海洋生命・分子工学基礎実験 タンパク質の取扱い （5） 細胞分子工学研究室担当 5．SDS-ポリアクリルアミド ゲル電気泳動 おまけ (kDa) 120 90 48 36 28 20 • アフィニティークロマトグラフィーの結果の例 サンプルの調製 • アフィニティークロマトグラフィーで分画し，SDS サンプルバッ ファーと混ぜた 4 つの試料 （a, b, c, d）を 80℃ で 5 分加熱 する • この作業でタンパク質に SDS が結合する • フタの周りにサンプルバッファーをつけると，加熱したときに フタが開いてしまう 電気泳動の準備 • 下槽に泳動バッファーを 入れる （泡立てない） • 泳動槽にゲルを取り付け る • 上槽に泳動バッファーを 注ぎ込む • ケーブルを接続する （赤は赤と，黒は黒と） 電気泳動用の電源 • 電圧 （voltage） の調節 • 電流 （current） の調節 • OUTPUT の ON/OFF • READ と SET • メインスイッチ • ケーブルの接続 電気泳動用の電源の操作 • OUTPUT が OFF であるこ とを確かめる • 念のため，VOLTAGE と CURRENT のツマミを最小 にしておく • READ/SET は READ にし ておく • それからメインスイッチを ON 電気泳動用の電源の操作 • READ/SET を SET にする • 今回は定電流で… • CURRENT ツマミを回して 40 mA にする （ゲル 1 枚あたり 20 mA） • VOLTAGE ツマミを回して 300 〜500 V 程度にする （数字が表示される） 電気泳動用の電源の操作 • READ/SET を READ にす る （数字が 000 になる） • OUTPUT を ON にする • 電気が流れると，泳動槽の 電極から泡が出る （確認しよう） 電気泳動用の電源の操作 • CURRENT が 40 になった ところで，「CC」 の赤ランプ が点灯 • 「CV」 のランプは消灯 • これが定電流（Constant Current） という意味 電気泳動用の電源の操作 • 泳動の後半，ゲル中の電 解質が減る • 抵抗が増して電圧が上が る • 最初に SET した電圧を上 回ると，自動的に定電圧運 転に替わる o 「CC」 ランプが消灯 o 「CV」 ランプが点灯 • その場合，VOLTAGE の SET 値を大きくする
© Copyright 2025 ExpyDoc
