蛍光検出器FP-4020のスペクトルオートスキャン機能による励起・蛍光

LC application data
No.032004H(1/4)
June 2015
蛍光検出器 FP-4020 のスペクトルオートスキャン機能による励起・蛍光スペクトル測定
Excitation and Emission Spectrum Measurement by Spectral Auto Scanning
of the Fluorescence Detector FP-4020
【はじめに】
多環芳香族炭化水素（PAHs）は、縮合芳香族環からなる化合物であり、ディーゼル油や石炭などの炭素含有物質の不完全
燃焼によって生成されます。PAHsのうち幾つかは発がん性物質としても知られており、環境中のPAHsの検出及び定量が重
要になってきます。
一方、これらの検出を行う蛍光検出器では、最適な励起波長・蛍光波長を選択することで、より高感度な測定を行うことがで
きます。
今回は、蛍光検出器FP-4020及び制御ソフトであるChromNAVを組み合わせ、スペクトルオートスキャン機能を使用して
PAHsの励起及び蛍光スペクトルを測定した結果を報告します。
Keyword : PAHs, CrestPak C18S, FP-4020, 励起スペクトル, 蛍光スペクトル, オートスキャン
【実験】
[Equipment]
Pump:
Pump option:
Autosampler:
Column oven:
Detector:
[Conditions]
Column:
PU-4180
DG unit
AS-4150
CO-4061
FP-4020 (Analytical Cell)
表1
Eluent:
Flow rate:
Column temp.:
Wave length:
Cell temp.:
Injection volume:
Standard:
タイムプログラム
Time (min)
Ex (nm)
Em (nm)
0.0
3.5
4.1
5.0
6.0
8.5
276
266
250
336
268
262
334
310
402
392
384
408
CrestPak C18S
(4.6 mmI.D. x 150 mmL, 5 µm)
Acetonitrile/Water (78/22)
1.0 mL/min
40 ̊C
Time program (see Table 1)
20 ̊C
1 µL
Mixture of 10 µg/mL naphthalene,
1 µg/mL fluorene, anthracene, pyrene
chrysene and benzo[a]pyrene in methanol
【結果】
図1に、励起スペクトルスキャン時のPAHs 6成分のクロマトグラムを示します。Naphthalene, Fluorene, Anthracene,
Chrysene及びBenzo[a]pyreneは10000 μV、Pyreneは5000 μVを閾値とし、その値を満たした時にスキャンを実行しまし
た。
6
2
1
3
5
閾値10000
4
閾値5000
Scan speed
30 nm/sec
図1
励起スペクトルオートスキャン時のPAHs 6成分のクロマトグラム
1: Naphthalene, 2: Fluorene, 3: Anthracene, 4: Pyrene, 5: Chrysene, 6: Benzo[a]pyrene
〒192-8537 東京都八王子市石川町2967-5
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No.032004H(2/4)
June 2015
図2 に、スペクトルオートスキャンによって得られた各成分の励起スペクトルを示します。
図2
Naphthalene
Pyrene
Fluorene
Chrysene
Anthracene
Benzo[a]pyrene
スペクトルオートスキャンで得られたPAHs 6成分の励起スペクトル
ChromNAVには、スペクトルデータの解析用に、スペクトルマネージャが標準で搭載されています。図3に、スペクトルマネー
ジャによるピーク検出設定及び結果表示画面を示します。スペクトルマネージャのピーク検出機能を使用することにより、励起
及び蛍光スペクトルから極大波長を簡単に見つけることができます。
実行
図3
スペクトルマネージャによるピーク検出設定及び結果表示（左: 検出設定, 右: 検出結果）
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LC application data
No.032004H(3/4)
June 2015
図4 に、蛍光スペクトルスキャン時のPAHs 6成分のクロマトグラムを示します。Naphthalene, Fluorene, Anthracene,
Chrysene及びBenzo[a]pyreneは10000 μV、Pyrene は5000 μVを閾値とし、その値を満たした時にスキャンを実行しま
した。
1
2
3
5
6
閾値10000
4
閾値5000
Scan speed
30 nm/sec
図4
蛍光スペクトルオートスキャン時のPAHs 6成分のクロマトグラム
1: Naphthalene, 2: Fluorene, 3: Anthracene, 4: Pyrene, 5: Chrysene, 6: Benzo[a]pyrene
図5 に、ChromNAVによるスペクトルオートスキャンの設定画面を示します。＜コントロールメソッド＞作成時に検出器を選
択し、＜タイムプログラム＞タブにて設定を行います。ここでは、各成分の励起・蛍光波長、オートスキャン開始時間及び終
了時間を設定します。
図5
ChromNAV によるスペクトルオートスキャンの設定画面（上: Ex オートスキャン、下: Em オートスキャン）
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No.032004H(4/4)
June 2015
図6 に、スペクトルオートスキャンによって得られた各成分の蛍光スペクトルを示します。
図6
Naphthalene
Pyrene
Fluorene
Chrysene
Anthracene
Benzo[a]pyrene
スペクトルオートスキャンで得られたPAHs 6成分の蛍光スペクトル
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