Alcian Blue & PAS Alcian Blue 目的アルシアンブルーは、粘液を染める組織染色法としてSteedman (1950年)が導入した色素。シアル化されたムコ物質（シアロムチン）、硫酸基を有するムコ物質（スルホムチン）、軟骨や線維性結合組織に含まれるコンドロイチン硫酸、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸、ヒアルロン酸のような酸性ムコ多糖類を特異的に染色するために用いられる。色素が結合した部位は青藍色に鮮やかに染色される。試薬 □アルシアンブルー液 Alcian blue 8GX 酢酸蒸留水 1g 3ml 97ml □3%酢酸水 □ケルンエヒトロート原理塩基性色素であるアルシアン青と、酸性ムコ物質のカルボキシル基あるいは硫酸基のイオン結合に結びついている。特異性はアルシアン青の溶液中の水素イオン濃度や電解質濃度によって変化する。 pH2.5の溶液ではカルボキシル基と硫酸基の両者に、pH1.0の溶液では硫酸基のみに結合する。カルボキシル基硫酸基 O O= S =O - O = O 例）アラニン CH3CH(COOH)NH2 筋肉中に含まれるアミノ酸。 - R - C - OH R 例）粘膜など軟骨やヒアルロン酸など。 Al 染色法脱パラ・流水水洗３％酢酸水 3分アルシアン青溶液 20分流水水洗ケルンエヒトロート 5分流水水洗脱水・透徹・封入 Al 染色結果結腸の粘膜杯細胞と気管支軟骨内 http://www.kyorin-u.ac.jp/univ/user/health/pathology/e-learning/pages02/g/g3p.html PAS 目的 PAS反応は、多糖類の組織化学的証明法として発展し、現在では肝臓のグリコゲン、消化管の粘液物質の証明、色素顆粒や細胞顆粒、真菌、アメーバの識別および腎糸球体病変の識別等、広く糖質の一般染色として知られている。試薬 ■0.5%過ヨウ素酸水溶液 ■シッフ試薬 ■ヘマトキシリン ■亜硫酸水 10%重亜硫酸ナトリウム 6ml 1N塩酸 5ml 精製水 100ml PAS 染色法過ヨウ素酸水溶液 5分精製水水洗シッフ試薬亜硫酸水 20分３回 × 脱パラ・水洗各3分流水水洗ヘマトキシリン 20秒流水水洗脱水・透徹・封入 PAS 染色結果糸球体核グリコゲン、中性粘液多糖類、糖蛋白、粘液蛋白、糖脂質陽性細胞赤紫色細胞内グリコゲンや中性粘液,卵巣の濾胞液,軟骨基質,甲状腺コロイド,副腎のクロム親和性物質,下垂体の腺細胞の顆粒,リポフスチン,腎糸球体や尿細管基底膜や硝子滴,小血管のフィブリノイド変性や硝子化,前立腺内容,脾やリンパ節の細網線維や小血管,好中球,肥満細胞,骨髄巨細胞,赤痢アメーバ,真菌類,細菌類重染色 pH2.5アルシアンブルーとPASの重染色法を使用すると、中性ムコ多糖類はシッフ試薬で赤く染まり、酸性ムコ多糖類はアルシアンブルーで青く染まる。特異性の異なる２種類の染色法を単一切片上で行い、より多くの情報を同時に得ようとするもの。最初に行なわれる染色法はそのまま特異性が再現されるが、後続の染色は特異性がすでに制約されていることを考慮しなくてはならない。そのため、さらに個々の単染色を同時に行なうことが必要である。両方 PAS グリコーゲン中性粘液酸性粘液酸性粘液多糖類 AL 脾臓腎臓心臓肝臓