ミニカラムと LC/MS/MS を用いた野菜中のグルホシネ－トの分析

ミニカラムと LC/MS/MS を用いた野菜中のグルホシネ－トの分析
（株）チュ－ケン生活環境研究所
゜松原英隆、高戸徳子、今村弥生
[目的] 近年， GC/MS や LC/MS を用いた様々な農
ル 2.0ml に溶解
薬の多成分同時分析法が提案され，迅速で効率的な農
（16）遠心分離後，上澄液を LC/MS/MS で分析
薬の分析が可能となっている。ただし，これらは非イ
装置：TSQ QUANTUM（Thermo）
，LC20A(島津)
オン性でしかも極性が小さく，アセトンやアセトニト
カラム：HYPERCARB（Thermo）150×2.1mm
リルのような有機溶媒による抽出が容易な農薬を対象
Parent ion:252.1,Product ion:210.0,Cll.Energy:15V
としたものである。しかし，農薬の中には水溶解度が
溶離液：1％酢酸溶液とアセトニトリル
大きな農薬もあり，これらの農薬は同時分析が困難で
グラジェント条件：5％アセトニトリル（0～2 分）－
個別分析の必要があり，操作が煩雑で，高い回収率が
100％アセトニトリル（2.1～7.0 分）－5％アセトニト
得られにくいものが多い。本研究では，除草剤として
リル（7.1～14 分）
の使用頻度が高く，イオン性で水溶解度が大きなグル
[結果] 図 1 は，
ほうれん草 5ｇに 50ng および 500ng
ホシネ－トをミニカラムと LC/MS/MS を用いて迅速
のグルホシネ－トを添加した試料のほうれん草 2ｇ分
かつ高い回収率で分析する個別方法の開発を試みた。
について，
それぞれLC/MS/MS分析した結果である。
試料としては，ほうれん草を用いた。
妨害ピ－クの少ないクロマトグラムが得られた。
[方法] グルホシネ－トの分析方法を以下に示す。
ほうれん草 5ｇにグルホシネ－ト 50ng を添加した
（1）粉砕試料 5ｇを MeOH 50ml で 2 回振とう抽出
試料 5 検体を調製した後分析し，定量値の標準偏差
（2）抽出液をろ過後 5ml 程度まで濃縮
（σ）の 10 倍値から定量下限値を求めたところ，そ
（3）精製水 20ml を加えて超音波処理後 5ml に濃縮
の値は 15.6 ppb であった。また，ほうれん草 5ｇにグ
（4）精製水 10ml を加えて超音波処理
ルホシネ－ト500ngを添加した試料5検体を調製した
（5）GF/C ろ紙で吸引ろ過(精製水で十分に洗い込む)
後分析し，定量値の平均値と添加量との比較から回収
（6）ろ液を 50ml のメスフラスコに移し精製水で定容
率を求めたところ，平均値で 80％であった。以上の結
（7）20ml（試料 2ｇ分）を強塩基性陰イオン交換樹
果，
本分析方法は十分に利用可能であると考えられる。
脂 SAX HF (1.0g)の 2 個直列ミニカラムに負荷
（8）ミニカラムを 20ml の精製水で洗浄した後，グル
ホシネ－トを 20ml の 20％酢酸溶液で溶離
（9）50℃以下で減圧濃縮乾固後，試料をメタノ－ル
で 10ml 容量のリアクティバイエルに転溶
（10）窒素ガスを吹付けて濃縮乾固後，試料をメタノ
－ル 0.2ml に溶解
:
20ng/2g 試料
90
80
70
60
50
7.85
40
9.07 9.11
30
8.13
20
10
0
100
5.18 5.53
6.09
6.14
8.27 8.63
7.22
9.57
10.17
7.43
90
（11）酢酸 0.5ml，オルト酢酸トリメチル 2.0ml を加
80
えた後，窒素置換して密栓し，80℃で 2 時間反応
60
200ng/2g
70
50
（12）放冷後，窒素ガスを吹付けて乾固
40
（13）残留物にメタノ－ル 0.2ml を加えて溶解
20
（14）アセトニトリル 2.0ml を加えた後，活性炭ミニ
7.43
100
30
10
0
4.96 5.37 5.65
5
6.09 6.31
6
7.19
7
7.87 8.13
8
Time (min)
8.78 9.11
9
9.62
10.15
10
カラム(300mg GL-Pak Carbograph)処理
（15）窒素ガスを吹付けて濃縮乾固後，アセトニトリ
図 1 グルホシネ－トの LC/MS/MS（SRM）分析例

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