1．はじめに 本製品は、葉、茎、根のような様々な植物組織から簡便にトータル RNA を精製するためのキットです。本製品は、最適化したバッファーシステム とシリカベースのスピンカラムを組み合わせることで、様々なアプリケー ションに適用可能な精製 RNA を調製することができます。 2．製品形態 製品名 シカジーニアス® RNA プレップキット（植物用） (Cica Geneus® RNA Prep Kit (for Plant)) 製品番号 容量 保管温度 3．構成試薬 (50 回) 個別名称 GeneAll Column type W （コレクションチューブ付） EzPure filter （コレクションチューブ付） 1.5 mL チューブ ①Buffer RPL ②Buffer REL ③Buffer RBW ④Buffer RNW ⑤RNase-free water ⑥Buffer DRB 4．製品仕様 製品タイプ 最大サンプル量 カラムへの最大ローディング量 溶出量 カラムへの最大結合 DNA 量 08058-96 50 回分 室温（15 ℃～25 ℃） 容量 用途 50 個×1 DNA 結合 50 個×1 サンプルろ過 50 個×2 25 mL×1 25 mL×1 60 mL×1 60 mL×1 15 mL×1 5 mL×1 ろ液回収 植物組織溶解 植物組織溶解 RNA 結合促進 カラム洗浄 核酸溶出 DNase Ⅰ希釈用液 スピンカラム 100 mg 700 μL 30 μL 100 μg 5．保存条件 本製品は室温 (15 ℃～25 ℃)で保存して下さい。 6．使用上の注意 本製品の試薬は、皮膚や眼、気道に対して有害な刺激物を含んでいます。 本製品を扱う際は十分に注意し、手袋や保護メガネを着用して下さい。 万が一試薬が付着した場合は、速やかに大量の水で洗い、医師の診察 を受けて下さい。 ①Buffer RPL、②Buffer REL と③Buffer RBW はカオトロピック塩を含ん でいます。カオトロピック塩は漂白剤と混ざると反応性の高い化合物を生 じる可能性があります。本製品に漂白剤や酸性溶液が混入しないように 十分注意して下さい。 1) 植物組織サンプル（最大 100 ㎎まで）を乳棒と乳鉢を用いて液体 窒素を加え粉末状になるまで素早くすり潰します。その後、粉末状 のサンプルを 1.5 mL チューブ（別売り）に移し、350 μL の①Buffer RPL を加えてボルテックスミキサーで激しく撹拌します。 *溶解物の凝固が見られる場合は、①Buffer RPL の代わりに ②Buffer REL を使用して下さい。 2) 室温で 3 分間インキュベートし、ライセートを EzPure filter に移しま す。その後、室温で 30 秒間 10,000×g 以上で遠心します。 3) 2)の上清を新しい 1.5 mL チューブ(付属)に移し、清澄化したライセ ートに等量の 70 %エタノール（通常は 350 μL）を加え、すぐにピペ ッティングにより混和します。 4) 3)の混合液を GeneAll Column type W に移し、室温で 30 秒間 10,000×g 以上で遠心します。ろ液を捨て、同じコレクションチュー ブに GeneAll Column type W をセットします。 5) 500 μL の③Buffer RBW を加え、室温で 30 秒間 10,000×g 以上 で遠心します。ろ液を捨て、同じコレクションチューブに GeneAll Column type W をセットします。 6） （オプション：DNase I 処理） GeneAll Column type W のメンブレンの中心に 70 μL の希釈した DNase Ⅰ溶液を加え、室温で 10 分間インキュベートします。 7） GeneAll Column type W のメンブレンの中心に 500 μL の ③Buffer RBW を加え、室温で 2 分間インキュベートします。 8) 30 秒間 10,000×g で遠心を行い、ろ液を捨て、同じコレクションチュ ーブに GeneAll Column type W をセットします。 9) 8）に 500 μL の④Buffer RNW を加え、30 秒間 10,000×g 遠心を 行います。ろ液を捨て、同じコレクションチューブに GeneAll Column type W をセットします。 10) 手順 9）を繰り返します。 11) 室温で 1 分間 10,000×g で遠心し、チューブ内壁についた液を完全 に除去した後、GeneAll Column type W を新しい 1.5 mL チューブ （付属）にセットします。 12） 11) の GeneAll Column type W のメンブレンの中心に 50 μL の⑤ RNase-free water を加え、室温で 1 分間 10,000×g で遠心し、RNA を溶出します。 10.トラブルシューティング 現象 考えられる原因 対策 RNA の回収量が 少ない サンプルの破砕が 不十分 スタートサンプル量 が多すぎる サンプル中の RNA 量が低すぎる 細胞回収までの 工程が多い RNA が 分解している RNase のコンタミ EzPure filter が 目詰まりする RNA 溶液の保存が 不適切 サンプルの破砕が 不十分 8．その他の注意事項 本製品は試験研究用試薬として販売しております。医療や臨床診断用に 使用しないで下さい。 RNA 溶液中に DNA が混入 オプションで DNase I 処理を行う 9．プロトコール 実験を始める前の注意事項 別売りの DNase I（製品番号：11497-96）をご使用いただくことに より、オプションで DNase 処理を行うことができます。その際は、 手順 6）の直前に 70 μL の⑥Buffer DRB に 2 μL の DNase Ⅰを 加えて下さい。 希釈した DNase Ⅰ溶液は使用するまで氷上で保管して下さい。 回収した核酸溶液 を用いた実験がう まくいかない 7．必要な機器類 2 mL チューブ用遠心機、マイクロピペット、マイクロピペット用チップ、ウォ ーターバス、マイクロホモジナイザー、1.5 mL チューブ、乳棒、乳鉢、ボル テックスミキサー エタノールの残存 Buffer RBW と RNW の順序が逆になっ ている プロトコール 1）に従い、十分 に破砕を行って下さい。 スタートサンプル量を 減らして下さい。 スタートサンプル量を増や す、またはプロトコール 12） で⑤RNase-free water を減 らす（最少 30 μL まで）。 サンプル採取後、速やかに プロトコール 1）へ移行して 下さい。 RNase フリーの試薬、実験 機器を使用して下さい。 精製した RNA 溶液は-70 ℃ で保存して下さい。 プロトコール 1）に従い、十分 に破砕を行って下さい。 GeneAll Column type W の中 心 に DNase Ⅰ 溶 液 を 加 え る。 微量のエタノ－ルを除去す るために、プロトコール 9) 後、追加で遠心を行って下 さい。 プロトコールを確認し、正し い順序で洗浄を行って下さ い。 その他アプリケーションデータにつきましては、弊社バイオ研究用試薬 ホームページ（http://www.kanto.co.jp/siyaku/baio.html）にて情報を公開 予定です。
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