Real Time PCR Ｖｅｒ．1.00 Real-Time PCR法とは・・・サーマルサイクラーと分光蛍光光度計を一体化した装置を用いて、PCRでの増幅産物の生成過程をリアルタイムでモニタリングし、解析する方法です。本法は、電気泳動が不要で、かつ増幅が指数関数的に起こる領域でPCR産物量を正確に定量できる利点があります。鋳型ＤＮＡ濃度が高い鋳型ＤＮＡ濃度が低い threshold cycle （Ct 値）１．DNA結合色素（SYBR Green Ⅰ）を用いる方法励起光励起光 SYBR GreenⅠはDNAの副溝（minor groove)に結合します。蛍光共鳴エネルギー移動現象 FRET（Fluorescence Resonance Energy Transfer)とは・・・．励起された蛍光団 (Donor : D*) は，そのエネルギーを蛍光や熱エネルギーとして放出する．特定の条件を満たす分子 (Acceptor : A) が存在すると，共鳴による励起エネルギーの移動 (FRET) が起こる．この時，エネルギーを失った Donor は基底状態にもどり，同時にエネルギーを受け取った Acceptor は励起状態となる．FRET は Donor Acceptor 間の距離が1-10 nm という，非常に広い範囲で起こることが知られている． D を励起し，FRET が起こると，励起状態の A を得ることができる．A が蛍光物質である場合，D を励起すると，（FRETが起こり）A が励起されるため，A からの蛍光を得ることが可能である． FRET がおこるために必要な条件 1.Donor の蛍光スペクトルと Acceptor の蛍光スペクトルの重なりがあること 2.Donor と Acceptor がある程度近くに存在すること 3.Donor と Acceptor が適切な配行を取っていること．以上の３つを満たした分子の間で FRET は起こる． 2.ハイブリダイゼーションプローブを用いる方法ＤＡＤ：ドナー色素Ａ：アクセプター色素発光励起光ＤＡオリゴヌクレオチドプローブ 3．TaqManプローブを用いる方法励起光励起光参考文献羊土社ここまでできるＰＣＲ最新活用マニュアルタカラバイオ株式会社http://www.takara-bio.co.jp/index.htm