平成 25 年 6 月 1 日トマト黄化葉巻病の防除対策防除指導用資料生物工学研究所生物防除研究室知っておこうトマト黄化葉巻病とは・病原体トマト黄化葉巻ウイルス（Tomato yellow leaf curl virus；以下 TYLCV）トマトとトルコギキョウに感染するイスラエル系統とトマトのみに感染するマイルド系統がありますが、県内では両系統が発生しています。ウイルスの病原力（発病の程度）に差はありませんが、発生している系統により使える耐病性品種が異なります。・感染 TYLCV に感染したトマトを吸汁したタバココナジラミが、健全なトマトを吸汁することで感染します。接ぎ木によっても感染しますが、種子伝染や接触伝染はしないと報告されています。・症状発病初期は上位葉の葉色が淡くなり、小葉の縁が軽く巻いて葉脈間が黄化します。発病が進むと、生長点付近の節間が短くなり側枝が密生します。発病後は開花しても結実しません。また、生育初期に感染した場合、ほとんど収穫は望めません。図１トマト黄化葉巻病の症状（左:発病初期、右：発病が進み頂部が密生状態）・県内の発生状況県内では、平成 18 年に初めて発生を確認しました。生物工学研究所で遺伝子診断を実施した結果、平成 24 年度までに 30 市町から採集されたトマトで、 TYLCV の感染が認められました（図２）。：イスラエル系統とマイルド系統：イスラエル系統：マイルド系統：不検出：未調査図２病害診断でトマト黄化葉巻ウイルス 1 が検出された地域（平成１８～24 年度）タバココナジラミとは・生態体長 0.8mm 程度の白い羽を持つ微小害虫です。春秋の気温では約１か月で世代を繰り返し、雌成虫はトマトでは約 60 個、キュウリとナスでは 160 から 200 個産卵します。また、トマトで育った成虫は約 20 日、キュウリとナスで育った成虫は約 30 日の寿命です。・バイオタイプ農薬に対する感受性や寄生植物など、生物学的な特性によって分類されるグループで、日本では 4 種のバイオタイプ（B、Q、JpL、Nauru）が知られています。このうち、バイオタイプＢ(＝シルバーリーフコナジラミ)とバイオタイプＱが TYLCV の感染に関わっています。・寄生植物トマト、ナス、キュウリ、スイカ、メロン、イチゴ、ダイコン、ダイズ、セイタカアワダチソウ、ホトケノザ、ヒマワリ等に寄生します。図３タバココナジラミ(左：4 齢幼虫、右：成虫）タバココナジラミの見分け方タバココナジラミはオンシツコナジラミによく似ていますが、左右の羽が重なり合わないこと、体が黄色っぽいことで区別できます。しかし、バイオタイプは、遺伝子診断によらなければ判別できません。タバココナジラミ成虫オンシツコナジラミ成虫タバココナジラミ幼虫図４タバココナジラミとオンシツコナジラミの違い表１タバココナジラミとオンシツコナジラミの見分け方タバココナジラミオンシツコナジラミ卵白色→淡黄色、褐色白色→黒褐色 1～3 齢幼虫淡黄色無毛淡黄色山高（長蛇円形腹部端が細い）淡黄色。細い重ならない羽と葉面が 45 度の角度透明から白色周りに毛が多数白色厚みがある（小判型）白色。幅広重なる羽と葉面が平行 4 齢幼虫（最終齢）成虫の体成虫の羽 2 オンシツコナジラミ幼虫トマト黄化葉巻病の感染経路 TYLCV に感染したトマトをタバココナジラミが吸汁することで、TYLCV を体内に保毒（保持）した虫が発生します。TYLCV を保毒したタバココナジラミは、一生涯ウイルスを伝搬する能力を持ち続けます。ハウス栽培のトマトへのトマト黄化葉巻病の感染経路には、感染苗の持込みと、TYLCV を保毒したタバココナジラミの侵入があげられます（図５）。特に、感染苗を持込んだ場合は、生育初期に感染が拡がるため大きな被害が発生します。タバココナジラミが発病トマトから TYLCV を保毒 TYLCV を保毒したタバココナジラミにより苗に感染感染苗感染苗の栽培ハウスへの持ち込み発病株ハウス保毒虫がハウスに侵入ハウスから出た保毒虫が他のトマトに感染させる健全株ハウス内でタバココナジラミが増殖するとともに保毒虫が増え、急速に病気が拡がる保毒虫（ウイルスを持っている）トマト前作の栽培作物でタバココナジラミの発生が多いと感染の危険性が高まる無毒虫（ウイルスを持っていない）図５タバココナジラミによる TYLCV の伝搬経路 3 トマト黄化葉巻病防除対策のポイント発病株の早期抜き取りと適正処分トマト黄化葉巻病の見分け方・発病初期は、上位葉の葉色が薄くなり、健全株と比べて伸長が遅れ気味に見えます。生長点付近の小葉は、縁が軽く巻き葉脈間が黄化します(図６)。・生理的な障害と異なる点のひとつに、発生の仕方がハウス内でスポット的であることがあげられます。発病が進むと、生長点付近の節間が短くなり側枝が密生して奇形となります(図７)。こうなると、すでに多くのトマトが感染してしまっており、防除対策は手遅れに…。図６発病初期の小葉の症状図７発病が進んだ状況発病株の処理発病株は病気の伝染源になるため、見つけ次第抜き取り土中に埋めるか、ビニル袋に入れて完全に腐らせてから処分してください。＊摘除した脇芽・葉・果実などの残渣も同様に処分してください。＊果実が着いているからといって、放置しないでください。発病した部分を折り取っても、ウイルスはすでに全身に分布しています。 4 ウイルスを媒介するタバココナジラミの防除対策黄化葉巻病防除の三原則：「入れない、出さない、増やさない！」入れない・ハウス開口部への防虫ネット（0.4mm 目合い以下）の設置（ただし、0.4mm 目合いネットでも、完全には侵入を防止できません）・光反射マルチ、ＵＶカットフィルムの活用・黄色粘着シートの設置（2m 間隔以内で設置）・地域単位で作付け体系を統一出さない・栽培終了時の蒸し込みによる拡散防止（萎れたトマトの上でも幼虫は生存できるので、完全に枯らして全ての虫を餓死させます）・残さ、発病株の適正処分・ハウス内の除草の徹底（蒸し込みでトマトを枯らしても、雑草に寄生しています）増やさない・前作作物における防除（特に抑制トマト栽培前の作物） ※参考データ：H23 年度主要成果「トマト黄化葉巻病の多発生には前作からのタバココナジラミ発生量が関与する」・播種時、鉢上げ時、定植時の粒剤処理・防除効果の高い薬剤の選択と散布の工夫（丁寧な散布、薬剤のローテーション）・ハウス内や周辺の除草タバココナジラミはハウス周辺の雑草にも寄生ハウス周辺に雑草があると、寄生しているタバココナジラミがハウス内に侵入します。特に、セイダカアワダチソウやシロザ等には多数寄生しています。タバココナジラミ成虫図１０ハウス間のセイタカアワダチソウハウス周辺の雑草に寄生するタバココナジラミシロザキュウリやナスもタバココナジラミの増殖源キュウリやナスではタバココナジラミの増殖速度が速いので、これらのトマトハウスや周辺への植付けをできるだけひかえ、植え付けたときは防除を徹底します。 5 薬剤処理による育苗期の防除感染苗の本圃への持込みは、大きな被害につながるため、育苗期の防除対策が重要です。保毒虫により感染するが、タバココナジラミの防除で感染拡大は抑えられます播種鉢上げ期：殺虫剤の土壌処理定植期本圃栽培 4 週間有効 4 週間有効発芽図８トマト播種時または鉢上げ時の殺虫剤処理効果（平成 24 年度主要成果）播種時のニテンピラム粒剤処理：播種１週間後（発芽開始時）から４週間後（鉢上げ時期）まで防除効果が持続します。鉢上げ時のニテンピラム粒剤またはジノテフラン粒剤処理：鉢上げ４週間後まで防除効果が持続します。注意：ニテンピラム粒剤は、播種時または鉢上げ時のいずれか 1 回しか使えません。ただし、保毒虫が侵入した場合は殺虫効果が現れる前に TYLCV に感染することがあります。参考防除例育苗期の薬剤処理によるタバココナジラミの防除例ハウス開口部への 0.４ミリ目合ネット展張、成虫捕獲用の黄色粘着シートなどの物理的防除法を併用してください。播種例１発芽定植鉢上げ本圃栽培（育苗培土混和）（株元散布）散布剤による防除ニテンピラム粒剤 (ベストガード粒剤) ジノテフラン粒剤（アルバリン／スタークル粒剤）鉢上げ例２１購入苗の場合（育苗培土混和）ニテンピラム粒剤 (ベストガード粒剤) 定植 3 日前本圃栽培（株元散布）ジノテフラン粒剤（アルバリン／スタークル粒剤）図９育苗期のタバココナジラミの防除例 ※ニテンピラム粒剤の使用基準は、播種時または鉢上げ時の育苗培土混和、育苗期の株元処理、および定植時の植穴処理土壌混和のいずれか１回以内です。 ※ジノテフラン粒剤の使用基準は、育苗期の株元散布 1 回以内、および定植時の植穴土壌混和 1 回以内です。農薬の使用にあたっては、適用作物、適用病害虫、使用基準を確認し、周辺圃場に薬剤が飛散しないよう注意しましょう！（本資料中の農薬登録情報は、H25 年６月 1 日現在のものです） 6 トマト黄化葉巻病の遺伝子診断技術参考資料「マルチプレックス PCR 法を活用したトマト黄化葉巻ウイルスの迅速診断法」（平成 22 年度主要成果）試料 FTAカード ① 試料の転写・固定 ② パンチング ③ 洗浄 ④ PCR 葉をFTAカード上に置き、試料固定部分をディスクをチューブ洗浄液を除去して軽く押し付けて組織液をディスク状に移して、0.1 x TE PCR反応に供試する。転写させた後、室温で1時（φ 2mm）にくり抜く。で10分間洗浄する。間乾燥させる。図11 FTAカードを用いたPrint-capture法による核酸の簡易調整法表２植物由来遺伝子およびTYLCV系統特異的検出用プライマーの塩基配列検出遺伝子植物由来遺伝子 (rbcL) TYLCV プライマー名 rbcL1-F rbcL1375-R Is2574-V IsM2756-V TY412-C 配列増幅サイズ 5’-ATGTCACCACAAACAGAGACTAAAGC-3’ 5’-AAGCRGCVGCWAGTTCVGGRCTCCA-3’ 5’-CCGTTGGTTCTTACATTGG-3’ 5’-CAATTTATTTGGAAGCGCTTAGG-3’ 5’-CTCGTAAGTTTCCTCAACGGACTG-3’ 1.4kbp 630bp1) 440bp2) 1) イスラエル系統を検出するプライマーセットは、Is2574-V / TY412-Cであり630bpの増幅バンドが得られる。 2) マイルド系統を検出するプライマーセットは、IsN2756-V / TY412-Cであり440bpの増幅バンドが得られる。 <反応液組成> 2 x Ampdirect Plus 5.0 l 10 x Primer Mix* 1.0 l ExTaq 0.1 l 滅菌水 3.9 l Total 10.0 l ＊10 x Primer Mix：表1のプライマーを全て10 Mとなるように混合して調製。 <反応条件> 95℃ ― 2min | 95℃ ― 20sec 60℃ ― 20sec 35cycle 72℃ ― 60sec | 72℃ ― 2min 図12 FTAカード調製核酸を鋳型としたマルチプレックスPCR法の条件 M 1 2 3 rbcL遺伝子： 1.4kbp イスラエル系統： 630bp マイルド系統： 440bp 図13 Print-capture-マルチプレックスPCR法によるTYLCVの診断 M：100bp ladder マーカー、1：トマト健全葉、2：イスラエル系統感染葉、3：マイルド系統感染葉 1 ×TAE、1.5%アガロースゲル、35分間電気泳動 7