阪市医誌, 第
133
5
3巻 3 ･4号 1
3
3- 1
4
22
0
0
4
頭頭部扇平上皮癌 におけ る組織 内 t
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および di
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大阪 市立 大学 大学院 医学研究 科
耳 鼻咽喉病態 学
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.
要
約
【目的 】 5FU 系抗 癌 剤 の 標 的酵 素 で あ る t
hymi
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TS)お よび代 謝 酵 素 で あ る di
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i
mi
di
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o
ge
nas
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DPD)の頭頚 部扇 平上 皮 癌 組織 中の酵素 活性 お よび mRNA レベル を測 定 し, 腫癌 の臨 床 的評価 因子
との相 関性 につ き解析 を行 い, 頭 頚 部癌 治療 戦略 に反映 させ る ことを 目的 と した.
【
対 象 と方法 】本研究 に承諾 を得 られ た, 末 治療 頭 頚 部癌 4
7症例 を対 象 と した.腫 癌 組織 は生検 時 と手 術時 に採取
し, 再 発 症 例 で は 再 発 時 に も採 取 した . TS酵 素 活 性 は [
63
H岬dUMP bi
ndi
ngassayに て , DPD 酵 素 活 性 は
[
6
-1
4C
]
5
FU c
at
al
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i
cas
s
ayにて測 定 した. mRNA レベ ルの測 定 には TaqManT
"プ ロー ブ を用 い た RTPCR法 を用 い
た.
【
結果】TS酵 素活性 は 0･
01
6-0.
3
9
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/
mgpr
o
t
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n, DPD酵素 活性 は 7
6.
7
5-6
8
0.
9pmo
l
/
mgpr
o
t
ei
n/
mi
nで あ っ
た.各酵素 は年齢, 性 別 との相 関 を認 め なか った. また, 臨床 病期 や組織 学 的分化度 , リンパ節 転移 の有無 , 予後 と
の相関 も認 め なか った.TSmRNA レベル は 1
.
0
9-2
4.
9
9, DPD mRNA レベ ル は 1
81
.
6
8-4
3
0.
4
8で あった.各 mRNA
レベル には相 関 は認 め なか っ た.TSmRNA レベ ル と組織 学 的悪性 度 に は有意 な相 関 を認 め た (
r
-0.
71
0, p<0.
0
5)
.
救大阪市 立大学大学院 医学研 究 科 臨床 医科 学専 攻 (
耳鼻咽喉 病 態学 )課程終 了
受付 平成 1
5年 1
0月 2日, 受理 平成 1
5年 111
125円
134
巾
村
有
希
【
結 論 】頭 頚 部腫 癌組織 内 TS酵 素 活性 は, 独立 した予 後 因子 とは な らな い結 果 で あ った.一 方 , 腫 癌 組織 内 TS
mRNA レベ ル は, 組織 学 的悪性 度 の評 価 に有 用 な指 標 とな り, 腫壕 の 局所 再 発 や予後 との 関連 を有 す る可能性 が示
唆 され た.
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予後,組織 学 的悪性度
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5FU)系 抗 癌 剤 の 感 受 性 規 定 因子 と し
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て , DNA 合 成 の律 速 酵 素 で あ る t
(
TS)と 5FU 分 解 の律 速 酵 素 で あ る di
hydr
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mi
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hydr
ogenas
e(
DPD)の腫 癌 内 活性 の 重要 性 が近 年注 目
され て い る. これ らの 酵 素 は 5FU 系 抗 癌 剤 の 有 効 性 と
相 関性 が あ り, 治 療 効 果 の 予測 につ な が る可 能 性 が報 告
5
'
. また , TS は細 胞 増 殖 に 関 与 す る酵 素 で
され て い る 1ー
あ る こ とか ら, 腫 場 内 TS発現 量 と癌 の 悪 性 度 や疾 患 の
予 後 との 相 関 につ い て も注 目 され て い る 1,
6
･
7'
. しか しな が
ら, 頭 頚 部 扇 乎 上 皮 癌 に お い て は, 5
FU 系 抗 癌 剤 が頻
用 され て い る割 に この種 の研 究 は少 な く, 特 に近 年盛 ん
に 行 わ れ て い る 腫 癌 組 織 に お け る TS お よ び DPD
mRNA 発 現 の 解 析 に関 して は , 本 邦 に お い て は本 研 究
が最 初 の もの とな る.
本 研 究 は, 頭 頚 部 扇 平 上 皮 癌 組 織 に お け る腫 癌 内 TS
お よび DPD 酵 素 活性 を測 定 す る と と もに, これ ら酵 素
の 腫 癌 内 mRNA レベ ル の 母 集 団 調 査 を行 い, 種 々 な臨
床 的 評 価 因 子 との 関連 性 を検 討 し, 頭 頚 部 癌 治 療 戦 略 に
反映 させ る こ と を 目的 とす る もの で あ る.
対 象 と 方 法
1.対象
は, HE染色 によ り扇平上皮癌である ことを全症例病理組織
学的に確認 した.酵素測定には, 腫癌部分の充実性でかつ肉眼
的に周囲の正常組織 が含まれない部位 よ り採取 した もの を剛 1
,
8
0
℃ にて凍結保存 した.TSおよび DPD mRNA
測定 までは レベルの測定の ためには, 各時期 に採取 され, ホルマ リン固
or
f
mal
i
nf
i
xe
dandpar
afi
n
定, パ ラフ ィン包埋 された標本 (
e
mbe
dde
d;FFPE標本)を用いた.今回検討対象 とした 47症例
8例で,
の うち, TS酵素活性 は 41例 で, DPD 酵素活性 は 2
mRNA レベルの測定 は 1
7例で施行 した.
2) 腫癌組織内 TS酵素活性の測定
TS活性の測定 は, Spe
ar
sら8'
の方法 に準 じ, [
6
3H]
FdUMP
bi
ndi
ngas
s
a
yにて行 った.す なわち, 組織 を緩衝液 (
5
0mM
KH 2PO 4, 2
0mM 2
me
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pt
o
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,1
0
0mM Na
F, 1
5mM
･
4)とともに均質化 (
1
5分,
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yl
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'
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pa
t
e, pH 7
3
0
00r
pm)した後, その上清 を 4
℃, 1
0
5
0
0
0×gにて遠心分離
を行 い, さらに上清 を採取 した. この上清 1に対 して緩 衝液
(
0.
6M NH｡
HCO ｡
,1
0
0mM 2
me
r
c
apt
o
e
t
hano
l
, 1
0
0mM
NaF, 1
5mM c
yt
i
d
yl
a
t
epH8.
0
)1を加 えて 3
0
℃ で 3時間の反
応後, 7
.
8pmo
l[
6
3H]
FdUMP, 2mM t
e
t
r
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hydr
o
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bl
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t
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6
ormal
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5mM
mM s
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e, 9mM f
0mM 2
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a
l
bumi
n, および 1
0
0mM NaFを添加 し, 3
0
℃ にて 2
0分間
UMPの放射
反応 を行った.遠心分離の後, TSに結合 した Fd
性活性 を測定 した.[
6
3
H]
FdUMPの放射性活性 か ら TS活性 を
pmo
l
/
mgpr
o
t
e
i
n)にて表示
測定 し, 蛋白濃度で除 した比活性 (
した.[
6
3H]
FdUMPは Mo
r
a
ve
kBi
o
c
he
mc
a
l
s
, Br
e
a.Cal
i
f
･
例, 下咽頭 2例,喉頭 5例, 副鼻腔 5例, 口腔 3例 , 舌 2
0
より人手, 比活性 は 1
0.
7Ci
ノ
mo
lである.
3
) 腫癌組織内 DPD酵素活性の測定
DPD活性 の測定 は, [
6
1
4
C]
5
FU c
at
al
yt
i
cas
s
ayにて行 っ
た.すなわち, 組織 を 4倍の緩衝液 (
1
0mM Tr
i
s
HCl
,0
･
5
mM di
t
hi
o
t
hr
e
i
t
o
l
, 1mM EDTA, pH 7
.
4)にて均質化 した
後, 遠心分離 (
1
0
5
0
00×g, 4
℃, 1時間)を行 った･ この上清
に 2mg
/
mL NADPH と 20mM [
6-14C]
5FU (
Moravek
Bi
oc
he
mc
al
s
, Br
ea.Cal
i
f
. よ り入手 , 45
6
0mCi
/
mmo
l
)
,
例, 頚部 1例である.腫癌の臨床病期分類は頭頚部癌取 り扱い
規約 (
改訂第 3版)に従 った.
2
.
5mM MgC12, 3
5mM NaH2P04を添加 し, 37
℃ で反応後,
反応液 を経時的にサ ンプ リング した.反応液 は 0.
3
6mM KOH
2
0
0
0年 7月よ り 2
0
0
3年 6月までの 3年間に, 大阪市立大学
医学部附属病院耳鼻咽喉科 において初回治療 を行 った頭頭部扇
平上皮癌症例の うち, 酵素活性の測定が可能 な量 を採取で きた
4
7症例 を対象 と した.なお, 全症例 当院倫理委員会 で承認 さ
れ た研究 実施計画 に患者本 人 も しくは保護 責任者の承諾 を得
9例, 女性 8例, 年齢分布 は 3
0歳-8
4歳 (
平
た.内訳 は男性 3
2
.
3歳)で ある.部位別内訳 は, 上咽頭 3例, 中咽頭 8
均年齢 6
2
.方法
とともに, 室温で少な くとも 3
0分反応 させ, 0･
36mM HC1
04
1) 検体
にて中和後, 遠心分離 (
1
4
0
0
0r
pm, 5分)を行い, 上清 を薄
TSお よび DPD 酵素活性測定のための検査検体 は, 診断確
定のための生検時 に採取 し, さらに手術症例 においては手術時
にも, 再発 を認めた症例 については再発時に も採取 した･組織
層 クロマ トグ ラフ ィーにて分析 した.展開はエ タノール と酢酸
FU 分
ァンモニ ウムにて行い, 薄層 クロマ トグ ラフ ィー上の 5
画 と分解物分画 (
DHFU, FβUPA, Fβ
Al
a)の放射活性 を
135
頭頚部扇平上皮癌における組織内 t
hy
mi
d
yl
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es
y
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has
eおよび di
hyd
r
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p
y
imi
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di
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hydr
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g
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nas
e活性の臨床的柳 雌
行 った.測定結 果 は対 象 と しての β
ac
t
i
nmRNA 発現量 との比
イメージングプ レー トオー トラジオグ ラフ ィ (
BAS200
0, Fuj
i
f
i
l
m)にて測 定 した .単 位 時 間 あ た りの 分 解物 生 成 量 と して
と して表 され る.
DPD 活性 を算出 した9
'
.
5) 腫癌 の組織 学 的悪性 度 の評 価
TSお よび DPD mRNA レベ ル を測 定 した症 例 におけ る組織
4) 腫癌組織 内 TSお よび DPDmRNA レベルの測定
腫 癌 組 織 の FFPE 切片 か ら, 腫 癌 部 分 の み の TS お よび
学 的 悪 性 度 を , HE 染 色 切 片 を剛 ､て Bryne ら10'
の報告
(
Tabl
e2)に基づ き評価 した.症例 間での評価 の ば らつ きをな
DPD mRNA を抽 出 し, RTPCR に よ り TS お よび DPD
mRNA の 発 現 量 を定 量 的 に 解 析 した . FFPE 標 本 か らの
くす ため に, 評価 は一 人の病 理 医の協 力の もと, 著者 と二 人
mRNA の分 離 は, 特許 権 (
Uni
t
edSt
at
esPat
entNumber
のみで行 った.
po
ns
eGe
ne
t
i
c
sl
nc
.の研 究所 (
Los
6
2
4
85
35)の関係 か ら, Res
6) 統 計学的解析
Angel
es, CA)に依 頼 した･ その 概 要 は, 5pm 厚 の 薄 切
FFPE 切片 を HE染色 した後, この染色像 に基づ き 1
0pm 厚
の U 検 定 , 回帰 分析 を用 い, p<0.
05を もって有意 と判定 し
as
erc
apt
ur
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c
t
i
on
の FFPE切片か ら腫癌細胞 を I
た.
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wal
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s検定 , MannWhi
t
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統 計学 的解析 には, Kr
c
h, Ge
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(
PALM Mi
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hno
l
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ie
g
sAG, Muni
よ り採取 す る.採取 した細胞 よ り t
ot
alRNA を抽 出, 逆転写
結
果
1.頭頂部京平 上 皮癌 にお ける腫癌 組織 内 TS および DPD酵素
し, c
DNA を合成 後, TaqManT
"プ ローブを用 いた Re
al
t
i
me
pcR 法 を用 いて増 幅 に よ り決 定 す る. PCR の プ ラ イマ ー は
活性値
Tabl
elに示 す通 りで あ る. また, 温 度 条件 は, 50℃ で 1
0
e3に示す.治療前 にお
各症例 の背景 お よび測定結果 を Tabl
秒, 9
5
℃ で1
0分の 後, 95
℃ 1
5秒 , 6
0℃ 1分で 42サ イクル
け る各酵 素 の 測 定 結 果 は, TS活性 は 0.
01
6-0.
39
'
2pmol
/
mg
Tabl
e1 PCR Pri
mersandPr
obes
Pr
i
me
r
/
Pr
o
be
Se
que
nc
e
TS2764F(
1
8bp)
TS2830R(
1
7bp)
Pr
o
beTS2785T(
21bp)
DPD3a
51
F(
1
9bp)
DPD3a1
34R(
20bp)
Pr
o
beDPD3a71
T(
29bp)
TP3700F(
1
7bp)
TP377
0R(
20bp)
Pr
o
beTP37
22
T(
25bp)
OPRT5496F(
25bp)
OPRT5586R(
20bp)
Pr
o
beOPRT5528T(
27bp)
βac
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3につ いて は, その組 織 標本量
が少 な く, 結果 が信頼性 に乏 しいため今回の統計学的検討か ら
て
年齢 と腫癌 組織 内 TS酵素活性 , 年齢 と腫癌組 織 内 DPD 酵
は除外 した.
素活性 につ いて回帰 分析 を用 いて検討 を行 ったが, TS酵 素活
2.腫癌組織 内 TSおよび DPD酵素活性の相関性 について
性 , DPD 酵素活性 と も年齢 との相 関 を認 めなか った (
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137
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35
3)
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5. 腫 痔 の T分 類 お よび N 分 類 と, 腫 癌 組 織 内 TS お よ び
DPD酵素活性 の相関性 につ いて
T 分類別 にみ た腫癌組織 内 TSお よび DPD 酵素活性 値 につ
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s検 定 を用 いて検討 を行 ったが, TSお よ
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496)
.
0.
035, p-0.
4.性差 と腫癌組織 内 TSおよび DPD酵素活性 の相関性 につい
て
強襲部癌 は, 臨床上, 男性 の 占め る割合 が高 く, 本研究 に
おいて も対象患者 は大部分が男性 で あった. しか し, 今回の母
(
TS:p-0.
733, DPD:p-0.
601
)
. リンパ節転移の有無 による酵
素活性値 につ いて も同様 に検定 を行 ったが, 有意差 は認 め られ
Fi
g.2,A andB)(
TS:p-0.
43
2, DPD:p-0.
380)
.
なか った (
6. 臨床病期分 類 と腫癌 組織 内 TS および DPD酵素活性 の相 関
性 について
各臨床病期 にお け る腫癌組 織 内 TSお よび DPD 酵素活性 値
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s検 定 を用 いて検 討 を行 ったが, TS
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お よび DPD 酵素活性値 ともに, 臨床病 期 間で有意差 を認め な
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TS:p-0.
8
42, DPD:p-0.
601
)
.
か った (
7.腫癌 の組織学 的分化 度 と腫痔組織内 TSおよび DPD酵素活
性の相関性 について
腫域 の組織 学 的分化度 別 にみ た腫場組織 内 TSお よび DPD
酵素活性値 につ いて Kr
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s検定 を用 いて検討 を行 っ
たが, TSお よび DPD 酵素 活性 値 ともに, 組織学 的分化度 に
TS:p-0.
200, DPD:p-0.
228)
.
よる有意差 を認 め なか った (
138
中
村
8.放射線治療の奏効性 および治療後再発 の有無 と, 治療前腫
癌組織内 TSおよび DPD酵素活性の相関性 について
対 象症例 47例 中, 放 射線 治療 を行 っ た 33症例 につ いて,
有
希
9.腫癌組織内 TS酵素活性値 と予後 との相関性 について
腫癌組織 内 TS酵素活性値 を, その平均値 を境 に して高発現
群 と低発現 群 に分類 し, 予後 は一次治療終 1
′後, 少 な くとも
その効果 と酵素活性値 との相関性 につ き検 討 を行 った.対象 を
一年間再発 を認めない症例 を予後良好群, -年以内に再発 もし
Compl
e
t
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pons
e群, par
t
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pons
e群, Noc
hange群
に分類 し, 群間 において治療前の腫癌組織 内 TSお よび DPD
くは原病死 した症例 を予後不良群 と した.腫壕組織 内 TS酵素
活性値の高低 と予後 につ いて x2検定 を用 いて検 討 を行 ったが,
酵素活性値 につ いて Kr
us
kal
Wal
l
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s検定 を用 いて検討 を行 っ
各群間で統 計学的に有意差 を認めなか った (
x2値 -0
.
1
49, 自由
たが, TSおよび DPD 酵素活性値 ともに, 各群問で有意差 を
痩 -1
, p-0.
7
00)
.
認めなかった (
TS:p-0.
879, DPD:p-0.
563)
. また, 一次治
10.St
ageⅣ症例 における腫癌組織内 TS酵素活性値 と予後 と
の相関性 について
療終 了後, -年以内に局所再発を認めた群 と認めなかった群 に
つ いて も, 治療前の腫癌組織内 TSおよび DPD 酵素活性値 を
臨床 病 期 の 予 後へ の影 響 を考 え, 本研究 中最 多で あ った
Mannwhi
t
ne
yの U 検定 を剛 1
て検討 を行 ったが, ともに有
St
ageⅣ症例のみ を対象 と して, その予後 と腫壕組織 内 TS酵
意差 を認めなか った (
TS:p-0.
7
51
, DPD:
p-0.
941
)
.
素活性値 との相関性 につ き検討 した.予後については, 上述の
予後良好群 と予後不良群 に分類 し, 両群間での TS酵素活性値
られ るよ うであったが, 統計学的に有意差 は認 め られなかった
●
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ll.腫癌組織内 TSおよび DPDmRNA レベル
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を Mannwhi
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yの U 検定 を用いて検 討 を行 った.予後良好
群 において腫壕組織 内 TS酵素活性値 が低値 とな る傾向 は認め
1
7症例 における腫壕組織内 TSおよび DPD mRNA レベルの
.
09-24.
99(
平均 4.
41
)で, DPD
測定結果は, TSmRNA は 1
mRNA は 1
81
.
68-4
30.
48(
平均 2
62.
6
0)で あった (
Tabl
e4)
.
12.腫癌組織内 TSおよび DPD mRNA レベルの相関性 につい
て
腫癌組織 内における, TSmRNA レベル と DPD mRNA レ
p
o
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ベルの相関性 につ き回帰分析 により検討 を行 ったが, 有意 な相
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.
関は認め られ なかった (
13.腫癌組織内 TSおよび DPD の mRNA レベル と酵素活性の
相関性 について
腫癌組織 における TSmRNA と TS酵素活性, DPD mRNA
Tabl
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と DPD 酵素活性 の相 関性 について回帰分析 によ り検 討 を行 っ
たが, 有意 な相 関 は認 め られ なか った (
TS:r-0.
446, p-
mRNA レベルは T分類, N 分類間で有意差 を認めなかった (
T
分類:p-0.
6
5
6, N 分類:p-0.
1
4
9)
.
15. 臨床病期分類 と腫癌組織内 TSmRNA レベルの相関性 につ
!
7
T 分類別, N 分類別 にみ た腫癌組織 内 TSmRNA レベル に
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.
14.腫癌の T分類および N分類 と, 腫癌組織内 TSmRNA レベ
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各臨床病期 におけ る腫癌組織 内 TSmRNA レベル につ いて
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.
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1
は別の観点 か ら, TSは細胞増 殖 に関与 す る酵 素 で あ る
ことか ら, 腫癌の増殖能 を反映 す る指標 とな る可能性 が
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71,
p<0.
05)
.
あ り, 局所 再発や予後 との関連性 につ いての報告 も散見
され る7'. この よ うに TSと DPD の酵 素活性値 が個 々の
症 例 にお け る治療 戦略 に反映 され うる可能性 が示 されて
で TSmRNA レベルに有意差を認めなかった (
p-0.
1
41
)
.
16.腫痔の組織学的悪性度と腫癌組織内 TS mRNA レベルの相
関性について
Tabl
e5に各症例の組織学的悪性度スコアと腫壕組織内 TSお
よび DPD mRNA レベルの測定値を示す.この組織学的悪性度
スコアと TSmRNA値の相関性につき回帰分析を用いて検討を
r
-0.
71
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行った結果, 統計学的に有意な相関性を認めた (
0.
05)(
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.
17.臨床病期分頬と腫癌の組織学的悪性度の相関性について
各臨 床 病 糊 に お け る組 織 学 的 悪性 度 ス コ ア につ いて
Kr
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p-0.
236)
.
で組織学的悪性度スコアに有意差を認めなかった (
きてい る. しか しなが ら, 腺癌 が その大部 分 を占め る消
化 器癌 とは異な り, 扇平上皮癌 が その大部分 を占め る頭
FU の使 用頻 度 の高 さに もかかわ
頭 部癌 にお いて は, 5
らず, 腫癌組織 内 TSお よび DPD 酵 素活性 に関す る報
告 は末 だ多 くはな く, 測定結果の解釈 につ いて も議 論の
余地 が 多い もの と思 われ る. さらに, 頭頚 部癌 にお ける
組織 内 TSお よび DPD mRNA レベル に関 しては, その
母 集団調査 す ら進 んでいないの が現 状 で あ る.頭頚 部癌
の治療法選択 にあた り, その有効性 に関 しての指標 を持
つ ことは臨床上有益 で あると考 える.
この よ うな背景か ら, 本研究 において は, 頭頚部 扇平
上皮癌組織 における腫場 内 TSお よび DPD の酵素活性 を
考
察
頭頚 部癌 の治療 において, 5
FU は他 種 の抗 癌剤 との
測定 し, 種 々の臨床 的評価 因子 との関連 につ いて過 去の
報告 と対比 して検討 す るとともに, 本邦 において は今回
併川や放射線 との併用療 法 において頻用 されてお り, 必
初 めて施 行 可能 とな った, 頭頚 部扇平 上皮 癌組織 内 TS
要不可欠な薬剤 とな って い る. しか しなが ら, 日常臨床
お よび DPD mRNA の測定値 を報告 し, 特 に TSmRNA
上, 同 じ T分類, N 分類, 病期 分類 に属す る症例であっ
レベルの臨 床 的有 肝 性 (
頭 頚部癌治 療 にお いて有益 な指
FU の有効性 に差 が生 じることは しば しば経験
て も, 5
標 とな りうるか)につ いて検討 を行 った.
され る. また, 頭頚部癌の治療 において は, 放射線治療
本研究 に よ り, 頭頚部扇 平上皮癌 におけ る腫癌組織 内
の果たす役割 も大 きく, 特 に早期の喉頭癌症例 で は, 過
TSmRNA レベル は, 腫壕 の組織 学 的悪性 度 を反映 し,
常, 放射線化学療法が第-選択 とな り, 良好 な局所制御
局所再発や予後 との関連 を有す る可能性 が示唆 され , 顔
率 が得 られてい る. しか し, 一部の症例 ではあるが, 梶
頚 部癌の臨床 において非常 に有用 な指標 とな りうる こと
治治療 が行い得 た と判断 され た症例 で も局所 再発 を認 め
が判明 した. しか しなが ら, この腫癌組織 内 TSmRNA
ることを経験 す る. これ らの事実 は, 現 在 まで個 々の症
レベルの測 定 が実用化 され たの は ご く最近の ことで あ り,
例 にお け る多様 な腫癌特性 につ いての考慮 が十分 にな さ
本研究 は まず始めに腫癌組織 内 TSおよび DPD の酵 素活
れ ない まま, ある程度, 経験則 に基づ いて化学療法や放
性 が頭頚 部癌 の臨床 的評価 因子 と相 関性 を有 す るか否 か
射線療 法 が頭頚 部癌 に対 して行 われ て きた ことに起 因す
を検討 した.
るところが大 きいのではないか と思 われ る.
今回測定 を行 った 41例 の腫癌組織 内 TS酵 素活性 の 中
FU が
近年, 癌の個 別化治療 が求め られてい る 巾 , 5
8例 の DPD 酵素活性 の 中央値 と, 他臓
央値 , お よび 2
FU の標 的酵素
頻 用 され る消化 器癌の分野 において, 5-
器癌 での測 定結 果の 中央値 11'を 比 較 す ると, 頭頚 部 癌 で
FU の分解酵素 で あ る DPD が注 目 され,
で あ る TSと 5-
の腫癌組織 内活性 は, TS, DPD と もに 多臓 器癌 に比 べ
腫癌組織 内 にお け る両酵 素の活性 と 5FU の抗腫癌効果
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高値 を示す傾 向が あるもの と思 われ た (
との関連性 が 多数論 じられてい る. また, 抗腫癌効果 と
頭頚部癌 における組織 内 TS酵素活性 と DPD 酵素 活性
頭頚部扇平上皮癌における組織内 t
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141
の関連性 については, 両者の間には相関関係 が認め られ
を測定す る方法の利点 と して, 1)従来 か らの FFPE標
ない ことか ら, それぞれが独立 した因子で あると考 えら
本 か らの測定 が可能 なため, 腫癌 の臨床 評価 と併せ て
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の報告 と一致す る結果で あった. また,
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)少量組織 での測定が
両酵素活性 とも, 年齢, 性差 , 腫癌 の T分類 , N 分
可能で ある, 3)酵素活性 を測定す る方法 と違 い, 腺癌
類, 病期分類, 組織学的分化度 との相関関係 は認め られ
間質の性状 が反映 されない, とい う点が挙 げ られ る.実
なか った. これ までの頭頚部癌での報告 をみ ると, 本研
際, 酵素活性 を測定す るにはある程度の検 体量 が必要 と
究 と同様の結果 を述べているもの と して, Shi
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は,
なるが, 腫癌 自体が小 さい ことが頭頚部癌 では多 く, 測
免疫染色 による TS発現の検討 によ り, その発現の有無
定 に十分 な腫 癌組織 を得 られ ない ことも多い.従 って,
と年齢, 性別, 腫癌の T分類, N 分類, 病期分類 との
少量の組織 で測定可能 で あ る mRNA測定 の意味合 いは
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は, TS, DPD酵素活
相関 を認めず, また Et
大 きい.その ため, 今回, 頭頭部癌組織 内 TS お よび
性 と腫癌の臨床病 期分類 との相関 を認 めなか った と述べ
DPD mRNA レベルの測定 を行 うとともに, 臨床的評価
てい る.一方 , 異 な る結 果 を述 べ て い る もの と して,
因子や酵素活性値 と相関関係 があるのか につ いて検討 を
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は, 頭頚部癌 における腫癌 内 TS活性 は, T
行った.
分類, 病期分類が進むほど高値 とな り, リンパ節転移 を
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7症例 の腫 癌 組 織 内 に お け る TSmRNA レベル と
認め る群では転移 を認めない群 に比 し高値 をとったと報
DPD mRNA レベル には有意 な相関性 は認め られ なかっ
告 してお り, 山岡 ら15
'
は, T分類 と免疫染色 による TS
たが, これ は酵素活性 での結 果 と同様 で あった. また,
発現強度 に正の相 関関係 を認め るが, リンパ節転移 との
TSmRNA と TS酵素活性 , DPD mRNA と DPD酵素
相関関係 はない と報告 している. また, 腫壕の組織学的
活 性 につ い て も, 有 意 な相 関 は認 め られ な か っ た .
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nらは, 高分化
分化度 については, Shi
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も消化器癌 における TS, DPD の測定 に
関 して, 免疫 染色法, 酵素活性法, mRNA法の測定結
であるほ ど免疫染色 による TS発現強度 が有意 に高値 を
示 したと報告 している11,16'. この ように, 頭頚部癌 におけ
果 には相 関性 が ない ことを報告 して い る. この ことは,
る腫場内 TSおよび DPD酵素活性の結果の解釈やその意
腫癌 中 DPD 蛋 白発現 は転写後の レベルで制御 されてい
義 について も末だ統一 した見解 は得 られていない よ うで
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の報告 と一致す る も
るのではないか とす る Ta
ある.
の と考 えられ る.す なわち, 腫癌組織 内 における TSお
次 に, 腫癌内 TS酵素活性 と疾患の予後 との関連 につ
よび DPD の mRNA レベル と酵素活性 は, 同一の状態
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は頭頚部癌 で, Jo
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いてで あるが, Et
を反映 してい るのではな く, 別の因子 と して判断 しなけ
ら7,16'
は大腸癌 と頭頚部癌で, 腫癌内 TS が独立 した予後
ればな らない と考 えられた.
園子 とな りうることを報告 している.本研究で は, 観察
今回, 腫癌の組織学的悪性度や腫癌組織 内 TSmRNA
期間が短 いため, TS酵素活性 と長期的予後 との関係 に
レベル を測定 で きた症例 での治療後観察期間が短 いため,
ついては言及で きなかったが, 治療後 1年以 内に再発 も
5年生存率 を含め予後 につ いて は言 及す ることはで きな
しくは原病死 した群 と, 再発 を認 めなかった群 との間で
yneら10'
の早期喉頭癌症例の組織
い. しか しなが ら, Br
治療前の腫場内 TS酵素活性値 に有意差は認め られなかっ
学的悪性度 が, 放射線感受性 , 予後, 局所再発 に相 関
た. また放射線治療への奏効性 につ いて も有意差 は認 め
す るとの報告や, 胃癌での TSmRNAが高値の症例 にお
ず, 腫場内 TS酵素活性 は疾患 の短期的予後 には影響 し
いて, 有意 に予後 が不良 で あるとの報告 6'
などか ら, 頭
ageⅣ症例 におけ
ない結果であった. しか しなが ら, St
頚部癌 において も, 腫癌組織内 TSmRNA レベルが予後
る腺癌組織 内 TS酵素活性値 については, 統 計学的に有
予測因子にな りうる可能性 を秘めていると思われ る.
意ではない ものの, 多くの症例 において予後良好群で腫
本研究の結果, 頭頚部癌 における腫癌組織 内 TS酵素
癌組織 内 TS酵素 活性値 が低値 とな る傾 向 が認 め られ,
活性 と TS mRNA レベ ル は相 関 関 係 を認 め ず , TS
TSは DNA合成 に関与す る酵素で あることよ り, 腫癌
mRNA レベルが頭頚部癌の組織学的悪性度 と相関す るこ
増殖の観点か ら注 目すべ き因子であると考 え られた.
とが判明 し, 臨床 的 に有用 な指標 にな りうると考 えられ
腫癌組織 内 TSの測定方法 と しては, 免疫染色 による
た. この TSmRNA レベルの測定 により, 頭頚部の早期
方法, 酵素活性 を直接測定す る方法, mRNA を測定す
E染色 にて
癌の ように微小 な癌組織 しか採取で きず, 班-
る方法の 3つの方法が主 に報告 されて きたが, 酵素の定
組織学的悪性度 が評価 で きない標本 において もその悪性
量がで き客観的評価 が可能であるとい う点か ら, 後者の
度が推測で き, 治療 に反映 させ ることがで きるもの と考
2方法が主流 となっている.FFPE標本か らの mRNA抽
出 は近 年 開発 され た特 許 で あ り, 頭 頚 部 癌 に お け る
えられ た. また, 腫癌の臨床病期分類 は腫癌組織 内 TS
mRNA レベル とも組織学 的悪性度 とも相 関 しない とい う
mRNAの測定についての本報告 は本邦初 である.mRNA
結果 が得 られ, た とえ臨床病期分類 が早期で あって も,
142
中
村
腫癌組織内 TSmRNA レ ベ ル が 高 い 症 例 で は , 組織学的
悪 性 度 が 高 い と 判 断 し, 治 療 法 を 吟 味 す る 必 要 が あ る と
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考 えられ た.
謝
辞
稿 を終 えるに当た り, 懇切なる御指導, 御校 閲 を賜 りま した耳鼻咽
喉科学教室 山根英雄教授 に深甚 なる謝意 を捧 げ ます. また終始御指導,
御助言 を戴 きま した耳鼻咽喉科学教室 井口広義 講師 な らび に楠木
誠
助手に深謝いた します. また, 組織学 的悪性度評価 にあた り病理診断
所 見を御指導戴 きま した診断病理学教室 八幡朋 子助手 に深謝 いた しま
す.
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PowerPoint プレゼンテーション

メソスケール流体解析のための粒子法の開発

ソリブジン薬害発生の分子毒性学的メカニズムとジヒドロピリミジン

PDF - KAKEN - 科学研究費助成事業データベース

植物への有用遺伝子導入（安定高発現を目指して）

ニワトリα-トコフェロール輸送タンパク質が 鶏卵ビタミン E 量に及ぼす影響

角化嚢胞性歯原性腫瘍線維芽細胞における Ca²⁺刺激による - 九州大学

SART1 mRNA 導入単球由来樹状細胞を用いた抗原特異的 - 新潟大学

4. 組織の固定 / 包埋 / 前処理に関する質問

要旨を表示する

形狀のことなる炭酸カルシウム微粉のアズキゾウムシ成虫にたいする

平成21年度大学院入学試験問題 専門科目＜必修＞ - 東京大学大学院