ビオチン化タンパク質精製磁気ビーズキット使用説明書 Cat No. AF-1040、AF-1041、AF-1042 【目的・用途】ビオチン化タンパク質の精製に使用できる磁気ビーズです。粒径 3um の均一なビーズ表面にストレプトアビジンを共有結合で固定化しており、ビーズを磁気ラックで集合させるため、バッチ法に比べ洗浄効率、回収効率が高く、高純度の分離が可能です。【トラブルシューティング】トラブルタンパク質の収量が少ない【特徴】１）高結合容量２）簡単・迅速な操作３）高回収率【キット内容・保存方法】内容容量 AF-1040 AF-1041 AF-1042 5mL 磁気ビーズ 250uL 1mL 洗浄バッファー 15mL 50mL ー溶出バッファー 1.5mL 5mL ー開封後の使用保存方法期限 4℃ 1年精製の間にタンパク質が分解・劣化する磁気ビーズがチップやチューブに接着する非特異的な結合が多い原因と対策いずれかの段階でサンプルをロスしている。各段階の溶液を SDS-PAGE にて確認してください。インキュベーションが不十分。インキュベーション時間、温度の最適な条件を検討してください。混合が不十分。ビーズとサンプルの混合はボルテックスまたは回転攪拌機を用いて十分行ってください。タンパク質分解酵素が働いている。低温(2-8℃)で精製を行ってください。また、適当なプロテアーゼ阻害剤をバッファーに加えてください。洗浄バッファー中の塩濃度を下げる(例：50mM 塩化ナトリウム)。また、Tween20 濃度を上げる(例：0.1%)。洗浄が不十分。サンプル結合後の洗浄回数を 3 回から 5 回に増やす。洗浄バッファーの Tween20 量を 0.1% まで増やす。洗浄バッファーを完全に除く。磁力が不十分。弊社マグネットラックを使用してください。 ※磁気ラック 1.5-2.0mL チューブ用(AF-1000)は別売です。【関連製品】【成分】 AF-1000 磁気ラック 1.5-2.0mL チューブ用 AF-1010 プロテイン A 磁気ビーズキット洗浄バッファー：PBS、0.02%Tween 20 AF-1020 プロテイン G 磁気ビーズキット溶出バッファー：0.1%SDS AF-1050 ニッケル磁気ビーズキット【磁気ビーズを使用する前に】 AF-2010 ProteinA ゲル抗体精製キット AF-2040 MEP ゲル抗体精製キット <サンプルの準備> ストレプトアビジン磁気ビーズの結合容量は約 12nmol/mL です。その他各種プレキャストゲル、高速電気泳動槽、染色試薬等もご用意しております！ <磁気ビーズの洗浄> 詳しくはアプロサイエンスホームページをご覧ください。１）磁気ビーズをピペッティングまたはボルテックスにより再懸濁し、50uL ⇒ http://aproscience.com/ を新しいチューブに移します。２）磁気ビーズが入ったチューブを磁気ラックにセットし、30-60 秒静置します。３）上清を除きます。４）チューブを磁気ラックから外し、洗浄バッファー300uL を加え、撹拌します。５）2)∼4)をさらに 2 回繰り返します。 ※ 磁気ビーズの保存液には 0.09%NaN3 が含まれているため、必ず 3 回以上洗浄を行ってください。【基本プロトコール】１）磁気ビーズの洗浄後、チューブを磁気ラックにセットし、洗浄バッファーを除きます。２）サンプルを加えます。３）室温、回転下で 30 分間インキュベートします。４）<磁気ビーズの洗浄>のプロトコール 2)∼4)を 3 回繰り返します。５）磁気ビーズを磁気ラックにセットし、上清を除きます。６）磁気ラックからチューブを外し、100uL の溶出バッファーを加えます。７）ピペッティングにより穏やかに再懸濁します。８）95℃以上で 5 分間インキュベートします。９）磁気ビーズを磁気ラックにセットし、上清を回収します。 10）6)∼9)を繰り返します。※ ※ ほとんどのタンパク質は最初の溶出で回収されます。必要であれば 2 回目の溶出を行ってください。