リアルタイム PCR 遺伝子発現定量サービス 本サービスは株式会社日本遺伝子研究所よりご提供いたします MOGERA®-Real Time PCR ご希望の遺伝子の mRNA 発現量をリアルタイム PCR で定量いたします。 新規遺伝子の mRNA 発現レベルの評価や RNAi による mRNA ノックダウンの評価、マイクロアレイの結果の 評価などにご利用ください。 サービス内容 ターゲット遺伝子と内部標準遺伝子(ハウスキーピング遺伝子など)について mRNA 発現量を測定し、ター ゲット遺伝子の発現量を補正後、相対値としてご報告いたします。検出法は、SYBR® Green 法、 Hybridization Probe 法、TaqMan® Probe 法からご選択いただけます。なお、本解析では Roche diagnostics 社 製 LightCycler® および専用試薬を使用しております。 ・ SYBR® Green 法 2 本鎖 DNA に特異的に挿入する蛍光色素 SYBR® Green Ⅰを用いる検出方法。アニール段階および伸長段階 の 2 本鎖 DNA に挿入し、励起光の照射により蛍光を発する。ターゲット遺伝子ごとにプローブを設定する 必要がないのが特徴。標識プローブを使用する方法と比較すると安価に抑えることができます。 ・ Hybridization Probe 法 3’末端が蛍光標識されたドナー色素と 5’末端が蛍光標識されたアクセプター色素の 2 種類の配列特異的 プローブを用いる検出方法。アニール段階に両者が接近した状態で配列特異的に結合し、励起光の照射によ り励起されたドナー色素からアクセプター色素へエネルギーが転移後、アクセプター色素が蛍光を発する。 2 種類の配列特異的プローブを用いるため、検出特異性が高いのが特徴です。 ・ TaqMan® Probe 法 5’末端を蛍光色素、3’末端をクエンチャー物質で標識した TaqMan® プローブを用いる検出方法。配列特 異的に結合後、TaqMan® の 5’→3’エキソヌクレアーゼ作用による分解を受け、クエンチャーによる抑制が 解除されるため励起光の照射により蛍光を発する。配列特異的なプローブを使用するため検出特異性が高い のが特徴です。 特徴 ・ 様々なサンプルタイプに対応 組織、血液、培養細胞、パラフィン切片、Total RNA、cDNA など、様々なサンプルに対応しております(解 析目的のサンプルからの Total RNA 抽出は別途料金が必要となります)。 ・ 最短2週間で解析結果をご提供 1000 遺伝子以上のリアルタイム PCR の定量系を構築してきた実績があり、豊富な経験と技術により正確で 迅速なサービスをご提供いたします。弊社でご用意しているリストに含まれた遺伝子に関しては、反応条件 が至適化されておりますので、サンプル受領後約 2 週間で解析結果をご提供できます(リストに含まれる遺 伝子に関しては幣社ウェブサイトをご覧ください)。また、リストに含まれていない遺伝子も約 5 週間(サ ンプルにより異なります)でご報告となりますので、お急ぎの方は是非ご利用ください。 お送りいただくもの サンプルタイプ 送付量 組織※1 20mg 血液※2 7ml (EDTA-2Na 採血管) 培養細胞※3 1×105 細胞以上 パラフィン切片 厚さ 5μm ・ 5 枚以上 Total RNA 5μg 以上 (500ng/μl 以上) cDNA 20μl 以上 ※1. 組織サンプルは採取後、直ぐに液体窒素で凍結 処理していただくか、保存試薬で処理をしてくださ い。 ※2. 血液は必ず採取 24 時間以内にサンプルをお送 りください。 ※3. 細胞は PBS で洗浄後、上清を除去し、細胞ペレッ トの状態で直ぐに液体窒素で凍結処理していただく か、保存試薬で処理をしてください。 ・血液およびパラフィン切片は冷蔵状態(4℃)にて お送りください。それ以外のサンプルについては、 十分なドライアイスを同梱し、冷凍状態にてお送り ください。 納品物 解析報告書(内部標準遺伝子による補正値) 納期 ・ 価格 ・納期はサンプル到着後 2 週間~(至適化を行う遺伝子数およびサンプル数により異なります)、価格はサンプルタイプ、 サンプル数および検出法により異なります。詳しくは幣社ウェブサイトをご覧ください。 注意事項 ・サンプルは、必ず平日着指定、冷凍(血液およびパラフィン切片は冷蔵)状態にてお送りください。 12
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