TaqMan hPSC Scorecard Panel

TaqMan hPSC Scorecard Panel
および解析ソフトウェア
多能性幹細胞
（PSC）
の
三胚葉への分化能の定量解析
多能性幹細胞（ PSC）の可能性を最大限に引き出すには、個々
の細胞間に内在するバラツキを、よりよく理解する必要がありま
す。Applied Biosystems™ TaqMan® hPSC Scorecard™ Panel
とその付属ソフトウェアは、そのバラツキをシンプルかつ一目でわ
かるようにスコア化する、遺伝子発現解析とバイオインフォマティ
クスが統合されたリアルタイム定量PCRアッセイです。本アッセ
イでは、フィーダーまたはフィーダーフリーで培養されたヒト ES
細胞株とヒト iPS 細胞株両方について、三胚葉への分化能を迅速に
評価します。
多能性を評価する現在の主流の解析方式は手間やコストがかかり、
明確な結果が得られないこともあります。hPSC Scorecard アッセ
イは、次のような利点をもたらします。
• テラトーマ形成試験よりも迅速かつ低コストで三胚葉への分化
能を評価
• ES 細胞株と iPS 細胞株のリファレンスパネルに対する確実な
ベンチマーキング
• 初期胚葉の特異化前および最中のPSCの標準化された遺伝子
発現プロファイリング
1 回の実験で全体の遺伝子特性を評価
TaqMan hPSC Scorecard Panelは、便利で安定した乾燥状
態で提供され、あらかじめ Primer と Probe がプレーティング
されているアッセイのため時間の無駄がありません。Applied
Biosystems™ TaqMan® Master Mix を対象の cDNA に添加
して、
マルチチャネルピペットでhPSC Scorecarプレートに分注
するだけです。サンプルごとに、多能性遺伝子 9 種類、系統特異的
遺伝子 74 種類、ハウスキーピングおよびコントロール遺伝子 10
種類を含む、計 93 遺伝子をテストします。384 ウェルプレート
フォーマットでは、1枚で 4 サンプルをランできます。パネルの内容
は論文[1,2]に基づくもので、複数の ES 細胞株および iPS 細胞株
に対してバリデーション済みです。この研究では、多能性に関連す
る主要遺伝子の広範囲な発現レベルが特定され、遺伝子発現範
囲に対する iPSC の遺伝子活性を測定することによって、特定の細
胞系統への分化能に関して、正確にスコアリングできます。
7機種のリアルタイムPCRシステムに対応
Real-Time
StepOnePlus PCR
System
7900HT Fast Real-Time PCR System
QuantStudio™ 12K Flex
QuantStudio™ 7
ViiA™ 7
StepOnePlus™
QuantStudio™ 6
7900HT
7500 Fast
TaqManhPSCScorecardPanelによるPSCの評価には、上記機器をご使用ください。装置のセットアップガイドおよびその他詳細については、
www.thermofisher.com/scorecard をご覧ください。
“ 幹細胞研究とゲノミクスは、ここ数年間で並行して急速な進歩を遂げました。両研究分野を組み合わせることで
PSC キャラクタリゼーションのより効果的で標準化された方法が実現し、iPS 細胞のアプリケーションと効率の大幅な
改善につながります。”
̶Alex Meissner博士, ハーバード大学幹細胞再生生物学部准教授
2
リファレンススタンダードとの比較
同じ研究施設内はもちろん他施設との幹細胞に関する共同研究が
三胚葉への分化能を持つクローンを同定
Softwareは、当社独自のクラウドベース解析ソフトウェアです。バ
TaqMan hPSC Scorecard Panelは、ランダムに分化した胚様体
（EB）サンプルを解析に含めることができるリファレンススタン
ダードを備えた唯一の PSC キャラクタリゼーションツールです。
対象の細胞株の三胚葉（内胚葉、中胚葉、外胚葉）の 1 つ以上に
リデーション結果のグラフ、表、レポートの表示やエクスポートを
対する傾向やバイアスを判断することが可能です。本パネルは、
行うことができます（図1∼3）。すべて同一のリファレンススタンダ
最短 7 日目の EB サンプルからの系統バイアスを正確に予測します。
世界中で進む中、リファレンススタンダードの必要性はますます高
まっています。Applied Biosystems™ hPSC Scorecard™ Analysis
ードに対して評価されるため、ユーザー間のデータ比較が容易にな
り、経時的な変化や条件ごとの変化を簡単にモニタリングできま
す。本ソフトウェアは、適合するリアルタイムPCRシステムからの
出力ファイルに対応し、無償でご利用いただけます。
5
 EB1_Proto3_130430.eds
4
 H9-ESC-...50-Day0
Selfrenewal
Algorithm score
3
Ectoderm Mesoderm Endoderm
 H9-EB-Day7
Selfrenewal
Ectoderm Mesoderm Endoderm
2
1
0
-1
-2
-3
-4
Self-renewal
H9-ESC-...50-Day0
Ectoderm
H9-EB-Day2
Mesoderm
H9-EB-Day4
Endoderm
H9-EB-Day7
図1. hPSC Scorecard Analysis Softwareでは、バリデーション結果のグラフ、
表、レポートの表示やエクスポートが可能
未分化リファレンスセット(グレーのボックスおよびウィスカ―）に対するサンプルス
コア（カラ―）のボックスプロットの表示
図2. 多能性および系統マーカーの遺伝子発現結果を一目でわかるような形で表示
図3. 各種遺伝子発現量について、未分化リファレンススタンダードと比較した相対的な倍差を色別で表示
“我々は hPSC Scorecard アッセイを使用することに決めました。なぜなら、
非常に定量的な結果が得られるからです。
また、
多能性の評価に使用されている標準的なアッセイよりも迅速でコストも抑えられます。”
̶Jennifer Moore 博士, ラトガ―ス大学 RUCDR NIMH 幹細胞センター
3
TaqMan hPSC Scorecard Panel 解析の流れ
1. 測定ニーズおよび使用機種に応じてアッセイを選択
• 96-well Fast または 384ウェルフォーマットから選択
• キット品またはプレートから選択̶キット品にはアッセイプレートの
他にマスターミックスが付属
2. hPSC Scorecard アッセイデータの収集
Create new project…
X
Name:
Test
• 未分化細胞および/または胚様体由来のcDNAを調製
Instrument Type:
QuantStudio® 12K Flex Real-Time P…
• 乾燥状態でApplied Biosystems™ TaqMan® Gene
Expression Assays（Primer と Probe）がプリセットされて
いるhPSC Scorecard アッセイプレートにcDNAを添加
Block:
384 Wells
Description:
Enter text
OK
Cancel
• 適合する機器システムでリアルタイムPCRを実施
Scores are a statistical comparison of the expression profiles of the sample and the undifferentiated reference set
3. hPSC Scorecard データ解析の開始
• プロジェクトを作成
• 適合するリアルタイムPCR装置から出力したデータをアップロード
• 結果をリファレンススタンダードと比較（サンプルスコアは右側）
Sample name
Self-renewal
Ectoderm
Mesoderm
Endoderm
Undiffe…H9 ESCs
0.71
0.15
–0.49
–0.56
Day 2 H…Bodies
–0.26
0.97
–0.08
–0.08
Day 4 H…Bodies
–1.92
2.18
1.22
0.04
Day 7 H…Bodies
–3.25
2.35
2.09
0.63
Gene expression relative to the reference standard
Upregulated
x > 1.5
Downregulated
1.0 < x ≤ 1.5
0.5 < x ≤ 1.0
–0.5 ≤ x ≤ 0.5
–1.0 ≤ x < –0.5
–1.5 ≤ x < –1.0
x < –1.5
Ordering information
製品名
サイズ
製品番号
価格
TaqMan hPSC Scorecard Kit, Fast 96-Well
2 x 96-Well
A15871
￥ 96,000
TaqMan hPSC Scorecard Panel, Fast 96-Well
2 x 96-Well
A15876
￥ 70,500
TaqMan hPSC Scorecard Kit, 384-Well
1 x 384-Well
A15872
￥ 89,000
TaqMan hPSC Scorecard Panel, 384-Well
1 x 384-Well
A15870
￥ 50,600
hPSC Scorecard™ Panel の詳細はこちらをご覧ください。
www.thermofisher.com/scorecard
− サポートリソースのご利用について −
TaqMan hPSC Scorecard Panel および解析ソフトウェアの使用を始める際に役立つさまざまなリソースをオンラインでご利用いただけます。
詳細はこちらをご覧ください。
www.thermofisher.com/scorecardhelp
参考文献
1. Bock C, Kiskinis E, Verstappen G et al. (2011) Reference maps of human ES and iPS cell variation enable
high-throughput characterization of pluripotent cell lines. Cell 144(3):439 –452.
2. Tsankov AM, Akopian V, Pop R et al. (2015) A qPCR Scorecard quantifies the differentiaiton potential of
human pluripotent stem cells. Nat Biotechnol 33(11):1182–1192.
研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続上での使用はできません。
記載の社名および製品名は、弊社または各社の商標または登録商標です。
For Research Use only. Not for use in diagnostic procedures. © 2016 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved.
All trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific and its subsidiaries unless otherwise specified.
TaqMan is a registered trademark of Roche Molecular Systems, Inc., used under permission and license.
記載の価格は2016年7月現在のメーカー希望小売価格です。消費税は含まれておりません。
価格、製品の仕様、外観、記載内容は予告なしに変更する場合がありますので予めご了承ください。
標準販売条件はこちらをご覧ください。www.thermofisher.com/jp-tc
サーモフィッシャーサイエンティフィック
ライフテクノロジーズジャパン株式会社
本社：〒108-0023 東京都港区芝浦 4-2-8
テクニカルサポート
オーダーサポート
営業部
0120-477-392
TEL：03-6832-6980
TEL：03-6832-9300
facebook.com/ThermoFisherJapan
www.thermofisher.com
[email protected]
FAX：03-6832-9584
FAX：03-6832-9580
@ThermoFisherJP
販売店
GIB071-A1607OB

Download Report