血液学的検査項目で使用する外部精度管理試料の作製方法の検討

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血液学的検査項目で使用する外部精度管理試料の作製方法の検討
◎永渕大輔 1)、松永茉利子 1)、中島真由美 1)、原めぐみ 1)、内田尚美 1)
佐賀県医師会成人病予防センター 1)
【目的】
③CPDA 液希釈液試料で経時的に減少したが、
佐賀県医師会臨床検査精度管理事業で使用
他の希釈液では一定、もしくは増加する結果
する血球は、2 名のボランティア血を血液分析
となった。WBC は、全個体で経時的に減少し
装置用の希釈液（Sysmex 社：セルパックⅡ）
たが、その変化は一律ではなく、減少するタ
で調整している。血算用の試料作製について
イミングや変化量は個体により異なっていた。
は「血球の経時的変化には個体間差があり、
PLT は、CPDA 液以外の希釈液に、1 名のみ経
試料作製時の希釈液は工夫が必要」との報告
時的な減少がみられた。
がある。試料としての安定性に不明な点があ
【考察】
るため、外部精度管理試料作製の方法につい
各希釈液間に明らかな差は認めなかったが、
て検討を行った。
比較的緩やかな経時的変化をみせたのは④血
【検討内容】
漿希釈試料であった。血漿は現行よりも安定
対象項目は、赤血球数（RBC）、白血球数
した希釈液であることが推察される。
（WBC）、血小板（PLT）、ヘモグロビン
③CPDA 液希釈試料では、Ht 値が経時的に減
（Hb）、ヘマトクリット値（Ht）。希釈液は
少したため、精度管理事業で使用する未調整
①生理食塩水、②リン酸緩衝生理食塩水、
の試料は、集計結果に影響している可能性が
③CPDA（輸血用パック内の赤血球保存液）、
考えられた。WBC の変化を男女別、年代別に
④ボランティアの血漿、⑤セルパックⅡ（現
比較すると、20 代男性と、20 代女性の
行法）を用意し各希釈液で濃度調整後、経時
WBC は緩やかに減少したが、その他の個体は、
的変化について調査した。提供者は男 2 名
一定期間安定しており、WBC の安定性は、年
（共に 20 代）、女 2 名（20 代、50 代）の計
齢、性別に関係はなく、個体差によるものと
4 名。
考えられた。PLT は、経時的に凝集が起こっ
【検討方法】
たため、減少したことが推測された。
精度管理事業では 400ml 輸血パック
【まとめ】
（CPDA 加）に採血し、EDTA-3K 溶液を加え
結果より、希釈液に血漿を用いることで安
た後、一方の血液をセルパックⅡで濃度調整
定した試料提供ができることが考えられたが、
を行う。今回は、EDTA-2Na 採血管で複数本採
大量の血液が必要となり、血液提供者の負担
取後、輸血パックと同じ比率になるように
が大きくなる。今回の検討結果を基に、作成
CPDA 液を混和し、ベース血とした。これを、
方法を工夫する必要がある。個体間差におい
各希釈液を用いて濃度調整後、多項目自動分
ては、WBC、PLT について経時的変化に個体
析装置 Sysmex 社製「XE-5000」を使用し、
間差がみられたため、試料を作成する際には
8 日間連続で測定を行った。
事前に調査を行う必要があると思われる。
【結果】
RBC、Hb は希釈液、個体に関わらず、変化は
連絡先：0952-31-8832(内線：632)
認められなかった。Ht は全個体において、
[email protected]
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LPIA ジェネシス D ダイマー試薬の基礎的検討
◎平島史隆 1)、出口稔 1)、納戸一美 1)、後藤さおり 1)
福岡市医師会臨床検査センター 1)
【はじめに】
あり、良好な結果であった。
D ダイマーは線溶系マーカーであり、凝固線
６)プロゾーン：PZ 試料を用い、倍々希釈にて
溶亢進の際に増加する。DIC の診断や深部静脈
プロゾーンを確認した。直線性範囲内までの
血栓症（ＤＶＴ）の除外診断、血栓症の診断
測定値低下がなく、516μg/mL まで Antigen
および経過観察の指標として有用な検査項目
Excess(抗原過剰エラー)が付加されることを確
である。今回、2015 年 10 月に LSIﾒﾃﾞｨｴﾝｽよ
認した。
り発売された LPIA ジェネシス D ダイマーの基
７)共存物質の影響：干渉チェック・ A プラス
礎的検討を行う機会を得たので報告する。
（ｼｽﾒｯｸｽ）を用いて共存物質の影響を確認し
【試薬と機器】
た結果、ビリルビン F、ビリルビン C は
①　検討試薬および測定装置：LPIA ジェネシ
50mg/dL まで、溶血ヘモグロビンは
ス D ダイマー（LSIﾒﾃﾞｨｴﾝｽ)、全自動血液凝固
500mg/dL まで、乳びは 5000 ホルマジン濁度ま
測定装置 CS-5100(ｼｽﾒｯｸｽ)
で測定値に影響は認められなかった。
②　対照試薬および測定装置：エルピアエー
８)相関性：患者血漿 50 例を用い、対照試薬を
ス D-D ダイマーⅡ、全自動免疫血清検査シス
x として相関を求めた結果、回帰式は y=0.981x
テム LPIA-NV7（LSIﾒﾃﾞｨｴﾝｽ)
+ 0.046、相関係数 r は、0.995 であった。
【方法および結果】
【考察】
１)同時再現性：コントロール血漿 2 濃度を
今回、CS-5100 を用いての LPIA ジェネシス
20 回測定した CV は 0.66～2.00%であった。
D ダイマーの基本性能評価を行った。再現性・
２)日差再現性：コントロール血漿 2 濃度につ
希釈直線性・検出限界・正確性・プロゾー
いて、初日のみキャリブレーションを実施し
ン・干渉物質の影響・相関において良好な結
10 日間測定した結果の CV は 1.45～2.62%であ
果が得られ、日常の臨床検査に有用と考えら
った。
れた。
３)希釈直線性：高値試料及び、濃度調整試料
また今回、検体がなく検討が出来なかったが、
を用いて、10 段階希釈における希釈直線性を
LPIA ジェネシス D ダイマーは、対照試薬（エ
確認した。70μg/mL 付近までの直線性が確認さ
ルピアエース D-D ダイマーⅡ)と比較して、採
れた。
血管内凝固の影響を受けにくい試薬である。
４)検出限界：濃度調整サンプルを作製し、各
検査センターは採血管内凝固の際、再採血の
濃度 10 回測定した結果、０濃度の平均値＋
取り直しに時間がかかるため、検査センター
2SD と 0.257μg/mL の平均値－2SD は重ならな
において LPIA ジェネシス D ダイマーは有用な
かった。
試薬であると考えられる。
５)正確性：コントロール物質を用い、10 回測
定を行い、表示値の中央値に対し乖離の差を
持って評価した。乖離率は 3.4％であった。メ
ーカー添付文書内に記載されている数値内で
連絡先　092-852-1506 (内線 2672)
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血小板の 4℃と 22℃保存下における血小板膜糖蛋白の変化
グリチルリチン酸（GDP）＋ビタミン E（VE）の添加効果
◎河野克海 1)、福島摩紀 1)、大館拓真 1)、立木里奈 1)、菊池亮 2)
熊本保健科学大学保健科学部医学検査学科 4 年生 1)、熊本保健科学大学 2)
【目的】
の抗原量（平均蛍光強度）をフローサイトメ
我々の血小板濃厚液（PC）の長期保存に関
ーター（FCM）で測定した。
するこれまでの研究で（１）保存経過に伴い
【結果および考察】
血小板細胞膜のスポンジ状変化と細胞内顆粒
22℃48 時間保存後では無添加と GDP+VE 添
の脱顆粒などの変性が起こることを電顕像で
加の両群とも CD42b 抗原量が有意に低下する
観察、（２）4℃振盪保存 PC は 22℃振盪保存
血小板と低下しない血小板の二相性となった。
に比べて血小板凝集能が高く保持されている
一方、４℃保存では二相性にならず、
こと、（３）細胞膜保護作用とアラキドン酸
CD42b 抗原量は軽度の低下であった。4℃
代謝抑制作用を併せ持つグリチルリチン酸二
GDP+VE 添加群では抗原量は低下せず二相性
カリウム（GDP）を 22℃振盪保存 PC に添加す
もみられなかった。CD61 抗原量は有意な変化
ると、血小板凝集能が高く保持される PC 例が
はみられなかった。GPⅠbα（CD42b）は
あることなどを明らかにしてきた。一方、日
vW 因子受容体として機能しており、血小板の
赤中央研究所の一杉らは、第 63 回輸血細胞治
コラーゲンへの粘着に関与するため、22℃保存
療学会総会（平成 27 年）で、『細菌汚染防止
血小板はコラーゲン粘着に何らかの影響があ
の観点からは低温保存が望ましいが、冷蔵保
るのかも知れない。
存血小板は輸血後の生体内寿命が短いとの報
【連絡先】
告があり、冷蔵保存血小板の質的変化の可能
[email protected]
性がある』として、PC をポリプロピレンチュ
TEL:096-275-2137
ーブ（PPﾁｭｰﾌﾞ）に入れて 4℃で 48 時間静置保
存した後に 37℃に加温すると、血小板細胞膜
糖蛋白 GPⅠb 複合体の一部が切断を受けてい
ることが考えられ、冷蔵血小板の細胞膜成分
の質的変化が生体内寿命に影響を与えている
可能性が指摘された。我々の研究で用いてき
た譲渡 PC は、献血者の血清 ALT 値が 61 以上
の「ALT 落ち PC」であったが、平成 28 年
4 月から 101 以上への見直しがあり、譲渡が困
難となった。よって、今回の検討では健常者
から ACD-A 加採血した多血小板血漿（PRP）
を PPﾁｭｰﾌﾞ4 本に分注し、無添加対照（PBS 添
加）、GDP（3mM ）+ ビタミン
E（0.4mg/mL）添加で 4℃と 22℃で 48 時間振
盪保存した後 37℃にて 30 分間加温し、血小板
膜糖蛋白 GPⅠbα（CD42b）と GPⅢa（CD61）
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血小板凝集能とＡＢＯ式血液型別ＶＷＦ抗原・活性との関係について
◎福迫日向 1)、松井優美 1)、吉田優奈 1)、米村綾那 1)、相原隆文 2)
美萩野臨床医学専門学校学生 1)、美萩野臨床医学専門学校 2)
【目的】
ＤＰ、ＣＯＬＬ凝集能は小、中、大凝集塊が
血液ゼミでは、血小板凝集能、特に自然凝集
全凝集塊に占める割合により－2～＋2 の 5 段
について基礎検討を行って来たが、今回は、
階 Class 評価、またＲＩＳＴ凝集能は最大凝集
ＡＢＯ式血液型別に Von Willebrand Factor
率にて評価した。
Antigen、Activity（以下ＶＷＦ抗原、活性）と
３．Von Willebrand Factor Antigen、Activity
ＡＤＰ、コラーゲン（ＣＯＬＬ）、リストセ
test KIT：凝集能に用いたＰＰＰの残り 50μL
チン（ＲＩＳＴ）凝集能を測定し、血小板凝
を ELISA 法にて測定（参考値 75％～150％）
集能との関連性について検討を行った。
【結果】
【対象・機器・試薬】
①学生 20 名の自然凝集陽性者は３名（陽性率
１．対象：本校学生 20 名（ＡＢＯ式血液型各
15％）②Ａ型血液のＶＷＦ抗原平均値は 96.8
5 名、平均年齢 20.6 歳）、および教職員 9 名
％、ＶＷＦ活性平均値は 76.7％、自然凝集能
（自然凝集既陽性者、平均年齢：50.8 歳）
平均値は 7809、ＡＤＰ凝集能平均値 0.17、Ｃ
２．機器：血小板凝集能測定装置ＰＡ－20（
ＯＬＬ凝集能平均値 0.67、ＲＩＳＴ凝集能平
興和株）
均値 89.5％③同様にＢ型のＶＷＦ抗原は 100.
マイクロプレートリーダー：ＣＨＲＯＭＡＴ-
6％、活性 81.4％、自然凝集能 12055、ＡＤＰ
Ｅ　ＭＯＤＥＬ4300（プラクティカル株）
凝集能 0、ＣＯＬＬ凝集能 0、ＲＩＳＴ凝集能
３．試薬：真空採血管は日本ＢＤ社、血小板
86.4％④Ｏ型ＶＷＦ抗原は 33.6％、活性 24.6
凝集惹起物質としてＡＤＰ２μＭ（エム・シー
％、自然凝集能 6482、ＡＤＰ凝集能 0、ＣＯ
・メディカル）、コラーゲン１μｇ／ｍｌ（エ
ＬＬ凝集能 0、ＲＩＳＴ凝集能 85.4％⑤ＡＢ
ム・シー・メディカル）、リストセチン 12mg
型ＶＷＦ抗原は 88.2％、活性 55.2％、自然凝
／ml（ナカライテスク）を用いた。
集能 19885、ＡＤＰ凝集能 0、ＣＯＬＬ凝集能
４．Von Willebrand Factor Antigen、Activity
0.2、ＲＩＳＴ凝集能 94.8％であった。
test KIT：ナカライテスク（株）
【考察】
【方法】
①惹起物質としてＡＤＰ、ＣＯＬＬ、ＲＩＳ
１．検体採取：真空採血管にてクエン酸Ｎａ
Ｔを用いた凝集能と血小板自然凝集及び各血
血として 5ｍｌ採血。
液型との間には関連性は認めなかった。
２．血小板凝集能測定
②ＶＷＦ抗原・活性と血小板自然凝集及び各
①多血小板血漿(ＰＲＰ)は 150G,10 分、乏血
血液型との間では、Ｏ型血液と負の相関を示
小板血漿(ＰＰＰ)は 2000G,10 分遠心分離。
し、自然凝集陰性者との間にもやや相関を認
②ＰＲＰをＰＰＰで血小板数 25 万／μｌに調
めたが、それがＯ型血液に起因したものかは
節後、自然凝集 10 分間、ＡＤＰ、ＣＯＬＬ、
今後の検討課題としたい。
ＬＩＳＴ凝集は７分間凝集能を測定。③自然
凝集は惹起物質を添加せずに攪拌のみで小凝
集の出現 Max 値 20000 以上を陽性と判定。Ａ
美萩野臨床医学専門学校 093-931-5201

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