新プロトコルについて ECOS™ Competent E. coli DH5α, JM109 Ⅰ 製品説明 本品は大腸菌のコンピテントセルです。アンピシリンセレクションの場合、本品はプレーティング前の回復ステップである SOC 培地での約 1 時間の培養が不要なため、高速形質転換法【1 分間プロトコル】や高効率迅速形質転換法【6 分間プロトコル】で形 質転換を行うことができます。この度、新たに【１分間プロトコル】からヒートショックを除いた【超速・新プロトコル】をご用意しまし た。42℃のウォーターバスを用意する手間もなくなり、更に簡単で迅速な操作が可能です。 Ⅱ ECOS™ 超速・新プロトコル 本プロトコルは、薬剤にアンピシリンを使用する場合にのみ有効です。薬剤耐性機構の違いにより、薬剤にカナマイシンやテト ラサイクリンを使用する場合には形質転換効率が低下しますので、熱処理後に培地を添加し回復培養を行ってからプレートに移 して下さい（詳細は製品添付マニュアルをご参照下さい）。 ① 氷上でコンピテントセルを融解する。 （＊1） 水道水や室温のウォーターバスでコンピテントセルを素 早く融解することも可能です。その場合は、約 1/3 量を （＊1） 融解した時点で DNA を添加して下さい。完全に融解さ せた場合には形質転換効率が約 1/3 に低下することが ② 直ちに、4℃または氷上で冷却したプラス ミド溶液またはライゲーション溶液を添加 する。（＊2） あります。 （＊2） 添加する DNA 溶液の量はコンピテントセルの容量の 5%以下にして下さい。5%以上の DNA 溶液を添加した 場合には、形質転換効率が低下することがあります。 （＊3） 1 秒間のボルテックスは形質転換効率に悪影響を与え ③ 直ちにボルテックスで１秒間撹拌する。 ません。ECOS™ Competent E.coli はボルテックスに 耐えられるように調製されています。 （＊3） （＊4） セレクションに使用する薬剤は以下の濃度で使用する ことをお勧めします。 ④ 直ちに全量を LB プレートに移し均一に塗 布する。（＊4） アンピシリン 50 µg/ml 薬剤濃度が高すぎる場合には、形質転換効率が低下 する場合があります。また薬剤濃度が低すぎる場合に は、サテライトコロニー数が増加する場合があります。 ⑤ 37℃で 12～16 時間インキュベートする。 お試し後は、評価アンケートへのご回答をお願いいたします。 左記 QR コードを読み込むか、弊社ホームページの下記 URL から キャンペーン特設ページにアクセスして下さい。 http://www.nippongene.com/siyaku/info/topics/campaign/ecos-reviewer.html
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