Cell Functional Dyes

cell functional dyes
Cell Functional Dyes
新しい細胞機能解析色素
eBioscience New Releases
August | 2009
ミトコンドリア膜電位色素
JC-1はフローサイトメーター及び蛍光顕微鏡でミトコンドリアの膜電位を測るために
広く用いられている細胞膜透過性の色素です。
この色素は選択的にミトコンドリアに
入り込み、膜電位が上昇するに従い（80～100mv以上）可逆的に色が変わります。
こ
の性質は、JC-1が、膜の分極に際して可逆的に凝集し、結果として488nmで励起さ
れた場合の蛍光スペクトルが530nm(単量体から放出される)から590nm（凝集体か
ら放出される）にシフトすることによります。
これらのシグナルはそれぞれFITC用及び
PE/rhodamine用のフィルターにより検出されます。JC-1は蛍光が緑からオレンジに
変わるという点で定性的であり、前述のフィルターセットにより蛍光強度が測定できる
という点で定量的です。JC-1はアポトーシスの開始を示すために用いることができま
す。細胞がアポトーシスを起こすとミトコンドリア膜電位が減少し、JC-1はオレンジか
ら緑の蛍光に変化します
FEATURING
Mitochondrial Membrane
POTENTIAL Dye
 JC-1
Fluorescent Cell Viability
Dyes
 Calcein AM (UltraPure Grade)
 Calcein Blue AM
 Calcein Violet 450 AM
 Propidium Iodide
 7-AAD
JC-1
Calcium Sensing Dyes
 Fura-2 AM
10%
 Indo-1 AM
PE channel
PE channel
90%
 eFluorTM 514
Calcium Sensor Dye
CELL TRACKING
& PROLIFERATION Dye
FITC channel
 CFSE
FITC channel
Balb/cマウスの胸腺細胞を一晩氷上に静置（左）、
または一晩37℃で培養（右）
し、その後JC-1
(cat. no. 65-0851) 2.5ug/ mlで室温にて10分間染色します。
その後、Annexin V-APC (cat. no.
88-8007)で染色します。Annexin陽性細胞を解析に用いました。
ミトコンドリア膜電位色素
Product
MW (kDa) Application notes
JC-1
652.2
Excitation (nm)
アポトーシス時または代謝性ストレス細胞中に発生するミト 515
コンドリア膜電位の変化をフローサイトメトリーで検出する際
に使用する
Emission (nm)
Cat. No.
Size
529 & 590
65-0851-38 1 x 5 mg
Price
￥78,000
cell functional dyes
Fluorescent Cell Viability Dyes
Calcein　AMは疎水性と生細胞の細胞膜内に取り込みザー(405 nm)で励起します。生細胞と死細胞/アポトーシス
やすいアセトキシメチルエステル(AM)で作られている生細胞を識別するためAnnexin V または 7-AADと共に染色す
細胞を染色する緑色蛍光色素です。Calcein　AMはアセることを推奨します。Calcein色素は生細胞を染色し、
フロー
トキシメチルエステルが細胞質エステラーゼで加水分サイトメトリーまたは蛍光顕微鏡を用いて細胞数を積算す
解される時、高い蛍光を発し、その結果、親水性の高い蛍る際に有用です。
光性細胞結合calceinを放出します。死細胞は活性化エス
テラーゼが含まれていないため標識されません。Calcein Propidium iodide (PI) と7-amino-actinomycin D (7-AAD)
AMは毒性がないため短期間の細胞追跡研究に有用では細胞膜の完全性の測定に用いることが出来ます；損傷の
す。Calcein Blue AMはUV励起される Calcein AMの代替ある細胞のみがPI と 7-AADで染色されます。.
製品で、DAPI、Hoechst、AMCAと同様の励起波長を持ちま
す。Calcein Violet 450 AMはCalcein AMと同様violetレー
% of Max
% of Max
Calcein AM
Calcein Blue AM
Calcein Blue AM
Calcein AM
Calcein AM
7-AAD
Annexin V-APC
Calcein Blue AM
Calcein Violet 450 AM
Propidium Iodide
Annexin V-FITC
% of Max
Calcein Violet 450 AM
Annexin V-APC
Balb/cマウスの胸腺細胞を1 uM Calcein Violet 450 AM (cat. no. 650854)で30分間室温にて染色しました
（左）
。胸腺細胞は氷上で一晩静置
（陰影ヒストグラム）
または1 uMデキサメタゾンなし37℃で一晩培養（
紫）
または1 uMデキサメタゾンと37℃で一晩培養（青）
しました。
デキサ
メタゾンなしで一晩培養した胸腺細胞は生細胞と死細胞を識別するた
めにAnnexin V-APC (cat. no. 88-8007)で染色しました。全ての細胞を
解析に用いました。
Annexin V-FITC
Balb/cマウスの胸腺細胞を1 uM Calcein Blue AM (cat. no. 65-0855)
で30分間室温にて染色しました（左）。胸腺細胞は氷上で一晩静置（陰
影ヒストグラム）
または1 uMデキサメタゾンなし37℃で一晩培養（紫）
または1 uMデキサメタゾンと37℃で一晩培養（青）
しました。
デキサメタ
ゾンなしで一晩培養した胸腺細胞は生細胞と死細胞を識別するために
Annexin V-APC (cat. no. 88-8007)で染色しました。全ての細胞を解析
に用いました。
Calcein Violet 450 AM
Balb/cマウスの胸腺細胞を12.5 nM Calcein AM (cat. no. 65-0853)で
30分間室温にて染色しました
（左）。胸腺細胞は氷上で一晩静置（陰影ヒ
ストグラム）
または1 uMデキサメタゾンなし37℃で一晩培養（紫）
または
1 uMデキサメタゾンと37℃で一晩培養（青）
しました。
デキサメタゾンな
しで一晩培養した胸腺細胞は生細胞と死細胞を識別するために7-AAD
(cat.no.　00-6993)で染色しました。全ての細胞を解析に用いました。
Propidium Iodide
Propidium Iodide
マウス胸腺細胞を単細胞懸濁液にし、培養液のみ37℃で一晩培養（左）
または1 uMデキサメタゾンと37℃で一晩培養（右）
しました。細胞を収
集し、Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit (cat. no. 88-8005) と
Propidium Iodide Staining Solution (cat. no. 00-6990)を用い染色し
ました。
cell functional dyes
Fluorescent Cell Viability Dyes
Product
MW (kDa) Application notes
Calcein AM (UltraPure
Grade)
994.8
Calcein Blue AM
465.4
Calcein Violet 450 AM
600
Propidium Iodide
668.4
7-AAD
1270.4
Excitation (nm)
Emission (nm)
Cat. No.
Size
Price
生細胞の標識；顕微鏡及びフローサイトメト 495
リーで適切なフィルターと共に使用する際
に最適
515
65-0853-78
20 x 50 µg ￥58,000
65-0853-39
1 x 1 mg
￥39,000
生細胞の標識；顕微鏡及びフローサイトメト 360
リーで適切なフィルターと共に使用する際
に最適
生細胞の標識；顕微鏡及びフローサイトメト 408
リーで適切なフィルターと共に使用する際
に最適
死細胞から生細胞を区別する際に使用する； 536
フローサイトメトリーに最適
死細胞から生細胞を区別する際に使用する； 555
フローサイトメトリーに最適
445
65-0855-39
1 x 1 mg
￥23,000
450
65-0854-39
1 x 1 mg
￥36,000
617
00-6990-50
2.0 ml
￥13,000
655
00-6993-50
2.0 ml
￥12,000
Calcium Sensor Dyes
細胞内カルシウムは細胞のシグナリングにおいて重要な二法においては時間経過ごとに測定が可能であり、二種の発
次メッセンジャーです。蛍光カルシウム試薬を用いて細胞内光波長の割合も示すことができます。この二種の発光比率
の遊離カルシウムの変化を測定することが可能であれば、の最適化をはかるため、非結合Indo-1の蛍光は485nm強
正常と疾患の進行におけるカルシウムのシグナリングの解（525 nmが最適）のフィルターを用いて収集する必要があ
明が一段と進みます。eBioscienceは3種類の新しいカルシります。
この時、結合Indo-1の蛍光は400nm以下のフィルタ
TM 514 Calcium Sensor
ウム色素 Fura-2、Indo-1、eFluor
ーを用いて収集します。吸収波長のピークは˜350nmです
Dyeをご提供いたします。これらの製品は疎水性と生細胞が、励起波長のピークはカルシウムと結合していると˜400
の細胞膜内に取り込みやすいアセトキシメチルエステル nmで、非結合は˜480 nmです。
(AM)で作られています。一旦細胞に入るとアセトキシメチル
フロー
(AM)基が細胞のエステラーゼにより除かれます。Fura-2と eFluorTM 514 Calcium Sensor Dyeは蛍光顕微鏡、
TM
サイトメトリー、蛍光分光学および蛍光マイクロプレートレ
Indo-1はUVで励起できるカルシウム色素ですが、eFluor
514 Calcium Sensor Dyeは488 nmで励起されます。
ーダーを使用して細胞内の遊離カルシウム濃度の変化をモ
ニターするために使用される細胞膜透過性色素です。一旦
Fura-2はデジタルイメージング解析仕様の比率測定描画 eFluorTM 514 Calcium Sensor Dyeが細胞内に入ると、細胞
(ratiometric imaging)顕微鏡で好んで用いられる色素で、のエステラーゼはAM基を切断し、˜520 nmで蛍光を発する
特に励起波長の変化がいくつかの蛍光波長の同時測定よ細胞膜非透過性色素を産出します。eFluorTM 514 Calcium
り実用的である場合に好まれています。Fura-2がカルシウ Sensor Dyeは、Fluo-3およびFluo-4のように、可視光励起カ
ムに結合すると、励起スペクトルは短波長側、300-400nm ルシウム標識のうちで一般に用いられている色素ですが、
と明るさで優れています。
カル
に遷移しますが、蛍光スペクトルのピークは510nmの近辺細胞内の取り込み（室温でも）
に留まったままです。　これと比較し、Indo-1 AMは一つのシウムと結合すると発光波長と励起波長に大きな変化がな
励起で2つの発光波長を持つカルシウム色素です。非結合いため、比率測定に用いることはできません。遊離カルシウ
Indo-1の発光ピークは485nmです。カルシウムが結合するムの増加はeFluorTM 514 Calcium Sensor Dyeの蛍光強度
と発光ピークは410nmに下がります。フローサイトメトリーの増加として観察されます。
Calcium Sensor Dyes
Product
MW (kDa) Application notes
Fura-2 AM
Indo-1 AM
1001.8
1009.9
eFluor ™ 514 Calcium Sensor Dye
1100
Excitation (nm)
300-400
生細胞のRatio-imaging microscopy
蛍光顕微鏡、
フローサイトメトリー、蛍光分 346
光光度計、蛍光マイクロプレートリーダーを
用いる比率測定指示薬
蛍光顕微鏡、
フローサイトメトリー、蛍光分 490
光光度計、蛍光マイクロプレートリーダー
Emission (nm)
Cat. No.
Size
Price
510
~410 (Ca2+ bound)
~485 (Ca2+ free)
65-0858-39
65-0857-78
1 x 1 mg
20 x 50 µg
￥50,000
￥39,000
514
65-0859-39
1 x 1 mg
￥83,000
65-0859-70
10 x 50 µg
￥63,000
cell functional dyes
細胞追跡と増殖解析用色素
CFSE [5-(and 6)-Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl
胞内エステラーゼが酢酸基を切断し、蛍光カルボキシフル
ester] は、細胞追跡と増殖の研究で幅広く使用されます。
オセイン分子となります。Succinimidylエステル基は、細胞
また、CTL 活性測定と細胞運動研究にも使われます。CFSE
内タンパク質に色素を架橋するアミンに反応します。細胞分
は容易に、無傷の細胞膜を通過します。細胞内に入ると、細
裂はCFSEの蛍光強度の半分として測定されます。.
% of Max
CD8 eFluorTM 450
CFSE
Thy1.1 PerCP-Cy5.5
CFSE
in vivoにおけるＴ細胞レセプター遺伝子導入、OVA反応性 OT-Ⅰ細胞のOVA反応下での細胞分
裂。PBSでの免疫ではありません
OT-Ⅰマウスのリンパ節細胞を1 µM CFSE (cat. no. 65-0850)で標識し、C57BL/6マウスに導入
しました。
マウスをOVA またはPBSで免疫しました。3日後、脾臓細胞をPerCP-Cy5.5 anti-mouse/
rat Thy1.1 (cat. no. 45-0900)とeFluorTM 450 anti-mouse CD8 (cat. no. 48-0081)で染色
し、OT-I 細胞にゲートをかけました
（左）。OT-I ゲート(CD8+Thy1.1+) の細胞で細胞分裂を解析し
ました
（右）。OVAで免疫したマウスではCFSEの減少している蛍光のピークとして測定され（紫のヒ
ストグラム）
、PBSで免疫したマウスでは細胞は分裂せず明るいピークとなります（青ヒストグラム
Cell Tracking & Proliferation Dye
Product
MW (kDa)
Application notes
Excitation (nm)
Emission (nm)
Cat. No.
Size
Price
CFSE
557.4
CFSE は、
フローサイトメトリーで細胞
の追跡及び増殖研究を行う際に使用
する
494
521
65-0850-84
5 x 500 µg
￥32,000
アフィメトリクス・ジャパン株式会社
〒105-0013 東京都港区浜松町1-24-8 ORIX浜松町ビル7F
TEL：03-6430-4020 FAX：03-6430-4021

Download Report