畷 ⊃ 細]雪

CHEMO「rHERAPY
VOL.15NO.5
Sulfamethoxypyrazineの
金
571
基礎的検討
政
泰
第1報
弘
岡山大学医学部微生物学教室
河部
靖・金沢
保・大郷利治
池田友久・佐藤
勝
工一ザイ株式会社研究所
(昭和42年4月22日
1961年Farmitalia社
のBERTAZZOLIら1)は2-su1-
受付)
塗抹,37℃
に24時
間培養後のMICを
求めた。結核菌
fanilarnido-3--methoxypyrazine(sulfamethopyrazine
に対する抗菌試験は試料の各希釈液0.5mlを10%ア
(SMP))が
ルブミン加DUBOS培
新しい興味あるサルファ剤であることを発表
した。すなわち彼等の報告によればSMPはFarmitalia
小jli培地上10日
社研究陣がはじめて合成したものであり,持
続性で経口
culesisBCG株
投与時の吸収もよく血中濃度が高いこと,さ
らに動物の
実験的感染症に対しすぐれた治療成績を示し,急
性毒性
も低く長期投与にたえられるなど数々の特徴をあげてい
る。
地4.4m1と
混じ,これらに1%
間前培養したMycobacteriumtuber・
の菌希釈液(菌量2mg/ml)0.1mlを
添加,37℃
に10日
間培養後MICを
判定した ◎
なお対照にはsulfadimethoxine(SDM)お
fisomezole(SIM)を
以上の方法により得た試験成績を第1表に示した。
畷 ⊃ 細]雪
B血
20%,お
SMP
2-sulfanylamido-3-methoxypyrazine
次いでGHIONEら
も2》SMPは
清蛋白美存下における抗菌力
MUELLER-HINTON培
℃H30《N/
他のサルファ剤に比較
C.細
判定した成績を第2表
菌の増殖曲線に及ぼす影響
第1表SMPのinvitro抗
菌力
MIC(mcg/ml)
欧州をはじめ
米国でも臨床が行なわれ,その臨床成績に関しては枚挙
SMP
っき諸種の基礎実験を行なう機
Control
Bacteτia
∫
会を得たので本報告ではinvitroに
おける抗菌性,蛋
白結合性及び血球への吸着性,急性毒性,さ
らに実験的
StaPhylococcusaureus209P
MicrococcusプlavusPCI1216
感染症に対する治療効果につきここにとりまとめて報告
Sarcinalu彦
θσPCI1001
する。
Baci〃us3霊
のtilisPCI219
〃
最小発育阻止濃度(MIC)
が50%
発育阻害濃度で表現したり,DIMARCOら3)は37℃
〃30蕗
に
〃Para彦
殴し抗菌力に大差のないことを報告している。しかしい
出方法とかけはな
圓ているためあまり参考にならないと思われる。
著者らは一一般細菌に対する抗菌試験はMUELLERilNToN培
地(Difco)を
使用し,菌数4∼8×104cellsl
nlの菌液より1白金耳量を薬剤含有の試験平板に画線
雇MATSUNAGA*
SalmenellatyPhimuriu甥1406
72時間という長時間培養の結果を他のサルフア剤と比
ずれも著者らが実施しているMIC算
〃K-12
Shigレeliafiexneri2a
菌力はBERTAZZOLIら1》
コ」
醜`A1015
〃
〃B8006
〃
」
餌〃oγ麗鱗
Pアo彦eusvulgarisOX19
」Pseudomonasaeru8・
1耀ンcobacterium如
*多
Il
502512.5
6.253.131.56
3.133.130.8
6.256.253.13
>200>20025
3.136.251.56
6.253.133.13
EscheγichiaceliO-111
1・」rnvitroにおける抗菌性
SMPのinvitro抗
SDMISIM
Drug
にいとまないほど多数の報告が見られる現状である。
著者らは今回SMPに
.
比率で添加し,代表的細菌を用い
に示した。
床的にも価値あるサルファ剤であることを示唆した。
このように新しく注目をあびたSMPは
地に仔牛血清をそれぞれ10%
よび40%の
て前述と同様の試験法でMICを
して感染防禦効果が特にすぐれていることを強調し,臨
A・
よびsul-・
使用した○
伽・03σA3
うθアo解∫os`3BCG
剤耐性赤痢菌
>200>200>200
>2002001001
200200100
200505(}
25256.25
2512.51.56
>200>200100
505050
CHEMOTHERAPY
572
第2表
SEP↑.1967
仔牛血清添加時におけるSMPの
抗菌力(MUELLER-HINTeN培
地)
MIC(mcg/m1)
ISIM'
SDM
Drug
SMP
Calfserum%＼
・}・
Bactcria
一
contro1
馬、
、
・2・14・
・1・
・12・14・i・1・
・12・14・
一
llllllI一
胃
50100200>20025252520012・52550>200
StaPhyloceccusauγeus209P
Baごi〃ussubtilisPCI219
6.25ユ2.512.5256.252525503.1312.512.525
EscheγichiaceliK-12
3.ユ36.2512.5256,2512.512,5251.563.136.2512.5
ProteusvulgarisOXI9
沖1.図
2525505012.512.512.5251.563.133.136.25
細菌の増殖曲線におよぼサ
L
O.5
SMP
曳
60
36。6
39.0
40
20.0
50.0
20
9.3
53.5
23.3
61.6
4.9
87.8
0.9
94.5
0
{
b
0
4
σ
1
血SDM
0
ウ召
堵養時間(hr)
汁2図
細菌の増殖曲線におよぼず
SMPdi影
28.4
52.7
15.0
62.5
5.3
73.6
SMP
9.0
55.0
SDM
1.7
91.4
SIM
6.5
67.5
響
`Sa∼mome∼
権加ゐ1〃マ01株
(錫,L。==鍛
鋤)
・
・o-o-・,・SDM(
-x-)←SIM(
0.5
それ20mcg加1,40mcg/m1,お
_iン
よび60mcglmlと
るよう試験溶液を調製,LAVIETES限
ファン膜を通じて0∼5℃
培養時間(hr)
細菌の増殖曲線がSMPの
どのようなpattemの
適量を添加することにより
変化をうけるかにつきSDM,SIM
ならびにsdlmonellatyPhiHgq1株
サルファ剤の種類により赤血球吸着率に差が見られる
人血漿
示し,他のサルファ剤と比較
特徴の1つ
と
している。
限外濾
蛋白結合率を測定した。すなわち新
鮮人血漿と試料液を9;1の
比に混じ血漿中濃度がそれ
比較
しながら吸着率を測定した。
すなわち新鮮人赤血球の生理食塩水浮遊液(ヘマトク
リット値55・0%)4m1に
適量の生理食塩水およびサルブ
ァ剤試料液(生理食塩水溶液)を加えて全量が6mlに
著老らは新鮮人血漿を使用し,LAVIETES5)の
過法によりSMPの
III・赤血球吸着率
かどうかを検討する目的でSMPとSDM,S1Mを
研究陣4)の報告によるとSMPの
して結合率の少いことを強調し,SMPの
より比色定量を行
なつた。なお牛血清も使用して人血漿の場合と全く同様
示した。
を使用し
II・蛋白結合率
での蛋白結合率は66%を
間濾過を行ない ,濾
にして蛋白結合率を算出した。これらの成績を第3表に
た結二果
をそれぞれ第1図および第2図に示した。
Farmitalia社
に30時
な
外濾過装置でセロ
液をBRATTON-・MARSHALL法61Bこ
と比較検討した。試験菌としてはStaPhylecoccusaureUS
209P株
㎜
く ×
率B
合鞠
結五
-SDM(
-x≒Pt-SIM(
濾過前濃度
) Drug【A]
料(mcg/ml)
度
試
一一ゆ一cenか01
・
一
一・o・
一
一〇-SMP(5MCS/m∼)
(
.0{6
5の
濃]加
濾
(5プtaphllececcasaurecrS209P孫)
OD1
蛋白結合率
液鵡
第3表SMPの
S〃 ρ の影響
な
るようにすると同時にサルファ斉膿度としても100mcg'
6m1,200mcg/6m1・400mcg/6m1と
れの試料を調製した。
なるようそれぞ
CHEMOTHERAPY
VOL.15NO,5
第4表SMPの
諏蔽くく
赤血球吸着率
竺」SMP
吸着前の薬剤濃度(mcg16m1)(
赤血球浮遊液)
100
吸着後の薬剤濃度(mcg/m1)(
上
清)
赤血球吸着率(%)
573
SDM
400
100
14.5 30.0 63.0
SIM
中
赤血球吸解 ≦ 鴇
200
400
100
200
・36・・33
SDM
N4-acetylSDM
SIM
N4-acetylSIM
1076
1265
4025
449
2057
3385
95
432
1340
110
742
2057
992
1472
2365
372
1911
3648
よればSMPば
よりすぐれた治療効果(EDso)を
示し
たことを報告し,これがSMPの
大ぎ
な特徴であるとしている。
著者らは今回ブドウ球菌,溶血性連
よび腸炎菌をそれぞれマウスに感染
させて生じた感染症に対する治療効果(EDso)をSDM,
SIMお
N4-acetylSMP
BERTAZZOILIら1)に
鎖球菌(溶連菌),お
溶解性
実験的マウス感染症に対
実験的マウス感染症に他のサルファ剤
1.301.261.171.15
血球浮遊液全容積
り:赤血球浮遊液の赤血球容積
」@品1)1(7.Omcg/m1)1(m温1)
SMP
VI・
する治療効果(ED50)
望一のX…
(37℃)
㌔誕
400
13.2 27.0 55.0 14.2 30.0 62,0
・・23…7…
第5表N4-acetylSMPの
間目(観察終了時)
までは投与前とくらべて,なんら変化
は見られなかつた。
200
C:赤血球浮遊液の薬剤濃度7:赤
`:上清(吸着後)の薬剤濃度
時間後から72時
よびsulfamethyzole(SMZ)と
比較しながvら検
討を行なつた。
1)実
験動物
dd系
マウス(♂),体
重17土19の
ものを1群に1α
匹使用した。
2)試
験菌株と動物への接種
血液寒天培地に累代継代したブドウ球菌(s彦aPhPtloeoe-・
eusaureusSMITH株
このように調製した薬剤含有の赤血球浮遊液を室温に
参,溶連菌(StreptococcushemoIPt-
ticusS2s株),お
よび腸炎菌(Salmonellaenteritidis
30分間放置して薬剤の吸着を完結せしめたのち,注意
S-11株)よ
して低温で遠沈し上清をとり蛋白結合率測定の場合に準
mlに
りそれぞれ1白金耳量を肉汁ブイヨン4.5
じて比色定量し赤血球吸着率を算出した。その成績を第
した。ブドウ球菌および腸炎菌の場合は原液を,溶連菌
接種し,37℃
に18時
の場合は原液の104倍
4表に示した。
IV・N4…
LD50に
アセチル体の溶解性
サルファ剤のN4一アセチル体が水に対する溶解性の悪
mouse量
接…
種した◎
3)薬
でSMP,SDM,SIMそ
各薬剤は0.5%eCMCを
6・0∼8.0,37℃
における溶解性をしらべた成績が第5
溶液はリソ酸クエン酸緩衝液を使用し,定量は前述の
BRATTON-MARSHALL法
V.急
dd系マウス(6,体
によつた。
性
毒
性
重20±29)を
4)観
後24
察と判定
菌を接種した後,毎
用いSMPの
おける急性毒性をSDMと
行なつた。さらにSMPで
各
比較した成績
は体重約2509の
間目に
り各薬剤のEDsoを
第6表SMPの
を算
のような大量投与の場合でも
間目で嘔吐,ふるえが
観察された程度でその後次第に正常に回復し,投与24
ケ
こよ
算出叱た。
マウスにおける急性毒性(LDso)
(mglkg)
投与方法
いう
また犬の場合では6匹を使用し,最大量3,500mg/kg
して投与後2∼3時
ドウ球菌およ
目の生死を,腸炎菌の場合は12":
目目の生死を判定し,LITCHFIELD-WILCOXON法
1160
S,C.
1590
P・0・
1710
Lv,s.c.は,希
SDM
SMP
1。V。
値を得た。
まで経口投与したが,こ
日生死を観察し,ブ
呑竜系ラ
使用してマウスの場合と同様にLD5。
劇し,3,400mg/kg(P.o.),2,120mg/kg(s・c,)と
behaviorと
用いて2倍希釈系列濃度の懸
濁液をつくり,菌接種直後経口投与(mg/kg),以
び溶連菌の場合は5日
が第6褒である。生死の判定は薬物投与後72時
ット(δ)を
剤の調製ならびに動物への投与
時間間隔で4日間連続投与した。
表である。
投与routeに
生理食塩水希釈液(いずれも1〔k
相当する)をそれぞれマウス腹腔内にo.25mll
い場合には尿路結石その他の副作用の原因となる。そこ
れぞれのNA一アセチル体のpH
間培養したものを菌原液と
1050
1180
>4000
アルカリ溶液(pH9.0∼9・5)と
して投ご
与(0.02ml/g)
P.o.は
アラピァゴム懸濁液として投与(0.02ml/9)・
SEP了.1967
CHEMOTHERAPY
574
カ3図SMPの
ブドウ球菌感染マウ又:
醤する治療効果
鋤
伽㈱醐砺灘,
汁5図SκPゆ
腸炎菌紙染マウスに
薄ぜる治療効呆.
(s2Tineneiieenfe,iVjU7sS≒ll義
汁4図S材Pの溶連菌底湊マウスに
対する治癒効呆
{勘繍
加頭泌 ε23株,
鵠
6a50
40
^30
§10
§20
軌
摺
避 8ヨ掬
//
へ
SMPsDMStM
3e
(
塾
魯O
δ 畿、
壽
nUう
Oニヨ
O
ヨ
(§ 8
躍
`油
SMP
90 .aO .
70 60 50 4030 aO
s粥謝sP
ミ崖
禽
㌦灘
6第7表SMPの
》
鋤醐
茄
ブドウ球菌感染vウ
麗
スに対する治
灘
鋤㈱鋤
醐
第8表SMPの
療効果(EDso)
溶連菌感染マウスに対する治療効
果(ED5e)
(StreptococcushemelyticusSas株)
(StaPhylococcusaureusSMITH株)
投与量
1nglkglday
SMplSDMIS・M
1!10
2/10
5/10
7/10
10/10
12.5
25
50
100
200
SMZ
1/10
3/10
4/10
1/10
3110
4/10
6/10
8/10
800
50
100
7/10
8/10
200
1/10
2/10
3/10
1600
54
255
125
>2000
(生存マウス数/実験マウス数)
'5)実
400
800
1600
ED50
(mglkg)
それぞれ第7
に示した。
15.6
31.3
62.5
125
察
250
菌性
他のサルファ剤と同様にグラム陽性,陰性両
,菌種に抗菌性を示し,MICはSDMと
ほぼ同程度と考
500
1000
りは若干抗菌力は弱いように思われ
た。このことはSMPお
よびSDM,SIMを5mcg/ml
添加した場合の細菌の増殖曲線を検討した第1図,第2
EDso
(mg/kg)
SIMSMZ
1!10
2110
4/10
5/10
7/102/102/10
4/103!10
7/105/10
6/10
2000
えられるがSIMよ
1600
腸炎菌感染マウスに対する治療効
轟ノ
姦1d欝1SMPSDM
二
が他剤とくらべて有意差あるかどうかを検討した。
SMPは
160
(SalmonelJaenteritidisS-11株)
なおここに得た数値は推計処理し,SMPのEDoo値
VII.考
82
1/10
3/10
5/10
果(EDso)
たものを第3図 ∼ 第5
悩に,これにもとついて算出したED50を
1)Invitro抗
70
第9表SMPの
以上の方法に従がつてマウスの生存率と薬剤量(mg1
1kg)を対数確率図表上にspotし
2/10
3AO
4110
5/10
7/10
3AO
6!10
8/10
(生存マウス数/実験マウス数)
験成績
表 ∼ 第9表
1!10
4/10
6/10
9/10
25
一ED
50
(mcg伽1)
1SMplSDM SIMlSMZ
投与量
血91kg/day
12.5
400
鰯
萄洗鷲looo㎜
・・5{59・
・…
1/10
2/10
>200(j
(生存マウス数/実験マウス数)
,図の結果からも同様のことがうかがわれる。MUELLER。
HINTON培
地にcalfserumを
それぞれ10%,20%,
・40%と添加した場合は血清量の増加に比例して第2表
のように抗菌力が低下するが,こ
SDM,SIMに
れはSMPに
限らず
も共通に見られた現象であり,低下の度合
VOL. 15
NO. 5
CHEMOTHERAPY
るいずれも似たものであるといえる。
以上の事よりSMPはinvitro抗
数などの諸条件に支配されるため文献は単なる参考に留
菌性の点では他の
サルファ剤と比較して特筆する程の利点は見られなかつ
ゴヒといえる。
2)蛋
575
まるにすぎないが,著者らは同一条件下で実験を繰返し
第7表 ∼ 第9表に示すED5eを
得た。
ここに得た数値を推計処理した結果,溶連菌における
SMPとSDMの
白結合率
程度で,あ
第3表の成績から明らかなようにSMPはSDM,SIM
相互間にのみ有意差が見られなかつた
とはSMPは
明らかに他のサルファ剤に比し
に比較して薬剤濃度の多少にかかわらず血漿蛋白結合率
推計学的に有意差を認め,BERTAZZOLIら1)の
`et最も少いものであることがわかつた。Farmitalia社
SMPは
研究所4)の報告もこの点を強調しており,蛋白結合率の
たものであることが動物実験上でも確認された。
高いサルファ剤,た
とえばSDMの
如きは生体内でのア
報告通り
従来のサルフア剤よりも感染防禦効果のすぐれ
すなわちこのことはSMPが
たとえ少量投与であつて
レルギー反応に関与し,副作用も生じやすいとされてい
も従来のサルファ剤と全く同様の治療成績が得られるで
る点からしてもSMPは
あろうことを示唆するものと考えられる。
サルファ剤で起こりがちな薬疹
その他の副作用も少ないであろうと推定され興味ある成
績と考えられる。
3)赤
血球吸着率
ほとんど差が
両者にくらべると蛋自結合率の場合と
伺様,最も高いという成績が得られた。
4)N`-7セ
に示した各サルファ剤のN4一アセチル体
ア
itチル体はほとんど同程度と見ることができる。SDM
のN`一アルチル体の溶解度は前2者に比較して良くな
い。従がつてSMPはSIMと
性毒性と感染防禦実験の成績をまとあた結果,
1)SMPの
2)血
チル体の溶解性
の溶解度試験の成績から見るとSMPとSIMのN4一
同様に用事尿路結石をつ
くる心配は少ないものといえる。
抗菌力はSDMと
同程度でSIMの
ほう
漿蛋白結合率,赤血球吸着率はSMPが
他のサ
ルファ剤より少ない。
3)Ns-acetylSMPの
溶解度はNs-acetylSIMと
同程度で,Nk--acetylSDMよ
4)SMPの
マウス,ラ
り大きい。
ット.および犬における急性
毒性は低い。
5)実
験的マウス感染症に対するSMPの
果(EDoo)は
'5)急性毒性
感染防禦効
他のいずれのサルファ剤よりもすぐれてい
る。
BERTAZZOLIら1》
はSMPの
急性毒性(LDse)は
マウ
スに1,560mg/kg(i.v。),1,660mg/kg(s。c.),2,164
tng/kg(P.o.),ラ
1mglkg(p.o.)と
つき諸種の基礎的検
が抗菌力としては強いといえる。
サルファ剤解毒機構の1つにN4一アセチル体の成生が
あるが,第5表
括
討を加えた。本報告では勿癬御の諸実験ならびに急
人赤血球への吸着率はSMPとSIMは
ないが,SDMは
総
新しい持続型サルファ剤SMPに
以上のことよりSMPは
新サルファ剤として興味ある
ものと考えられる。
ットでは2,400mg!kg(i・v.),5,000
いう成績を報告しているが,著者らが
本実験に御指導を賜わつた岡山大学医学部微生物学教
室村上栄教楓
御鞭漣頂いたエーザイ株式会社研究本
検討した成績と大差ないものと考えられる。これらの結
部長田辺普博士,検査所長勝井五一郎博士に厚く感謝
果を総合してもSMPは
致します。また実験に御協力頂いたエーザイ株式会社研
公知のサルファ剤に比し,急性
毒性も強くないものであるといえる。とくに著者らの実
究所木下健策,堤淳三,依
施した犬での成績では3,500mg/kgの
表します。
塒,なんらの重篤なbehaviorも
経ロ投与で観察
見られなかつたことか
らして比較的安全なものであると考えられる。
6)実
文
1)
験的マウス感染症に対する治療効果(EDso)
BERTAZZOLIら1)は
SMPのEDooと
実験的マウス感染症に対する
2)
してブドウ球菌に50mg/kg(P.(L5日
1間連続投与) ,肺炎双球菌に20mg/kg(P・o・2日
投与)という値を得ているが,このEDsoは
間連続
ァ剤に比し感染防禦効果のすぐれていることを強調して
"いる
o
ED60は使用するマウスの種属と週令,菌
種時の毒力,薬剤の投与routeと
回数,生
3)
他のサルフ
の種類と接
死観察の日
4)
5)
6)
田智東の各研究員に謝意を
献
BERTAllOLI, C. et at. : Minerva Medica 52
1789, 1961
GHIONE, M. et at. : Communication to the II
nd Chemotherapeutic Symposium, Napoli, Sept.
14-47, 1961
DI MARCO, A. et al. : Research Laboratory
Report, Farmitalia Co.
Research Laboratory Confidence Report, Farmitalia Co.
LAVIETES, P. H. : J. Biol. Chem. 120: 267, 1937
BRATTON,A. C. et at. : J. Biol. Chem. 128: 537,
1939
576
CHEMOTHERAPY
BASIC
STUDIES
Department
ON
SEPT.
SULFAMETHOXYPYRAZINE
YASUHIRO KANEMASA
of Microbiology, Okayama University
KIYOSHI KAWABE,
TAMOTSU
KANAZAWA,
TOMOHISA IKEDA & MASARU
Eisai Research
1967
( I)
Medical School
TOSHIHARU OHGO,
SATO
Laboratories
Basic studies on sulfamethoxypyrazine (SMP), a new sulfonamide, were performed in comparison with
sulfadimethoxine (SDM) and sulfisomezole (SIM). The results of Report I are summarized as follows.
1) In vitro antibacterial activities of SMP were as effective as SDM, but less than that of SIM.
2) The affinity of SMP in human plasma and its adsorption rate on human erythrocytes were less
than SDM and SIM.
3) NJ-Acetyl derivative of SMP was easily soluble as well as N4-acetyl SIM at pH 6.0,-8.0 in buffer solution.
4) Acute toxicities (LD50) of SMP in mice were 1,160 mg/kg (i. v.), 1,590 mg/kg (s. c.), and 1,7101
mg/kg (p. 0.).
5) ED50of SMP in infected mice were superior to other three sulfonamides. The results were 54
mg/kg on Staphylococcus, 70 mg/kg on Streptococcus, and 115 mg/kg on Salmonella.

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