胞においても bLF とプロポリスの増殖抑制効果が認められたことから、これら は多剤耐性腫瘍の補助療法薬としても有望であることが示唆された。 一方、今回使用したリンパ系腫瘍細胞では MDR１の発現が見られ なかったことから、MDR１導入細胞もしくは既知の発現細胞を用 いての検討が必要であると思われた。 【背景】グライコフォリン（GP）は赤血球膜に発現する主要シア ロ糖蛋白質であり、赤血球膜骨格の維持、血液型抗原や病原微生物 の受容体として機能するなどさまざまな役割を果たしている。しか し、犬ではその分子構造が明らかでなく、犬における GP の機能や 性状は不明である。そこで本研究では、犬 GP の性状を明らかにす るために、犬グライコフォリン A（GPA）および C（GPC）の遺 伝子クローニングを行った。【方法】犬赤血球膜に見られる糖蛋白 質を同定する一方、犬ゲノム配列検索で得られたヒト GPA および GPC 類似配列をもとに、骨髄細胞について rapid amplification cDNA ends（RACE）法を行い、犬 GPA ならびに GPC cDNA を増幅、 単離した。【結果と考察】犬赤血球膜シアロ糖蛋白質は、PAS 染色 で２ ８ および３ ２ kDa に観察された。イムノブロットの結果から、 これらは GPC と推定された。犬 GPA は他種由来 GPA と膜貫通領 域で相同性を示し、細胞外領域では数カ所の O!結合型糖鎖付加が 予想される配列がみられた。一方、犬 GPC は膜貫通および細胞内 領域において他種 GPC と相同性が高く、細胞外ドメインに N!お よび O!結合型糖鎖が付加され得る配列・部位が確認された。以上 の結果より、本研究で単離した cDNA は犬 GPA および GPC 遺伝 子であると考えられた。次に、これらの遺伝子の発現分布を調べた ところ、骨髄や網状赤血球に加え、肝、腎および小腸などにおいて も発現が観察され、GP の他臓器における役割の存在が示唆された。 【結論】本研究により、犬 GPA および GPC の性状（一次構造お よび組織分布）が明らかになった。 HS! ３ １ HS! ３ ２ 小胞放出経路による犬網状赤血球からの stomatin と Na,K!ATPase の消失 ○小松智彦１、大塚弥生１、佐藤耕太１、稲葉 睦１（１北大・院獣医・臨床分子生物） 【背景と目的】犬の赤血球は、網状赤血球の成熟に伴う Na,K!ATPase の消失により低 K＋濃度の LK 型となる。これまでに我々は、Na,K !ATPase の消失と同時期に赤血球膜蛋白質 stomatin が消失するこ と、遺伝的に高 Na,K!ATPase 活性を保つ HK 型犬赤血球の stomatin 含量が著しく多いことを明らかにした。これらのことは、stomatin と Na,K!ATPase の消長が共通の過程を経ることを示唆している。 本研究の目的は、この過程における小胞放出経路の関与の有無を明 らかにすることである。【方法】犬網状赤血球を２ ４時間培養し、培 養上清から１ ８， ０ ０ ０ x g 、１ ０分の遠心で分離される小胞画分（P １）と、１ ０ ０， ０ ０ ０ x g 、６ ０分で得られる画分（P２）を得た。網 状赤血球、P１ならびに P２に含まれる小胞について走査型／透過 型 電 子 顕 微 鏡 で の 形 態 観 察 を 行 う と と も に、stomatin、Na,K! ATPase、transferrin receptor （TfR） 等の存在、含量を解析し た。【結果と考察】網状赤血球内には３ ０∼５ ０ nm の exosome 様小 胞を複数含む小胞が認められ、また網状赤血球表面には５ ０∼３ ０ ０ nm の小胞の突出が認められた。P２画分には前者に相当する３ ０∼ ５ ０ nm 程度のサイズの膜小胞が、P１画分には後者と同等の、よ り 大 き な 膜 小 胞 が 含 ま れ て い た。ま た、P２画 分 の 膜 小 胞 に は stomatin、Na,K!ATPase、ならびに TfR がイムノブロットで検出 されたが、一方 P１画分では stomatin は認められたものの、他は 認められなかった。したがって、stomatin と Na,K!ATPase は TfR 同様に exosome 様小胞に含まれ、その放出により網状赤血球から 失われると考えられた。【結論】犬網状赤血球の成熟過程において、 stomatin と Na,K!ATPase の一部は exosome 様小胞放出経路で失 われる。 Hydroxyethyl starch を用いた犬赤血球の −８０℃凍結保存法の保存時間による影響 ○田浦保穂１、宇野堅太１、金喜廷１、板本和 仁１、中市統三１、宇根智２、隅田幸 男３（１山 口大学農学部・臨床獣医学講座、２山口大学 農学部・附属動物医療センター、３日本低温 医学輸血学研究所・隅田研究室） 獣医臨床では輸血の必要性が高い半面、十分なドナー血液を入手す るのは困難である。人医学では赤血球の凍結保存は凍害保護物質と して Glycerol （GL） を用い−１ ９ ６℃で行われているが、GL は解凍後 の洗浄除去が必要であり、獣医臨床領域へは応用されていない。我々 は、非洗浄で輸血が可能な Hydroxyethyl starch（HES）を用い、 −１ ９ ６℃で急速冷却後に−８ ０℃超低温フリーザーに移す２ステップ 冷凍保存法を試みた結果、ヘモグロビン（Hb）回収率、浸透圧脆 弱試験はともに GL 群よりも HES 群の方が良好であった。さらに、 −８ ０℃凍結保存血の自己輸血では輸血後の重篤な副作用の発現は認 められなかった。そこで、−８ ０℃凍結保存血の経時的な in vitro での変化を観察することにより、−８ ０℃凍結保存での保存可能な期 間について検討した。【材料と方法】実験群は保存期間、２ ４時間、 １ヵ月、２ヵ月、３ヵ月の保存血群と対照群（凍結保存を行ってい ない血液）の５群とした。６頭の健常実験犬から採血後作製した濃 厚赤血球と２ ５％HES を等量混合し、液体窒素内で急速凍結し、そ の後−８ ０℃超低温フリーザー内で２ ４時間、１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月 凍結保存後、急速解凍し、Hb 回収率、浸透圧脆弱性試験、走査電 子顕微鏡による観察を実施した。【結果および考察】２ ４時間、１ヵ 月、２ヵ月、３ヵ月保存血群の Hb 回収率はそれぞれ９ ７． ８±１． ６％、 ９ ５． ６±３． ６％、９ ６． ３±３． ３％、９ ５． ９±３． ３％と な っ た。Hb 回 収 率、 浸透圧脆弱性試験での５ ０％溶血濃度、走査電子顕微鏡による観察に よる赤血球の形態的な分類ではそれぞれに保存期間による有意差は 認められなかった。以上の結果により、 −８ ０℃で HES を用いた ２ステップ冷凍保存法が犬赤血球を長期に保存する方法になりうる ことが示唆された。 HS! ３ ３ 犬糸状虫成虫駆除を目的としたイベルメクチ ン投与時のＣＴによる肺野の経時的観察 HS! ３ ４ ○高橋歩土 、山田一孝 、岸本海織 、清水 純一郎１、前田龍一郎２（１帯畜大・臨床獣医 学講座、２帯畜大・基礎獣医学講座） １ １ １ 犬糸状虫の抗凝固活性に関する研究 ○土井純子１、亘敏広１、関泰一郎２、森友忠 昭１、野上貞雄１（１日本大学生物資源科学部・ 獣医、２日本大学生物資源科学部・農芸化学） 【目的】イベルメクチン長期投与により犬糸状虫成虫駆除効果があ ることが知られているが，死滅虫体による肺動脈塞栓の詳細な過程 は明らかにされていない．そこで今回，Computed Tomography （CT）を用いて成虫駆除に伴う肺野の変化を経時的に観察した． 【材料および方法】ビーグル犬２匹（個体 A：１ ６． ５kg，個体 B： １ ４． ５kg）に犬糸状虫第３期幼虫１ ０ ０隻を皮下接種し，１ ０ヵ月後から 毎月１回，パナメクチンチュアブル（イベルメクチン，２ ７ ２µg／匹， 明治製菓）を経口投与し，定期的に検査を行った．動物は投与開始 １ ５ヵ月後に安楽死し，生存成虫数の計測および病理学的検査を行っ た． 【結果】個体 A の CT 画像上では，投与１ヵ月後から肺動脈塞栓 症と考えられる肺動脈末梢の拡張および肺炎が認められたものの， 投与７ヵ月後には消失した．また，投与１ ３ヵ月後に新たな病変が認 められたが，翌月には消失していた．試験期間中，犬糸状虫症に起 因すると考えられる臨床徴候は認められなかった．病理検査時の生 存成虫数は，個体 A,B それぞれ２ ５隻と３ １隻であった．CT 画像上で 肺動脈塞栓症を疑った部位の病理組織学的検査では，血栓，死滅虫 体による塞栓像および再疎通像が確認された． 【考察】CT 画像の経時的変化から，投与開始１ヵ月後に死滅した 成虫もいれば，１年以上経過した後に死滅した成虫もいることが示 唆された．このことから，肺動脈に寄生する成虫が徐々に死滅した ため，臨床徴候を示さなかったと考えられた．さらに，投与を継続 することで致命的な症状を起こさず完全駆虫に至る可能性が示唆さ れた． 【背景および目的】犬糸状虫（Di）症では、外科的虫体除去時に虫 体が損傷すると凝固異常を呈することがある。また、Di 抽出物の 静脈投与によりショックを伴い凝固が遅延することから、Di 虫体 成分中に抗凝固作用に関与する物質の存在が示唆されている。今回、 Di 成虫抽出物を正常犬の血漿に添加し、直接的な凝固遅延作用を in vitro で確認したので報告する。 【材料および方法】３頭の正常犬のクエン酸処理血漿に２ ０％の割合 になるように Di 抽出物を添加し、in vitro で活性化部分トロンボ プラスチン時間 （APTT）およびプロトロンビン時間（PT）を 測定した。対照には、牛血清アルブミン（９， ０ ０ ０µg／ml）を用いた。 測定にはウエット法で、AMELUNG KC ４ A micro（Sigma 社）を用い、duplicate で測定してその平均値を凝固時間とした。 【結果】Di 雌雄成虫の抽出は PT に対してはほとんど影響を及ぼ さなかったが、濃度依存的に APTT を延長した。この凝固遅延活 性は、雌雄虫体両者の抽出物中に存在すること、分子量１ ０ ０kDa 以 ０分間の熱処理により失活する易熱性物質であること 上で、１ １ ０℃／１ が確認された。 【考察】Di 症の病態解明において、Di の有する生理活性物質の把 握が重要である。本研究で確認された凝固遅延物質は、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ Ⅰ、 ⅩⅡ因子、プレカリクレイン、高分子キニノーゲンなどの凝固系因 子に作用することが推測された。Di 虫体に直接的な抗凝固作用が 認められたことから、手術時や駆虫時などに成虫が破壊された場合 には、虫体による塞栓だけでなく、同時に凝固が遅延する可能性が 示唆された。 HS! ３ ５ HS! ３ ６ Flow cytometry 法による犬の活性化血小板・ 網状血小板の検出−基礎的検討（第１報） 非ステロイド性消炎鎮痛剤長期投与における 犬の骨折治癒過程に及ぼす影響 ○矢野久美子１、鬼頭克也１、高島康弘１（１岐 阜大学・獣医寄生虫病学分野） ○越智広樹１、原康１、原田恭治１、根津欣典１、 余戸拓也１、多川政弘１（１日本獣医生命科学 大学・獣医外科学教室） ［背景］フローサイトメトリーによる血小板解析（FC 法）は、測 定精度の高く多岐にわたる項目を解析できる。さらに、全血を用い ることで、より生理的な条件下での解析が可能である。犬では FC 法による血小板解析の報告は少なく、全血による検討も不十分であ る。［目的］犬の全血を用いた FC 法により、活性化血小板の検出 が可能であるかの検討と、血小板産生・消費の指標である網状血小 板（RP） 率測定条件を検討した。［方法］健常犬４頭の３． ２％クエン 、PAF 酸加全血に、ADP （終濃度２ ０ µM） 、collagen（同１ ０ µg／ml） （同１ ０ nM）それぞれの刺激剤を添加し、血小板を刺激した。つ いで、血小板活性化マーカーの CD６ ２P 抗体、血小板・白血球凝集 体（PLA）検出のための CD４ ５抗体を、それぞれ血小板マーカーで ある CD６ １抗体と共に反応させ二重染色した。RP 率は、健常犬３ 頭の EDTA 加全血を CD６ １抗体と Thiazole Orange（TO）で染色 し測定した。 ［結果］ 未刺激状態での CD６ ２P 発現率は０． ２ ４±０． ２ ０％ （mean±SD） ，PLA 発現率は７． ７ ４±５． ３ ８％であった。これを ADP, collagen,PAF で 刺 激 す る と CD６ ２P 発 現 率 は，そ れ ぞ れ１． １ ８± ０． ８ ４％，２． ４ ６±１． ２ ４％，２ ２． ９ ６±１ ６． ３ ２％に、PLA 発現率は１５． ３ ８± ７ ５±１ ４． ２ ７％に有意に上昇した。 RP ５． ７ ８％，１ ８． ７ ７±８． ０ ７％，４ ４． 率は、染色時間１時間では３． ６ ５±０． ３ ５％、３時間では６． ５±３． ２ ４％ であった。また検体の最終希釈倍率２ ０ ０倍では、血小板と赤血球の 共在現象が見られ測定値への影響が考えられた。［考察］犬全血を 用いた FC 法により、各種刺激剤による血小板の活性化を鋭敏に検 出することができた。RP 測定については、測定値に影響を及ぼす と考えられる条件について検討を進めている。 【背景】骨折治癒過程には様々なサイトカインや成長因子が複雑に 関わる。近年、マウスおよびラットを使用した実験において、非ス テロイド性消炎鎮痛剤（NSAIDs）の使用による、骨折治癒過程の 遅延ならびに癒合不全の発生が報告されており、NSAIDs が骨折治 癒過程に抑制的な影響を及ぼすことが示唆されている。【目的】 NSAIDs の長期投与が、犬の骨折治癒過程に及ぼす影響を検討する。 【材料および方法】健常ビーグル成犬６頭を NSAIDs 投与群（n＝ ３）と対照群（n＝３）に分け使用した。両群共に、右側脛骨に単 純骨切り術を実施後、髄内ピンにより内固定を行った。NSAIDs 投 与群にはカルプロフェンを２． ２mg／kg で１日２回、１２ ０日間経口投 与した。実験期間中は術後１ ２ ０日目まで定期的に X 線撮影を行い、 骨治癒過程ならびに仮骨比を経時的に評価した。実験期間終了後、 Quantitative CT 法により骨切り部の骨塩量測定ならびに、安楽死 後左右脛骨の採取を行い、三点曲げ試験により骨強度を評価した。 【結果】X 線写真上、NSAIDs 投与群では、対照群と比較して骨治 癒期間の遅延が認められた。仮骨比は、両群共に術前と比較して術 後有意な増加を示したが、NSAIDs 投与群では、対照群と比較して 術後２ ０日目から９ ０日目まで持続的に有意な低値を示した。また、骨 切り部の骨塩量ならびに骨強度は、NSAIDs 投与群は対照群と比較 して低値を示した。【考察】犬の骨折後における NSAIDs の長期投 与は、骨折の二次性癒合で認められる外仮骨形成過程を顕著に抑制 し、骨治癒過程の遅延を生じることが示唆された。 HS! ３ ７ 犬の若齢期股関節形成不全に対して三点骨盤 骨切り術を適用した４股関節の術後関節鏡検 査所見 HS! ３ ８ 犬培養滑膜線維芽細胞に対するリポキシゲナー ゼ（LOX）阻害薬のアポトーシス誘導作用 ○須永隆 文１、奥 村 正 裕１，２、溝 部 文 彬１、田 崎竜也１、星野有希２、高木哲１，２、藤永 徹１，２ （１北海道大学・獣医学研究科診断治療学講 座獣医外科学教室、２北海道大学・獣医学部 診断治療学講座獣医外科学教室） ○山口伸也１，２、藤田幸弘１，２、原康２、織間博 光３、多川政弘２（１やまぐちペットクリニッ ク・東京都開業、２日本獣医生命科学大学・ 獣医外科学教室、３日本獣医生命科学大学・ 獣医放射線学教室） 【はじめに】小動物整形外科領域において、犬の若齢期股関節形成 不全（Canine hip dysplasia!immature type：iCHD）症例に対する 三点骨盤骨切術（Triple pelvic osteotomy：TPO） は有用な予防的 手術法として認識されている。しかしながら、適応症例に TPO を 実施した場合においても長期的には様々な程度の骨関節炎が進行す ることが指摘されている。今回、TPO により治療を受けた iCHD 症例に対して、術前・術後に関節鏡検査を行うことにより、TPO が骨関節炎の進行に及ぼす効果について検討したところ、若干の知 見を得たのでここに報告する。 【材料ならびに方法】症例：整形外 科学的および放射線学的検査の各所見に基づいて iCHD と診断され た犬３症例の計４股関節を対象とした。手 術 法：TPO は Slocum B．らの方法に準じて実施した。X 線検査：股関節伸展位腹背方向 X 線写真を使用して骨関節炎の重症度を評価した。Distraction Index （DI） ：PennHIP 検査によって求めた。関節鏡検査法：Beale B． らの方法に準じて実施し、関節組織の炎症の重症度および軟骨損傷 領域の評価方法は Holsworth IG．らの報告に準じて実施した。【成 績および考察】術前の各放射線学的検査所見と関節鏡検査所見を比 較した場合、それらは必ずしも一致しなかった。DI は術前に比較 して術後において減少傾向が認められた。関節鏡検査では、術前と 比較して術後には関節軟骨の損傷程度に変化が認められず、滑膜炎 の程度は減少傾向を示す傾向が認められた。一方、放射線学的な骨 関節炎の重症度に関しては、術後に若干の進行が認められた。今回 得られた成績より、iCHD に対する TPO は罹患股関節弛緩の程度 を改善し、骨関節炎の進行を軽減することが示唆された。 【背景】非ステロイド性抗炎症薬（NSAIDs）は、犬の関節疾患の 対症療法薬として、消炎・鎮痛作用により症状を改善させることを 目的に使用されている。しかし、痛みの原因となる滑膜炎の発現・ 消退機構におけるそれら薬剤の効果とその機序は明確に理解されて はいない。 【目的】滑膜炎に対する NSAIDs の効果を検討するため、犬培養 滑膜線維芽細胞における LOX 阻害とアポトーシス誘導作用との関 連を評価すること。 【材料と方法】臨床的に関節に異常がない犬、変形性関節症罹患犬 および炎症性関節症罹患犬から採取した滑膜組織より、コラゲナー ゼ処理により滑膜線維芽細胞を分離して単層培養した。インターロ イキン（IL）! １β 存在あるいは非存在下で、それぞれの培養細胞に LOX 阻害薬（MK８ ８ ６および AA８ ６ １） 、テポキサリン、メロキシカ ムあるいはピロキシカムを作用させ、MTT 法によりそれぞれの細 胞活性を評価した。さらに、それら薬剤によるアポトーシス誘導を ヘキスト３ ３ ３ ４ ２蛍光染色およびカスパーゼ３阻害試験により評価し た。 【結果および考察】MK８ ８ ６、AA８ ６ １、およびテポキサリンにより 有意に犬培養滑膜線維芽細胞にアポトーシスが誘導され、IL! １β 存 在下ではその効果が減弱した。また、カスパーゼ３阻害薬によりそ れぞれの薬剤によるアポトーシス誘導作用が減弱したが、テポキサ リンの場合で最もその作用が抑制された。メロキシカムおよびピロ キシカムでは犬培養滑膜線維芽細胞に対する明確なアポトーシス誘 導作用は認められなかった。これらの結果から、NSAIDs による犬 培養滑膜線維芽細胞のアポトーシス誘導作用は LOX の抑制と関連 していることが示唆された。 HS! ３ ９ HS! ４ ０ 盲導犬訓練の継続的行動観察による盲導犬適 性判断に関する一検討 ○水越美奈１（１日本獣医生命科学大学・獣医 学部獣医保健看護学科臨床部門） 【目的】盲導犬候補犬として訓練を始めた犬に対して、訓練開始直 後より定期的に訓練を観察することで、どの時点でどのような行動 がより早く適切に盲導犬としての適性に反映するのかについて明ら かにすることを目的とした。【方法】実際の盲導犬候補犬であるラ ブラドールレトリバー８頭を用い、観察開始時点を訓練開始時と一 致させた。観察は２週間ごと行ない最大２ ２週を行った。観察１とし て 歩行中に見られたストレス行動とその回数を調べ、次に、興奮 や不安の指標となる歩行中の尾の位置を観察した。【結果】盲導犬 になった犬では訓練の進行に伴いストレス反応の出現回数は減少し、 安定したが、その他の犬ではストレス反応の出現回数は安定しなかっ た。ストレス反応は延べ４ ４ ２回観察されたが、これらのうち、自身 の鼻を舐める行動は全体の４ ３％、地面の匂いを嗅ぐ行動は３ ３％を占 めた。尾の位置は盲導犬になった犬とＰＲ犬では比較的早期に尾の 位置が安定するが、その他の犬では最後まで不安定であった。【考 察】尾の位置やストレス反応の回数は、盲導犬になった犬とそうで ない犬の間に差異があり、それらの相違はかなり早期から見られた。 鼻舐め行動や地面の匂い嗅ぎ行動などを犬ではカーミングシグナル と呼ぶ。これらの行動は、新奇刺激に対して現れるストレス反応の ひとつであり、また刺激に対する適応行動である。つまり、盲導犬 となる犬は、そうでない犬よりも新奇刺激に対する適応が早いと考 えることができるのかもしれない。今回、各々の相違が観察された ので、訓練早期における適性スクリーニングテスト作成に向けて、 今後観察頭数を増やしていく予定である。 酪農学園大学付属動物病院行動治療科を受診 した犬４ ６ ３例の分析 ○内田佳子１、竹本千佳子１、橋本佳奈１、森 元絢香１（１酪農学園大学・伴侶動物医療部門） １ ９ ９ ７年より現在までの約１ ０年間に酪農学園大学付属動物病院行動治 療科を受診した犬の質問票を精査し十分な情報が得られた４ ６ ３例を 用いて、当科における受診犬を総括した。 これらは雄３ ０ ２（去勢済み１ ３ １） ・雌１ ３ ８（避妊済み４ ９） ・不明２ ３で、 導入年齢は０週から８歳（２． ８±５． ２ ６か月）齢、犬種は雑種５ ６・柴 犬５ ２・Ｍダックス４ ６・Ｗコーギー２ ８・ラブラドール２ ５・シーズー２ ０ などであった。体重は１． ０から７ ０． ０㎏（１ １． ６±９． ０ ４）で、入手先は ペットショップ２ ４ ９・ブリーダー９ ６・知人４ ９などであった。飼育場 所は一軒家３ ３ １・集合住宅１ ２ １・不明１ ０で、室内飼育３ ８ ３・屋外飼育 ５ ８・両方１ ６・不明６であった。飼い主が初めて問題行動を認識した 年齢は２か月から１ ３歳（１． ２±１． ７ ８歳）齢、問題行動が深刻さを増 し何らかの対処が必要だと認識した年齢は２か月から１ ３歳（１． ６± ２． １ ０歳）齢、受診時年齢は２か月から１ ７歳（２． ９±２． ６ ５歳）齢であっ た。飼い主の訴えは家族への攻撃が２ ４ ０、吠えが１ ２ ８、他人への攻撃 が５ ３、留守番ができない３ ０などであった。攻撃の程度として出血す る咬み方をしていた犬は２ ３ ５で、病院での加療を要する攻撃をした 犬は１ ０ １であった。実際の診断名は、飼い主に対する攻撃（恐怖・ 所有欲・優位性・母性等）３ ５ ５、他人に対する攻撃（恐怖・所有欲 等）７ ２、他犬に対する攻撃（恐怖・優位性・テリトリー等）４ ４、吠 え（テリトリー、興奮、恐怖、犬種特性等）１ ２ ８、分離不安３ ５、恐 怖症（花火、雷、車）２ ２、強迫障害（尾追い、舐性肉芽腫等）２ ２な どであった（重複あり） 。 以上のことから、飼い主が問題行動に気づいてから受診するまで には行動が定着するのに十分な期間経過していること、ヒトに危害 を加える攻撃行動が多いことが示され、行動治療に対する啓発の重 要性が示唆された。 HS! ４ １ 犬アトピー性皮膚炎における感作アレルゲン の秋季全国調査 HS! ４ ２ イヌのハウスダストマイトアレルギーにおけ る DNA ワクチン療法の検討について ○津久井 利 広１、阪 口 雅 弘２、高 井 敏 朗３、奥 村康３、小川秀興３、大橋秀一１、増田健一４、 大野耕一５、辻本元５、岩淵成紘５（１ゼノアッ ク日本全薬工業・ALS 研、２麻布大学・微生 物、３順天堂大学・アトピー研、４理化学研究 所・免疫・アレルギー、５東京 大 学・獣 医 内 科学教室） ○荒井延明１、垰田高広２、安田隼也１、安田 英巳２、原康３、多川政弘３（１スペクトラム・ ラボ・ジャパン㈱・テクニカルサービス、 ２ 安田獣医科医院・目黒区、３日本獣医生命科 学大学・獣医外科学教室） 【背景】犬のアトピー性皮膚炎（Atopic Dermatitis：AD）の原因・ 悪化因子として環境因子、食物、マラセチア、ブドウ球菌などが挙 げられる。個体ごとに感作アレルゲンを把握するために血中特異 IgE 抗体の測定は臨床上有用とされているが、その結果の全国規模の調 査報告は見あたらない。【目的】２ ０ ０ ６年９月から２ ０ ０ ６年１ １月までの 秋季３ヵ月間に、日本全国の動物病院にて AD と診断され、皮膚 臨床症状が評価された犬５ ８ ０例（０． ２∼１ ６歳）を対象とした特異ＩgE 抗体測定結果から、その値や陽性項目数と犬種、年齢、および症状 などの関連性について検討を行なうことを目的とした。【材料と方 法】ELISA 法を基本原理とした US スペクトラム社の SPOT TEST を用いて９ ２アレルゲン（環境抗原６ ２種および食物抗原３ ０種）に対す る血清中特異 IgE 抗体値を測定した。市販の統計処理ソフトを用 いて統計解析を行ない、危険率５％未満を有意差ありとした。 【結 果】最も特異 IgE 抗体陽性率が高かった環境アレルゲンはハウス ダストマイトで、以下ヨモギ、セイヨウトネリコ、ホルモデンドラ ム、ヘラオオバコの順で高値を示した。食物アレルゲンに関しては 米・玄米、鶏肉・七面鳥、アヒル／カモで高値を示した。発症頻度 が上位の犬種は順に、ワイヤー・フォックス・テリア、ウエスト・ ハイランド・ホワイト・テリア、柴、シーズー、フレンチ・ブルドッ クであった。陽性項目数との関連性においてブドウ球菌、タバコ、 マラセチアの順に有意な差がみとめられた。【考察】感作アレルゲ ンの全国規模調査により、高率に陽性となるアレルゲンや犬種差の 動向を把握できたことは疫学上有意義であった。特にブドウ球菌、 タバコ、マラセチアは、抗原感作数を増強させる因子であることが 示唆された。継続的調査により、季節差を加えた動向を続報とする 計画である。 【目的】イヌにおけるアレルギー性疾患は近年増加傾向にあり、原 因アレルゲンのなかでもハウスダストマイトに対する IgE 反応性 は高く、安全性の高い免疫療法の開発は急務とされる。我々は、ハ ウスダストマイト（Dermatophagoides farinae）主要アレルゲン（Der f ２）を用いた DNA ワクチン療法の有効性の評価をイヌを用い て実施した。【材料と方法】DNA ワクチン：哺乳類細胞発現ベク ターに Der f ２を挿入したものを構築し、細胞での Der f ２タ ンパク質の発現をウエスタンブロットにて確認した。イヌ：ビーグ 、 ル（約６ヶ月齢）１ ２頭を使用した。群わけ：０． ５mg／dog 群（４頭） １． ５mg／dog 群（４頭）およびコントロール（生理食塩水）群（４ 頭）とした。ワクチン接種：１週間隔で５回筋注接種した。Der f ２人工感作：５回目のワクチン接種から５週間後に、組換え Der f ２タンパク質をアラムアジュバントとともに２週間隔で３回皮 下投与した。IgG および IgE の検出：血清中の Der f ２特異的 IgG および IgE の検出は、抗イヌ IgG 抗体（BETHYL 社）および組換 えイヌ IgE レセプター α 鎖を用いて実施した。【結果および考察】 ５mg／dog 群のいずれにおいても、Der f ０． ５mg／dog 群および１． ２特異的 IgG 値の上昇が確認された。さらに、組換え Der f ２タ ンパク質を用いた人工感作後の Der f ２特異的 IgE 値の測定の結 果、IgE の産生が抑制されることも確認された。また、血液学的お よび血液生化学的検査においても安全性が認められたことから、DNA ワクチンを用いたアレルゲン特異的免疫療法は有効性が高く、安全 性も高いと期待される。 HS! ４ ３ HS! ４ ４ 犬の皮膚の創傷治癒におけるシクオロキシゲ ナーゼ! ２の発現 ○濱本岳志１、矢吹映１、松元光春１、藤木誠２、 三角一浩２、鈴木秀作１（１鹿児島大・獣医解 剖、２鹿児島大・獣医外科） シクロオキシゲナーゼ! ２ （COX! ２） は炎症時に誘導される PG 合 成酵素であり、近年、創傷の治癒に関与することが指摘されている が、犬の皮膚では報告がみられない。本研究では、犬の皮膚の創傷 治癒における COX! ２の発現を検索した。【材料と方法】実験は本学 動物実験委員会の承認を得て行った。実験には３ ３∼４ ０ヶ月齢のビー グル５頭 （雄２、雌３） を用いた。麻酔下で背部の皮膚を３㎜ト レパンを用いて６ヶ所生検した後、ナイロン糸で一針縫合した。そ の 後 １， ３， ５， ７， １ ０お よ び１ ４日 目 （D１∼D１ ４） に 縫 合部分を中心とする皮膚を８㎜トレパンで生検し、ホルマリン固定 した。常法に従いパラフィン包埋し、HE 染色および COX! ２に対 する免疫染色を行った。皮膚の炎症および線維芽細胞様細胞の増殖 の程度は半定量的に評価した。また、表皮の COX! ２陽性細胞率を 定量した。【結果と考察】炎症スコアは、治癒の進行にともない有 意に低下し、線維芽細胞様細胞の増殖スコアは有意に上昇した。こ の２つのスコアの間には高い負の相関が認められた。COX! ２陽性 反応は D１∼D７で浸潤した好中球のみならず創傷部位近傍の表皮 に認められた。表皮の COX! ２陽性細胞率を計測したところ D１∼ D７の群間に有意差は認められず、炎症および線維芽細胞様細胞の 増殖スコアとの間に強い相関は認められなかった。以上の結果から、 犬の皮膚では創傷の治癒過程で表皮に COX! ２が発現し、それは炎 症や線維芽細胞様細胞の増殖とは異なるメカニズムで創傷治癒に関 与すると考えられた。 表皮過形成に伴う犬ケラチノサイト分化関連 蛋白 Kdap 発現の変化 ○西村雄 大１、篠 崎 奈 穂１、八 木 原 紘 子１、田 村恭一１、礒谷真弓１、高橋公正２、中垣和英３、 盆子原誠１、小野憲一郎４、鷲巣月美１（１日本 獣医生 命 科 学 大 学・獣 医 臨 床 病 理 学 教 室、 ２ 日本獣医生命科学大学・獣医病理学教室、 ３ 日本獣医生命科学大学・獣医野生動物学教 室、４東京大学大学院・獣医臨床病理学教室） 【背景と目的】ケラチノサイト分化関連蛋白（Kdap）は角化重層 扁平上皮特異的蛋白質で、これまでの解析から、表皮の分化に関与 する液性因子であること分かっている。ケラチノサイトは慢性的な 炎症や持続性の物理的刺激を受けると分化過程に異常を来たし、そ の結果表皮の過形成が見られるようになる。今回、ケラチノサイト の分化異常における Kdap の動態を検討するため、表皮の著明な過 形成がみられた犬の皮膚組織における Kdap の発現の変化を調べた。 【材料と方法】犬 Kdap 遺伝子を２ ９ ３T 細胞に導入し、リコンビナ ント Kdap を作製した。これを抗原としてマウスを免疫し、抗犬 Kdap モノクローナル抗体を作成した。病理組織検査で著しい表皮の過形 成がみられた感染性およびアレルギー性皮膚炎の皮膚組織を用いて、 抗犬 Kdap 抗体による免疫組織染色を行った。【結果および考察】 正常な皮膚において、Kdap は主に表皮顆粒層のケラチノサイトで 発現が認められた。一方、感染性およびアレルギー性皮膚炎では、 いずれも過形成した表皮有棘層および顆粒層のケラチノサイトで発 現が見られた。このことから、Kdap は、表皮の分化異常に関連し て発現が増加すると考えられた。 HS! ４ ５ 胸 部 X 線 像 に て diffuse patchy infiltrates を示した猫４例 alveolar HS! ４ ６ ○城下幸仁１、松田岳人２、柳田洋介２、佐藤 陽子２（１相模が丘動物病院・呼吸器科、２相 模が丘動物病院・一般診療科） 犬の脾臓腫瘤における超音波造影法の有用性 の検討 ○久楽賢治１、浅野和之１、寺町さちほ１、菅 野信之１、関真美子１、手島健次１、枝村一弥１、 田中茂男１（１日本大学・獣医外科学研究室） 【背景】Diffuse patchy alveolar infiltrates（DPAI）は猫特有の 胸部異常陰影だがその意義に一定の見解がない。【目的】DPAI を 示した猫の診断と結果、および臨床所見を記述する。【対象と方法】 ２ ０ ０ ２年１ １月から２ ０ ０ ７年１月まで胸部 X 線像にて DPAI を示し気管 支鏡検査で確定診断された猫の診療記録を後向きに調べた。【結果】 対象は４例（３． １ ! １ ０． ５歳；F２／M２；アメリカンショートヘアー ２／雑種２） 。診断は下気道感染症２例；無菌性急性肺炎１例；特発 性間質性肺炎１例であった。結果は完治１例；部分治癒１例；診断 後２日以内に死亡２例であった。死亡例は下気道感染症の２例で気 道内吸引が誘因となった。症状は呼吸困難４例；浅速呼吸３例；発 熱２例；吸気努力１例；急性発咳１例；慢性発咳１例；流涎１例、 随伴疾患は肥満３例；削痩１例；唾液腺炎１例、血液検査は白血球 数増加３例；高血糖３例、動脈血ガス分析は低酸素血症４例；高炭 酸ガス血症１例；過換気１例、他 X 線像は気管内に扁平塊病変１ 例；心陰影拡大１例、気管支鏡検査の肉眼所見は中枢気道内に粘稠 分泌物２例；異常なし２例、気管支肺胞洗浄液（BALF）解析は好 中球数増加４例（６ ０ ! ９ ８％） ；総細胞数増加３例（＞５ ０ ０ ０， ５ ０ ４ ０， ４ １ ３／ mm３）；培養陽性２例（Pasteurella multocida＞１． ０×１ ０５， Pasteurella ２ spp．１． ０∼９． ０×１ ０CFU／ml）であった。初期に全例で酸素室が利 用され状態改善１例；やや改善２例；維持１例であった。診断後の 治療は気道内吸引２例；吸入療法１例；内科療法２例であった。治 癒例では診断後６または３日目に DPAI が消失した。 【考察】DPAI に対し下気道感染症は予後注意の鑑別診断である。全例で呼吸困難 症状、低酸素血症、BALF に好中球増加を認めた。 【背景】医学領域において、超音波造影法は肝臓や脾臓を含む腹部 臓器の腫瘤病変の診断に有用であると報告されている。【目的】今 回、健常犬および脾臓腫瘤犬に用いて超音波造影法を施行し、その 時相の評価と臨床的有用性について検討した。【材料および方法】 実験１：脾臓の超音波造影法における血管相の検討のために、健常 犬９頭を用いた。超音波造影剤投与後１分間、脾動脈内に設置した 関心領域（ROI） 内の輝度を記録した。さらに、健常犬１ ０頭を用いて、 超音波造影剤投与後１分毎に脾実質、門脈、大動脈内に設置した ROI 内の輝度を記録し、実質相を検討した。実験２：本学動物病院外科 に来院した脾臓腫瘤犬１ ０頭（血管肉腫３頭、血腫３頭、結節性過形 成４頭） に対して超音波造影法を実施し、得られた染影画像から特 徴的な所見を検討した。【結果】実験１：脾動脈では、超音波造影 剤の出現時間は９． ２ ６±２． ３ ８秒、最大輝度到達時間は２ ７． ２ ６±４． ０ ５秒 であった。一方、脾実質は投与後１分から高輝度を示し、その後に 減衰が見られなかったのに対し、門脈および大動脈の輝度は有意に 減衰し、投与後５分ではほとんど消失していた。実験２：結節性過 形成は、血管相では腫瘤の濃染を認め、実質相では腫瘤の染影は部 分的になったのに対し、血管肉腫および血腫では血管相、実質相と ともに明らかな染影度が得られない傾向を示した。【考察】犬の脾 臓の超音波造影法では、血管相は投与後約１ ０秒から、実質相は投与 後５分から評価することが最適であると示唆された。それを元に、 犬の脾臓腫瘤の自然発生例に対して超音波造影法を実施した結果、 結節性過形成では特徴的な所見が得られたものの、血管肉腫と血腫 の鑑別は困難であった。 HS! ４ ７ HS! ４ ８ 犬の膵疾患における超音波ヒストグラム解析 の有用性に関する基礎的研究 ○中村健介１、森下啓太郎１、滝口満喜２（１酪 農学園大学・附属動物病院、２酪農学園大学 獣医学部・伴侶動物医療部門） 【目的】非侵襲的な超音波検査は膵臓において主要な画像診断法で あるが、装置や検者の技量に依るところが大きく客観性に欠ける短 所を有する。超音波ヒストグラム解析は組織性状の評価に有用で、 医学領域では膵疾患や肝疾患の診断に応用されている。そこで本研 究では、超音波による膵臓の定量的評価法を確立する目的で、正常 犬および膵疾患が疑われた症例犬における膵臓の超音波ヒストグラ ム解析を行い、超音波ヒストグラム解析の臨床応用の可能性につい て基礎的検討を行った。【方法】リニア型プローブ（１ ３MHz）を用 いて右腎頭極部における膵右葉の横断像を描出し、ヒストグラム解 析を行って平均輝度（MD） 、標準偏差（SD）ならびに膵右葉の横 断面の面積を算出した。【結果】正常犬（n＝１０）における膵右葉 の超音波画像は均一で、周囲脂肪組織のエコー源性とほぼ等エコー 性であった。一方、症例犬（n＝４）においては実質の腫大、およ び内部エコーの不均一性が認められた。MD 値の平均値±標準偏差 は両群間で有意差は認められなかったが、SD 値および面積の平均 値±標準偏差においては、症例犬では正常犬よりも有意に高値を示 し た（P ＜０． ０ ５， P ＜０． ０ １） 。【考 察】本 研 究 の 結 果 か ら SD 値 は MD 値では捉えきれない膵臓組織性状の変化をより鋭敏に反映する 可能性が考えられ、SD 値の測定は膵疾患の診断に有用である可能 性が示唆された。また、面積の測定は腫大性の膵疾患の診断におい て有用であることが示された。今後はヒストグラム解析における明 確で統一された条件・方法を確立するとともに、多くの臨床例での 情報を集積することで、犬の膵疾患診断における超音波ヒストグラ ム解析の有用性を明らかにする必要がある。 ヨード濃度の異なる造影剤製剤の血管造影 CT における造影効果の比較 ○経田涼１、山田一孝１、岸本海織１、清水純 一郎１（１帯畜大・臨床獣医学講座） 【背景】ヨード造影剤のＸ線吸収率はヨード濃度に比例すると考え られているが、生体において造影剤の浸透圧、粘度および分子量な ど物性が異なる場合、ヨード濃度の高い製剤の造影効果が必ずしも 高くなるわけではない。本研究ではヨード濃度や物性の異なる３つ の造影剤製剤を同じヨード投与量で使用して血管造影 CT を行い、 その造影効果を大動脈時間濃度曲線を用いて比較した。 【材料および方法】臨床上健康なビーグル犬４頭（クロスオーバー） 、オムニパー を用い、造影剤はオムニパーク３ ５ ０（３ ５ ０mgI／ml 製剤） ２ ０（３ ２ ０mgI／ml 製剤） ク１ ８ ０（１ ８ ０mgI／ml 製剤）およびビジパーク３ ３ml／秒で投与し、投与 を全て６ ０ ０mgI／kg で使用した。造影剤は１． 開始と同時に５秒間隔で７ ０秒間のダイナミックスキャンを行い、腹 大動脈に関心領域を設定し時間濃度曲線を作成して評価した。 【結果および考察】大動脈時間濃度曲線において最大 CT 値はビジ パーク３ ２ ０、オムニパーク３ ５ ０、オムニパーク１ ８ ０の順、Area Under Curve はビジパーク３ ２ ０、オムニパーク１ ８ ０、オムニパーク３ ５ ０の順 に高値であった。以上のことから、造影剤の造影効果は必ずしもヨー ド濃度に比例するものではなく、造影剤の物性や投与条件によって も左右されることが示唆された。 HS! ４ ９ オムニパーク１８０、オムニパーク２４０、イソビ スト２ ４０を用いた脊髄造影および脊髄造影 CT の造影効果の比較 HS! ５ ０ Perfusion CT による犬の膵血流測定法の検 討 ○岸本海織１，２、山田一孝１，２、方波見奈々１、 辻 喜 久３、清 水 純 一 郎１，２、森 下 康 之５、岩 佐 亜 紀 子５、岩 崎 利 郎２，４、三 宅 陽 一１，２（１帯 畜 大・臨床獣医学講座、２岐阜大・臨床連合講 座、３京大・医・消化器内科、４農工大・農・ 獣医内科、５東芝メディカルシステムズ（株） ・ 東京本社） ○清水純一郎１，２、山田一孝１，２、岸本海織１，２、 岩崎利郎２，３、三宅陽一１，２（１帯畜大・臨床獣 医学講座、２岐阜大・臨床連合講座、３農工大・ 農・獣医内科） 【目的】脊髄造影の承認が得られている造影剤製剤はイソビストと オムニパークであるが、造影剤製剤により濃度と粘稠度が異なるた め造影効果も異なると考える。そこで各造影剤製剤におけるＸ線お よび CT での造影効果を比較した。 【材料および方法】ビーグル犬３頭を用い、３種類の造影剤製剤 （オムニパーク１ ８ ０、オムニパーク２ ４ ０、イソビスト２ ４ ０）による脊 ! ６間穿刺）をそれぞれ３頭のクロスオーバー 髄造影（０． ３ml／kg、L５ にて行った。脊髄造影直後にＸ線撮影、造影後５、１ ５、３ ０、４ ５およ び６ ０分に CT 撮像し、６ ５分後に再度Ｘ線撮影を行った。各造影剤製 剤の造影効果は CT 値として数値化し、Ｘ線像は獣医師３名による ４段階評価により数値化した。 【成績および考察】CT 値の評価：造影５分後では、尾側は粘稠度 の高いイソビスト２ ４ ０（粘稠度 ３． ９）が最も造影効果が高く、頭側 は粘稠度の低いオムニパーク１ ８ ０（粘稠度 ２． ０）が最も造影効果が 高かった。つまり粘稠度が低い造影剤製剤ほど拡散しやすいと考え られた。造影１ ５分以降ではオムニパーク１ ８ ０の造影効果は全体的に 低下した。一方オムニパーク２ ４ ０（粘稠度 ３． ３）およびイソビスト ２ ４ ０は尾側で造影効果が低下したが、頭側では逆に上昇した。これ は造影直後には十分拡散しなかった造影剤製剤が時間経過とともに 頭側へ拡散したためと考えられた。Ｘ線の評価：注入直後はいずれ の造影剤製剤も十分な造影効果を示した。またＸ線像においてもイ ソビスト２ ４ ０はオムニパーク１ ８ ０およびオムニパーク２ ４ ０より尾側で 強く造影効果を示した。以上、各造影剤製剤の造影効果には製剤の 粘稠度が影響すると考えられた。 【背景】犬の壊死性膵炎はしばしば致死的となるため，急性膵炎に おける膵実質の壊死を早期に診断することが重要である．膵実質の 虚血が壊死を引き起こすことが報告されていることから，膵実質の 血流の変化を早期に把握できれば，膵実質壊死への発展を予見でき る可能性がある．そこで本研究では，ヒトで脳の虚血部位の判定に 用いられる Perfusion CT 法を利用して，犬の膵血流の測定を試み た． 【方法】動物はビーグル犬（n＝１ ０）を使用した．造影剤はイオヘ ，３ ０秒間の dynamic キソールを使用し（２ ０ ０ mgI／kg， ２秒間注入） 撮像を行った．データの解析には CT 装置に付属の脳血流解析ソフ トウェア（CBP study， 東芝メディカルシステムズ）を使用し， box!MTF 法および maximum slope 法により膵実質の毛細血管系 ０ ０ ml tissue／min）を計測した． における膵血流（ml／１ 【結果】脳血流解析ソフトウェア上で算出された box!MTF 法に ０ ０ ml tissue／min,maximum よる膵血流の平均値は５ ２． ６±２ ４． ３ ml／１ ０ ０ ml tissue／min であっ slope 法による平均値は１ ５ ２． ７±１ ０ ３． ０ ml／１ た． 【考察】box!MTF 法と maximum slope 法で測定値に差が見られ た．また使用した解析ソフトウェアがヒトの脳血流測定用のもので あることから，算出された数値の定量性を確保するためには，実測 した膵血流との比較検討が必要である．しかしながら今回の研究か ら，Perfusion CT を用いることで膵血流を測定できる可能性が示 唆された．また，今回は正常例における検討であるが，急性膵炎例 でのデータを蓄積することで，臨床応用も可能であると考える． HS! ５ １ HS! ５ ２ マルチスライス CT を用いた犬の体表面積計 測 ○三好雅史１、石川濶１、宮原和郎１（１帯広畜 産大学・附属家畜病院） 【背景】多くの抗癌剤の投与量は体重（BW）ではなく体表面積 （BSA）当たりで計算され、動物の BSA は Meeh（１ ８ ７ ９）の式、 BSA（cm２）＝k×BW（g）２／３によって推定されている。k は体形 によって変化する定数であり、犬では k＝１０． １が一般的に用いられ ているが、この値は６頭の子犬から得られたものであり、全ての犬 に適用するのは不適切かもしれない。従来の BSA 計測法は多大な 労力と時間を要し、精度も低いと考えられている。マルチスライス CT（MSCT）によって物体の表面積を精度良く計測可能であるが、 MSCT を用いて犬の BSA を計測した報告は見当たらない。【目的】 MSCT を用いて体形の異なる２犬種の BSA を計測し、k＝１０． １を 用いた Meeh の式による BSA 推定値と比較検討すると共に、k の 品種差について検討する。 【材料と方法】ビーグル成犬７頭とダッ クスフンド成犬６頭を全身麻酔下にて４列 MSCT で撮像し、得ら れたボリュームデータから３D 画像解析ソフト（TRI／３D!VOL、 RATOC）を用いて BSA を計測した。その値を BW と共に Meeh の式に代入して k を求めた。【結果】MSCT を用いることにより、 犬の BSA を容易に計測することが可能であった。両犬種において、 MSCT による BSA 計測値と k＝１ ０． １とした Meeh の式による BSA 推定値の間には有意差が認めら れ た。k は ビ ー グ ル で１ １． ０±０． ２ （mean±SD）、ダックスフンドで１ ０． ５±０． ３であり、両犬種間に有 意差が認められた。【考察】MSCT は新たな BSA 計測法として有 ０． １×BW（g）２／３ならびにこ 用であると考えられ、BSA（cm２）＝１ の式に基づく BSA 換算表について、犬種による体形の違いを考慮 する必要性が示唆された。 癌免疫治療に向けた独立分泌型イヌインター ロイキン‐１ ８遺伝子の作製 ○杉浦喜久弥１、Wijewardana Viskam１、藤 本真理子１、赤澤隆２、八幡麻奈１、鳩谷晋吾１、 稲葉俊夫１（１大阪府立大学・先端病態解析学、 ２ 大阪府成人病センター・分子遺伝学部門） 【背景と目的】インターロイキン（IL）! １ ８は、Ｔ細胞からのイン ターフェロンガンマ（IFN!γ）の産生を誘導し、抗腫瘍免疫効果を 著しく増強するサイトカインである。しかし、IL! １ ８遺伝子は小胞 体内にタンパクを送り込むためのシグナルシークエンス（SS）を 欠くため、同遺伝子を単独で哺乳類細胞に導入しても、細胞からサ イトカインタンパクを分泌させることができず、遺伝子導入による 癌治療への応用が困難となっている。そこで、本研究では、他のサ イトカイン遺伝子の SS を IL! １ ８遺伝子に連結することによって、 単独遺伝子導入でも IL! １ ８サイトカインの分泌が可能な独立分泌型 IL! １ ８遺伝子を作製し、その特性を解析した。【材料と方法】既報の DNA 配列を基にプライマーを設計し、イヌ末梢血単核球から得た cDNA から、IL! １ ８ cDNA の成熟タンパクコード配列と IL! １ ２ p ４ ０ cDNA の全塩基配列を PCR によって増幅し、クローニングを 行った後、塩基配列を確認した。クローニングした IL! １ ２ p４ ０ cDNA を myc タグ付きの哺乳類発現ベクター（pcDNA３． １）に組 み込んだ後、SS 下流の塩基配列を切断して除き、そこに IL! １ ８の 成熟タンパクをコードする配列を組み入れることにより、SS 連結 IL ! １ ８ cDNA を含む発現ベクター（SS!IL! １ ８ !pcDNA）を作製した。 【結果と考察】SS!IL! １ ８ !pcDNA を導入した CHO 細胞において、 myc タグタンパクの発現を蛍光抗体法によって確認できた。また、 この CHO 細胞の培養上清をイヌ末梢血 T 細胞に作用させたところ、 IFN!γ の産生が有意に増加した。これらの結果から、SS を連結し たイヌ IL! １ ８遺伝子は、単独でも機能的タンパクを細胞から分泌で きることを証明できた。この遺伝子を樹状細胞や癌周囲組織に導入 することによって、癌免疫が増強できると思われる。 HS! ５ ３ 犬のテロメレース遺伝子プロモーター領域の クローニングと活性解析 HS! ５ ４ ○小澤世里香１、今村智子１、岡元理恵１、杉 林加奈１、谷戸三紗１、安田賢１、柿市徳英１、 田中良和１（１日本獣医生命科学大学・獣医衛 生学教室） 猫 MHC クラスⅠ （FLA!A，!B） 遺伝子のクロー ニングとタイピング ○佐野順一１、藤原哲１、島津美樹１、斎藤敏 樹１（１財団法人 日本生物科学研究所・実験 動物部） 腫瘍の治療においては遺伝子治療の有用性が期待されている．遺伝 子治療は実験的には高い効果が報告されているものもあるが，臨床 応用に至るには解決すべき課題が残されている．正常細胞に比べ腫 瘍細胞で TERT のプロモーター活性が高いことを利用し，本来な らば TERT の遺伝子が存在する領域に細胞の自殺遺伝子を組み込 んで癌細胞に導入することで，癌細胞を自殺に導くことができない かと考えた．TERT のプロモーター活性を利用することで，TERT のプローモーター活性が抑制されている正常細胞には影響を与えず， 癌細胞で特異的に自殺遺伝子を発現させることができると考えられ る．本実験ではその第一段階として犬の TERT プロモーター領域 をクローニングし，プロモーターの最小活性領域の決定と，癌細胞 と正常細胞との TERT のプロモーター活性の違いの観察を試みた． 初めに犬の TERT プロモーター領域のクローニングを行った．次 に転写活性に最も重要なプロモーター領域を決定するために，いろ いろな細胞株用いてプロモーター領域の長さが異なる６種類の変異 体を PCR 法により作成し細胞へ導入後，デュアルルシフェラーゼ アッセイにより TERT プロモーター活性を測定した．犬の TERT の転写活性の測定の結果，−２ ７ ３∼−８ ４の領域がプロモーターの活 性化に，−５ ７ ３∼−２ ７ ４の領域にリプレッサー領域が存在すると考え られた．また，正常線維芽細胞では活性が認められなかった．本実 験の結果は癌の遺伝子治療において癌細胞を特異的に抑制するため に TERT のプロモーターが有用であることを示していた．今後の 課題として，犬の TERT プロモーターを有するアポトーシス誘導 遺伝子をクローニングし，癌細胞を特異的に細胞死に導くか検討し ていく予定である． 【背景・目的】HLA（Human Leukocyte Antigen）は高度な遺伝子 多型性を有し、ヒト免疫機構に重要な役割を果たしており、HLA の遺伝子多型の検索は骨髄移植・臓器移植の適合性の確認や疾患感 受性の研究に欠かすことのできないものとなっている。猫における MHC は FLA と呼ばれるが、まだ十分な検索が行われておらず、 特にクラスⅠの報告は少ない。そこで、従来報告の少ない FLA ク ラスⅠ遺伝子（FLA!A， !B） の塩基配列および多型を明らかにし、 臓器移植や疾患感受性の研究に役立てることを目的とした。【材料 と方法】当研究所にて確立した猫のうち、１ ０頭の末梢血より単核細 胞を採取し、mRNA を抽出後、cDNA を合成し、ヒトおよび猫 MHC の塩基配列を参考にして設計したプライマーを用いてクローニング を行い、その塩基配列を解析した。【結果・考察】FLA!A 遺伝子 に関しては１ １個、FLA!B 遺伝子に関しては３個の多型を検出した。 FLA!A， !B 遺伝子ともに３ ６ ２個のアミノ酸をコードし、その構 造は塩基配列から Leader 領域、α１ !domain 領域、α２ !domain 領域、 α３ !domain 領域、膜結合領域、細胞内領域に分類された。塩基配 列を解析した結果、遺伝子多型は FLA!A， !B 遺伝子ともに各 領域に渡り広く存在することが判明した。我々が得たクローンは Yuhki らが報告したクローンとは異なっており、猫の品種や地域に より異なった多型が存在することが示唆された。 HS! ５ ５ HS! ５ ６ 性差が犬における LPS 刺激によるサイトカ イン産生へ与える影響 犬末梢血単球由来樹状細胞の効率的誘導条件 の検討 ○奈須俊介１、岡野昇三１、藤塚淳史１、朴永 泰１、佐野忠士１、高瀬勝晤２（１北里大学・小 動物第３外科、２北里大学・小動物第１外科） ○吉田昌充１、斉藤康貴１、佐藤隆治１、西山 美衣１、田村恭一１、礒谷真弓１、八木原紘子１、 盆子原誠１、小野憲一郎２、鷲巣月美１（１日本 獣医生命科学大学・獣医臨床病理学教室、 ２ 東京大学大学院・獣医臨床病理学教室） 【背景】感染、侵襲に対する免疫反応およびサイトカイン産生には、 性差があることが報告されており、一般に女性は男性より免疫応答 が強いと考えられている。しかし、犬における報告は少なく十分に は解明されていない。そこで、性差が犬におけるサイトカイン産生 にどのような影響を与えているのかを明らかにする目的で、検討１ では、培養全血における LPS 刺激による TNF!α および IL! １ ０産生 量を測定した。また、検討２では、LPS 静脈内投与による末梢血 単核球（PBMC） における TNF!α および IL! １ ０遺伝子発現量を測定 した。【材料と方法】検討１では、臨床上 健 康 な ビ ー グ ル 犬８頭 （雄４頭、雌４頭）を用いた。全血を RPMI! １ ６ ４ ０で２倍希釈し、LPS を添加して３ ７℃、５％CO２下で２ ４時間培養後に上清を （１ ０ ０ pg／ml） 回収した。TNF!α および IL! １ ０産生量は、ELISA 法にて測定した。 検討２では、臨床上健康なビーグル犬６頭（雄３頭、雌３頭）を用 いた。両群に LPS ５ ng／kg を静脈内投与し、LPS 投与前、投 与後３、６時間に採血した。TNF!α および IL! １ ０遺伝子発現量は、 比重遠心法にて PBMC を分離し、Real!time PCR にて定量した。 【結果と考察】培養全血における TNF!α および IL! １ ０産生量は、 雄群が雌群に比較して約２倍高値を示した。また、TNF!α および IL! １ ０遺伝子発現量は、雄群では LPS 投与前に比べ３時間、６時間 とも増加傾向にあったのに対して、雌群では LPS 投与前に対し３ 時間で抑制される傾向を示した。以上より、犬における LPS 刺激 に対するサイトカイン産生には性差があることが示唆された。 【背景】樹状細胞（DC）はきわめて強力な抗原提示能を持つこと から、犬の癌免疫治療への応用が期待されている。これまで犬の骨 髄からの DC の分化誘導法を確立し、in vivo で効率的に免疫反応 を誘導することを示してきた。骨髄から DC を誘導する場合、採取 可能な細胞数は４ ! ５ x １ ０７／head と多いが、骨髄の採取は動物の 負担が大きい。一方、末梢血単球由来 DC の分化誘導法は報告され ているが、従来の方法では得られる DC の数が少なく、より効率的 な誘導法を確立する必要がある。そこで今回、末梢血単球由来 DC の誘導条件について検討した。 【材料と方法】健常犬から血液を２ ０ ml 採取し、比重１． ０ ７ ７あるいは１． １ １ ９の Ficoll 液を用いて単核細胞 を回収した。次いで、単核細胞をプレートで２時間あるいは２ ４時間 培養し、プレートに付着した細胞のみを犬組み換え GM!CSF およ び IL! ４存在下で７日間培養した。得られた細胞を、フローサイト メトリーにより表面抗原の解析を行った。【結果および考察】従来 報告されていた比重１． ０ ７ ７の Ficoll 液を用いて２時間培養し付着細 胞を得る方法では、培養後の CD１ １c 陽性細胞は５ ０ ％以下であり、 １ １ ９ 得られた DC の数は１ ! ２ x １ ０６個であった。これに対し、比重１． の Ficoll 液を用いて２ ４時間培養し付着細胞を得る方法では、３ ! ４ x １c 陽性細胞は８ ０ ％以上と高率に認 １ ０６個の DC が得られ、CD１ められた。以上のことから、今回用いた方法では、従来の方法に比 べ高い純度で、かつより多くの DC が回収できることが明らかとな り、今後、骨髄由来 DC と共に癌免疫治療に利用可能と考えられた。 HS! ５ ７ 犬の自己活性化型カスパーゼ３の作製とその 活性の検討 ○染谷麻美１、澁谷祐希１、鈴木康之１、木脇 彰人１、礒谷真弓１、八木原紘子１、田村恭一１、 盆子原誠１、小野憲一郎２、鷲巣月美１（１日本 獣医生命科学大学・獣医臨床病理学教室、 ２ 東京大学大学院・獣医臨床病理学教室） 【背景と目的】カスパーゼ３はアポトーシスの最終段階を担うため、 腫瘍細胞に導入する自殺遺伝子として有用と考えられる。しかしな がら、野生型のカスパーゼ３は不活性であり、活性化には上位カス パーゼの作用を受ける必要がある。カスパーゼ３遺伝子には２つの サブユニット（Large subunit；LS および Small subunit；SS） をコードする領域が含まれている。近年、N 末端側の LS と C 末端 側の SS をコードする塩基配列を逆に組み換えることで、カスパー ゼ３は自己活性が可能な構造になることが報告された。今回、犬カ スパーゼ３遺伝子の LS および SS 遺伝子の組み換えを行い、その 活性を検討した。【材料と方法】犬の末梢血単核球を７ ２時間培養し、 RNA を抽出した。PCR により犬カスパーゼ３遺伝子の全長を増幅 し、その PCR 産物を鋳型として LS および SS 領域を PCR 増幅し た。SS が N 末端側に、LS が C 末端側に位置するよう遺伝子を組 み替えた後に発現ベクターに組み込み、自己活性化型カスパーゼ３ 発現ベクターとした。自己活性化型カスパーゼ３発現ベクターおよ び野生型カスパーゼ３を組み込んだベクターを犬の組織球性肉腫株 化細胞に遺伝子導入し、導入後の生細胞数により自己活性化能を評 価した。また、対照としてベクターのみの遺伝子導入も行った。 【結果と考察】自己活性化型カスパーゼ３発現ベクターを導入した 犬の組織球性肉腫株化細胞は、野生型カスパーゼ３発現ベクターお よびベクターのみを導入した細胞に比べ、総生細胞数が明らかに減 少した。このことから、今回作製したカスパーゼ３の組み換え体は 自己活性化能を有しており、犬の腫瘍における自殺遺伝子として有 用であると考えられた。
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