Problemi igienici legati alla presenza di Vibrionaceae p nei prodotti della pesca dott.ssa Elisabetta Suffredini Tor Vergata – 15 aprile 2014 D.S.P.V.S.A. P d tti della Prodotti d ll pesca: flora fl microbica i bi cute e branchie branchie:: • specie aerobie Pseudomonas, Aeromonas, Acinetobacter, Moraxella livello intestinale intestinale:: • Gram Gram- aerobi aerobi-anaerobi facoltativi Vibrio Alcaligenes Flavobacterium V br o, Alcal genes, Flavobacter um, Xanthomonas • alcuni Gram+ Micrococcus, Bacillus, Corinebacterium D.S.P.V.S.A. P d tti d Prodotti della ll pesca: contaminazione t i i Operazioni: Operazioni: scelta, lavaggio, mondatura, eviscerazione, dissanguamento passaggio dei microrganismi al tessuto muscolare replicazione batterica (influenza del controllo termico e delle reazioni autolitiche) D.S.P.V.S.A. Molluschi: contaminazione Animali scavatori sessili o sedentari Filtrazione di grandi quantità di acqua Concentrazione di batteri e virus eventualmente presenti nell’ambiente n am nt 1816 Pasquier descrive la febbre tifoide in un gruppo di persone 1816: che avevano consumato ostriche D.S.P.V.S.A. Vibrionaceae: impatto sanitario Tossinfezione da Vibrio spp. spp collegate ad alimenti: 8.000 casi / anno negli USA (stima CDC - Mead, 1999) 2008: 0.29 casi confermati (lab) / 100.000 individui D.S.P.V.S.A. Vibrionaceae: impatto sanitario Tossinfezione da Vibrio spp. spp collegate ad alimenti: 8.000 casi / anno negli USA (stima CDC - Mead, 1999) 2008: 0.29 casi confermati (lab) / 100.000 individui Dal 2000 – contrariamente a tutte le altre tossinfezioni alimentari – il tasso relativo dei casi da Vibrio spp. è t t (d ti F dN t) aumentato (dati FoodNet) bias nella sorveglianza vs. reale aumento D.S.P.V.S.A. Vibrionaceae: impatto sanitario D.S.P.V.S.A. VIBRIONACEAE: classificazione Vibrio (circa 70 specie) p Allomonas Catenococcus Enterovibrio Ferrania G i Grimontia i Listonella (patogeni per pesci e molluschi) Ph t b t i m (ex ( V. V damsela d l ) Photobacterium Salinivibrio http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/Browser D.S.P.V.S.A. Genere VIBRIO Bacilli, Gram neg. Bacilli neg 0,5 0 5-0 0,8 8 m, forma leggermente ricurva ((‘a a virgola virgola’)), mobili per la presenza di flagelli D.S.P.V.S.A. Genere VIBRIO Autoctoni dell’ambiente marino e di estuario; richiesta di Na+ per la crescita Salinità V. cholerae V. mimicus V. vulnificus V. parahaeparahae molyticus V. alginolyalginoly ticus 0% + + - - - 3% + + + + + 6% - - + + + 8% - - - + + 10% - - - - + D.S.P.V.S.A. Genere VIBRIO Ossidasi-positivi (ad eccezione di V. metschnikovii) Anaerobi facoltativi M t b li Metabolismo f fermentativo t ti e ossidativo id ti Tolleranza verso pH elevati, resistenza ai sali biliari terreno TCBS • sali biliari e pH 8.2 (crescita selettiva di Vibrio spp.) • fermentazione del saccarosio (differenziare alcune specie) D.S.P.V.S.A. Genere VIBRIO Caratteristica del genoma : presenza di due cromosomi circolari Truksis M. et al. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 1998, 95: 14464-14469 D.S.P.V.S.A. cromosomi o megaplasmidi ? Duplicazione “coordinata” Segregazione controllata % di genoma presente sulle due strutture Presenza di geni regolatori o essenziali su entrambe Possibili vantaggi: Rapporto dimensione genoma / tempo di replicazione; rapido adattamento all’ambiente D.S.P.V.S.A. Genere VIBRIO: p patogenicità g Sito di infezione Specie Vibrio 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 V. cholerae O1/O139 App. G.I. Cute (ferite) Orecchio Sangue Sangue (setticemia) (batteriemia) App. respiratorio S.N.C. (meningi) ++ ++ (+) ? ? ? ? ? + + (+) (+) ? (+) ++ + (+) ? (+) (+) (+) + ++ ? ++ + (+) (+) ++ ? ? ? ? ? ? V. alginolyticus ? + ? (+) ? ? Ph. damsela ? ++ ++ ? ? ? ? ? V. furnissii (+) ? ? ? ? ? ? V. hollisae ++ ++ ? ? (+) ? ? ? + + ? ? ? ? V. metschnikovii (+) ? ? (+) ? ? ? V. cincinnatiensis ? ? ? ? (+) ? (+) V. carchariae ? ++ ? ? ? ? ? V. cholerae non O1/ non O139 V. parahaemolyticus V. vulnificus V. fluvialis V. mimicus ++ : più comune sito di infezione, + : altri siti di infezione, (+) : raro sito di infezione, ? : da stabilire. (da West, 1989, integrata con informazioni da Oliver & Kaper, 1997) D.S.P.V.S.A. Genere VIBRIO: p patogenicità g Sito di infezione Specie Vibrio V. cholerae O1/O139 V. cholerae non O1/ non O139 2 V. parahaemolyticus 3 V. vulnificus 1 App. App G.I. Cute (ferite) Sangue (setticemia) ++ (+) ? ++ + ( ) (+) ++ + + ++ ? ++ V.. cholerae V. parahaemolyticus V vulnificus V. D.S.P.V.S.A. V. cholerae D.S.P.V.S.A. V cholerae V. Filippo Pacini (1854) Robert b Koch h (1 (1883)) D.S.P.V.S.A. V cholerae V. •Ambiente Ambi nt m marino in costiero, sti acque di estuario st i •Antigene g somatico O: oltre 200 sierogruppi g pp •Sierogruppo O1: colera epidemico biotipo classico & biotipo ElTor (1817 1923 classico; 1961 ElTor) • sette pandemie (1817-1923 D.S.P.V.S.A. Diffusione ff della settima m p pandemia m D.S.P.V.S.A. V cholerae V. •Ambiente Ambi nt m marino in costiero, sti acque di estuario st i •Antigene g somatico O: oltre 200 sierogruppi g pp •Sierogruppo O1: colera epidemico biotipo classico & biotipo ElTor (1817 1923 classico; 1961 ElTor) • Sette pandemie (1817-1923 g pp O139 (1992) ( ) • Sierogruppo ottava p pandemia? D.S.P.V.S.A. Colera: patologia Colera Diarrea secretoria ((feci ad “acqua q di riso”) Incubazione: 12 - 72 ore Disidratazione > shock ipovolemico D.S.P.V.S.A. Colera: trattamento Colera Reidratazione: soluzione di cloruro di sodio, bicarbonato di sodio, cloruro di p potassio e destrosio In alcuni casi trattamento antibiotico Problema: Assenza di approvvigionamento pp g di acqua potabile D.S.P.V.S.A. Colera: dose infettante e fattori predisponenti Dose infettante: ca 108 u.f.c. (ipocloridria o problemi gastrici dosi inferiori: 103-10 105 u.f.c.) ufc) La simultanea ingestione di cibo può fornire barriera protettiva contro ll’acidità acidità gastrica > colonizzazione dell’intestino tenue. >> acquisizione durante i viaggi prodotti ittici, q gg (consumo di p acqua contaminata, prodotti – frutta o verdura – trattati con acqua contaminata, prodotti contaminati in maniera secondaria)) D.S.P.V.S.A. Diffusione del colera nel mondo (2009) D.S.P.V.S.A. V. cholerae: epidemiologia Anno 2000 2001 2002 2003 2004 2005 Casi 137 000 137.000 184.000 142.000 111.000 101.000 131.000 Decessi 4 900 4.900 2.700 4.500 1.900 2.300 2.300 EU 35* 53 + 5* 7* 12* 21* 10* USA 4* 4 2* 2 5* 4 + 8* 2006 2007 7 2008 237.000 178.000 78. 190.000 6.300 4.000 . 5.100 62* 44* 22* 4 + 4* 3 + 4* 1 + 4* * casi importati D.S.P.V.S.A. V cholerae: Italia V. 1998: 995 1995: 2 casi 1 caso * 1994: 12 casi (Bari) 1979: 1973: (Sardegna) 278 (Napoli e Puglia) – 30 morti * casi importati D.S.P.V.S.A. Colera: fattori di patogenicità Tossina colerica (CTX) Incremento AMPc nelle cellule dell’intestino tenue > rilascio di Cl- > accumulo di liquidi nel lumen intestinale D.S.P.V.S.A. Colera: fattori di patogenicità Tossina colerica (CTX) • ctx, t ace, zott, cep > fago f CTX (trasmissione orizzontale della patogenicità) • tcp > sintesi del pilo per la ricezione di CTX (coevoluzione ?) • st (V. cholerae non-O1) D.S.P.V.S.A. V. p parahaemolyticus y D.S.P.V.S.A. V parahaemolyticus V. Primi Pr m isolamenti: solament Giappone, G appone, anni ann ’60-’70 60 70 Sistema di sorveglianza carente • Costituisce ca. 90% dei casi di vibriosi negli USA • In Europa: 3 epidemie Francia 1997 44 casi; Spagna p g 1999 64 casi; Spagna p g 2004 80 casi D.S.P.V.S.A. V parahaemolyticus V. • Autoctono dell’ambiente marino costiero (regioni tropicali l e temperate); ) temperatura-dipendente (conc. media nei prodotti della pesca: 103 c.f.u./g) • Tempo di replicazione molto breve (< 12 min. in condizioni ottimali) D.S.P.V.S.A. V parahaemolyticus V. • Sierotipizzazione: antigene somatico O e antigene g caspulare p K • Relazione sierotipo – patogenicità: pandemia O3:K6, ma la patogenicità è presente anche in sierotipi differenti D.S.P.V.S.A. V. parahaemolyticus: f tt i di patogenicità fattori t i ità F Fenomeno di K Kanagawa: lisi li i eritrocitaria it it i Produzione di tossine TDH e/o TRH TDH: thermostable direct hemolysin TRH: thermostable direct – related hemolysin y •Solo 1-2% degli isolati ambientali sono patogeni D.S.P.V.S.A. V. parahaemolyticus: patologia e d dose iinfettante f tt t • Dose infettante: ca. 105 c.f.u. (Vp K+) • Gastroenterite acuta: diarrea (talora sanguinolenta), dolore addominale, nausea e vomito (a volte intensi); patologia autolimitante (3 giorni), morti rare • Incubazione: 4 – 96 ore (media 15 ore) D.S.P.V.S.A. V parahaemolyticus: V. fattori predisponenti Stati patologici precedenti aumentano il rischio di i f i infezione >> acquisizione mediante consumo di prodotti ittici crudi d ( (e.g. ostriche, h preparazioni secondo d tradizione culinaria giapponese, etc.) poco cotti ((e.g. molluschi), ll hi) o prodotti d tti contaminati t i ti iin maniera i secondaria D.S.P.V.S.A. V. vulnificus D.S.P.V.S.A. V vulnificus V. • Autoctono dell’ambiente marino costiero (presente anche in acque fredde) (conc. media nei prodotti della pesca: 103 c.f.u./g) • Non determina infezione gastrointestinali ma sistemiche; sintomatologia febbre e nausea (infezione di ferite > ulcerazioni cutanee > batteriemia > setticemia)) D.S.P.V.S.A. V vulnificus V. D.S.P.V.S.A. V vulnificus V. • Infezioni f sporadiche d h • Progressione dell’infezione dell infezione rapida (letalità 40 4060% nelle 48h dall’accettazione in ospedale) anche in presenza di trattamento antibiotico aggressivo • 80% dei ceppi ambientali patogeni su topo (patogenicità (p g variabile fra i ceppi); pp ) dose infettante nell’uomo sconosciuta D.S.P.V.S.A. V vulnificus: fattori predisponenti V. • Malattie epatiche • Immunocompromessi • Tumori D.S.P.V.S.A.
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