創薬ターゲット・Gタンパク質共役型受容体(GPCR)

創薬ターゲット・Gタンパク質共役型受容体(GPCR)
β
α γ
β-Arrestin
β
α γ
AC
GPCR創薬研究開発の総合ソリューション
DiscoveRxのGPCR評価アッセイ系
xxx
Adenylyl
Cyclase
PLC
Stimulation &
Binding
Gα
ATP
ProLink Tag (PK)
Gαθ
α2
α1
Substrate
Light
β-Arrestin &
Enzyme Acceptor (EA)
IP3
cAMP
Ca2+
1
2
HitHunter® セカンドメッセンジャーアッセイ
最適化された検出試薬と検証済み細胞株を用いて、シグナル
伝達系の過程で産出されるセカンドメッセンジャー（cAMPおよ
PathHunter® β-アレスチンアッセイ
Gタンパク質に非依存的なβ-アレスチンの補充を検出することから
GPCRの脱オーファン化やリガンドバイアスの研究にも最適
びカルシウム）を測定
Pharmacochaperone
EA
PK
EA
Endosome
Membrane-EA Format
EA
Golgi
PK
EA
Stabilized
EA
EA
Substrate
PK
EA
PK
Light
ER
EA
Endosome-EA Format
Substrate
3
Light
PathHunter GPCR内在化アッセイ
抗体やイメージング技術、放射性物質を使わずにGPCR内在
化を直接的かつ定量的に測定
tel | 1.866.448.4864 tel | +44.121.260.6142
Misfolded
Receptor
PK
4
PK
EA
PathHunter 薬理的シャペロン・トラフィッキングアッセイ
タンパク質のフォールディングおよびトラフィッキングの異常を修正する
薬理的シャペロン機能をもつ化合物の同定および最適化
e | [email protected]
セカンドメッセンジャーアッセイ
xxx
Adenylyl
Cyclase
PLC
Gα
ATP
Stimulation &
Binding
ProLink Tag (PK)
Gαθ
α2
α1
Substrate
Light
β-Arrestin &
Enzyme Acceptor (EA)
IP3
cAMP
Ca2+
DiscoveRxでは、細胞内cAMPの蓄積やカルシウム濃度変化を検出す
る機能的セカンドメッセンジャーアッセイを提供しています。これらのアッセイは、
ナチュラルなカップリング状態を保った全長のGPCRを安定発現させた細胞
株と、検出試薬によって構成されます。信頼性の高い検証済みプラットフォー
ムを用いることで、スクリーニングを迅速かつ簡便に行うことができるだけでは
なく、アッセイ樹立にかかる時間を削減することができます。
Calcium No WashPLUS を用いたカルシウムの検出
細胞内のカルシウム濃度を測定することで、GPCRやイオンチャネルの活
性状態を測定することができます。HTS化が容易なDiscoveRxのカル
シウム検出アッセイには、化学発光を利用したCalcium No WashPLUS
と発光タンパク質を利用したCoelenterazine hがございます。洗浄ステ
ップが不要なCalcium No WashPLUSキットは、従来のアッセイ方法と比
べて、迅速・確実・低コストを実現しています。
HitHunter® テクノロジーを用いたcAMPの検出
a) 幅広いアッセイウィンドウ
b) 少ない細胞数でアッセイ可能　c) 高い血清耐性
d) HTSアッセイフォーマットに対応（3456ウェルまで微量化可能）
e) 標準的なルミノメーターによるシグナル検出
上記のような特長を持つHitHunter cAMPアッセイは、バイオ医薬品(ペ
ヒトGPCR（既知およびオーソログ）発現細胞株
目的の薬理研究やCalcium No WashPLUSキットによるカルシウム動態
の評価用に最適化された、Gq 共役型GPCR安定発現細胞株です。
HitHunter IP3アッセイおよびcGMPアッセイもございます
プチドや抗体)、完全または部分的アゴニスト、アンタゴニスト、インバースアゴ
ニスト、アロステリックモデュレーターなど、幅広い分子クラスの評価に用いるこ
とができます。
特長
• 400件以上の査読された文献による実績
Gs /Gi 共役型cAMP Hunter™ 細胞株
DiscoveRxでは、115種類を超える非強制的カップリングの手法で作成さ
れた Gs /Gi 共役型GPCR安定発現細胞株を提供しております。本細
胞株は、薬理研究やHitHunter cAMPアッセイを用いた機能的cAMP
• ホモジニアスで簡便なアッセイ方法
• 高い信頼性と再現性
応答の評価用に最適化されていますので、アッセイ樹立の時間と手間を削
• 高感度かつ幅広いアッセイウィンドウ
減できます。
• 確実かつ迅速な検出方法
• 低分子化合物やバイオ医薬品に対応
tel | 1.866.448.4864 tel | +44.121.260.6142
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β-アレスチンアッセイ
xxx
Adenylyl
Cyclase
PLC
Gα
ATP
Stimulation &
Binding
ProLink Tag (PK)
Gαθ
α2
α1
Substrate
Light
β-Arrestin &
Enzyme Acceptor (EA)
IP3
cAMP
Ca2+
多様なGPCRを評価可能とするプラットフォーム
PathHunter® β-アレスチンアッセイは、DiscoveRx独自のEnzyme
Fragment Complementation (EFC)技術を用いて活性化GPCR
へのβ-アレスチンの結合をモニターします。リガンドによる刺激を受けると、Gi 、
Gs およびGq 共役型GPCRにβ-アレスチンが結合します。アレスチンの補充
はGタンパク質シグナル伝達に対して非依存的であるため、PathHunter™
β-アレスチンアッセイは、多様なGPCRに対して利用できる万能なアッセイで
アロステリックモデュレーター・リガンドバイアス・バイオ医薬
品などの評価
簡便でワンステップの化学発光を利用したPathHunterアレスチンアッセイ
は、完全または部分的アゴニスト、インバースアゴニスト、アンタゴニスト、中和
抗体およびアロステリックモデュレーターなど多様な薬理作用に対応できま
す。cAMPやカルシウム動態などを検出するセカンドメッセンジャーを利用し
たアッセイと組み合わせることで、多様なシグナル経路を平行して検証するこ
あるといえます。本アッセイでは、受容体の活性化に伴い、化学発光シグナル
とができることから、複数のシグナル経路が関与するリガンドの同定も可能で
が直線的に増加するため、化学量論的な情報を得ることができます。
す。その結果、新規の化合物クラスの発見にもつながります。
ヒトGPCR（既知およびオーソログ）発現細胞株
ヒトおよびオーソログGPCRを含む400種類以上の検証済み細胞株を取
り揃えているDiscoveRxでは、業界最大級のセレクションを誇る機能的
GPCRセルベースアッセイを提供しています。これらのアッセイは新規医薬品
候補化合物のカウンタースクリーニングや力価試験、免疫原生試験、構造
活性相関(SAR)評価にご活用いただけます。PathHunter β-アレスチン・
特長
• 90種類以上のオーファンGPCRを含む、400種類以上の検
証済みGPCRアッセイ
• HTSスクリーニングにも対応可能なワンステップのプロトコル
オーソログGPCRアッセイでは、推定リード化合物のより詳しい情報を得た
• QCとしても有用な確実で迅速な検出方法
り、選択性や特異性のプロファイリング、リガンドの有効濃度を決定すること
ができます。
• Gタンパク質非依存的なアッセイ法は、リガンドバイアスの研
究にも最適
GPCR脱オーファン化研究
• 新規薬理作用の探索やアンタゴニストスクリーニングに適し
た幅広いアッセイウィンドウ
PathHunterアレスチンオーファンGPCRアッセイは、GPCRの脱オーファン
化の研究に最適なスクリーニングプラットフォームです。Gタンパク質に依存し
ない検出方法である本アッセイは、確実かつ高感度のスクリーニングであるこ
とから、セカンドメッセンジャーのシグナルを確かめることなく、リガンド＝受容体
の新規の組み合わせを明らかにすることが可能です。タグ付けされたGPCR
が活性化された際に発せられるシグナルを検出するため、内在性の受容体
や偽シグナルの影響を最小限に抑えることができます。
tel | 1.866.448.4864 tel | +44.121.260.6142
e | [email protected]
内在化・トラフィッキングアッセイ
Pharmacochaperone
Endosome
EA
PK
EA
Membrane-EA Format
EA
Golgi
PK
EA
Stabilized
EA
EA
Substrate
PK
EA
PK
Light
ER
EA
Endosome-EA Format
Substrate
PK
Light
Misfolded
Receptor
PK
EA
PathHunter® GPCR内在化アッセイ
PathHunter 薬理学的シャペロン・トラフィッキングアッセイ
の内在化を測定することができます。イメージング技術や抗体を使ったその
を持った分子(化合物)を薬理学的シャペロン (pharmacochaperone)
他の内在化アッセイとは異なり、セルベースの本アッセイは簡便かつ放射性
と呼びます。PathHunter薬理学的シャペロン・トラフィッキングアッセイはセ
物質が不要です。化学発光を利用するため、HTSにも適しています。受容
ルベースのアッセイであり、薬理学的シャペロンの同定や最適化に用いること
体のリサイクリング経路を区別することで、新規の阻害剤を同定したり、候補
ができます。ミスフォールディングによるタンパク質輸送や内在化が関与する
化合物の薬理作用や選択性を確認することが可能です。
疾患において、目的化合物の薬理学的性質や機能阻害を簡便かつ定量
PathHunter GPCR内在化アッセイでは、直接的かつ定量的にGPCR
タンパク質のミスフォールディングを修正し、正しいタンパク質輸送を促す機能
的に測定することが可能となります。
業界最大級のGPCR安定発現細胞株のラインナップ
DiscoveRxの野生型カップリングGi /Gs /Gq 細胞株GPCR安定発現細胞株は、セカンドメッセンジャー・アレスチン補充・受容体内在化およびタンパク質
輸送を検出することにより、GPCRシグナル伝達を評価するために構築されました。600種類を超えるGPCRアッセイ(ヒトまたはオーソログ)から、お客様の目
的に合ったアッセイをお選びいただけます。GPCRを創薬ターゲットとしたアッセイは、DiscoveRxにお任せください。
cAMP and
Calcium Detection
β-Arrestin
Recruitment
Deorphanization
GPCR
特長
• 受容体生物学研究やリード化合物の同定、構造活性
相関(SAR)評価に最適
• 幅広いアッセイウィンドウと高い再現性
Custom Assay
Development
Screening and
Profiling Services
• Gタンパク質非依存的なアッセイ法
• 特異的・簡便・非放射性
Trafficking
tel | 1.866.448.4864 GPCR Endocytosis
and Recycling
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• HTSに適したワンステップのプロトコル
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スクリーニング＆プロファイリング試験サービス
600種類以上の非強制的カップリングGPCR安定発現細胞株のコ
レクションがLeadHunterSM　GPCR試験サービスのベースとなってお
特長
り、GPCR活性応答として複数の下流シグナルを検証することができま
• 600種類を超える非強制的カップリングGPCRアッセイ
す。LeadHunter サービスをご活用いただくことで、リード化合物の同定や選
• 複数の機能アッセイを網羅
（β-アレスチン・cAMP・カルシウム・内在化）
択性、構造活性相関(SAR)評価など、あらゆるステージのGPCR創薬研
究において、時間とコストを削減することができます。
• 既成のパネルとカスタムパネルから選択可能
GPCRscan GPCR創薬ソリューション
• 70種類を超えるオーファンGPCRを含むパネルは、GPCRの
脱オーファン化に最適
gpcrMAX パネルにより、リガンド＝受容体の特異的な結合を明らかにしま
す。スクリーニングにより同定されたヒット化合物候補は、DiscoveRxの複
• gpcrMAXパネル：アゴニストとアンタゴニストを同時に評価
数の機能アッセイを用いて確実に検証をすることができます。
Primary Screen
Hit Confirmation
100
100
80
60
40
20
0
0
10
20
30
40
50
60
70
80
cAMP Hunter™
120
Reference
Test
Normalized Signal (%)
120
Normalized Signal (%)
% Activity
PathHunter® Arrestin
120
80
60
40
20
0
10-11
GPCR #
10-10
10-9
10-8
10-7
10-6
10-5
Reference
Test
100
10-4
80
60
40
20
0
10-11
10-10
10-9
[Compound] (M)
10-8
10-7
10-6
10-5
10-4
[Compound] (M)
GPCRパネルによるプロファイリングを特定のリガンド濃度により実施し、潜在的な相互作用を検出した (左)
PathHunterアレスチンアッセイおよびHitHunter cAMPアッセイを用いて、ターゲットGPCRに対するリガンドの結合能力が評価され、新規のリガンドが同定された（中・右）
GPCRscan サービスおよびパネルのご紹介
パネル
内容
gpcrMAX
165種類以上のGPCR(60種類のリガンドファミリーを網羅)を搭載したフルパネル。アゴニストとアンタゴニストを同時
解析。
orphanMAX
クラスAおよびクラスBオーファン受容体を網羅した70種類以上のオーファンGPCRを搭載。アゴニストモードのみ対応。
gpcrELECT
既知、オーファンおよびオーソログGPCR細胞株の中からターゲットを自由にご選択いただけるカスタムパネル。
gpcrE/IC50ELECT
ご指定のGPCRscanセルベースアッセイを用いた定量的な機能評価。
Chemokine Panel
20種類のケモカイン受容体を網羅するパネル。アゴニストとアンタゴニストを同時解析。
Therapeutic Panels
13種類の疾患別パネル (Cancer, Neurological, Inflammation, Pain and Addiction, Metabolic,
Cardiovascular, Digestive and Renal, Reproductive, Respiratory, Ocular, Dermatology, Auditory
and Otology, and Post-Traumatic Stress Disorder)
Functional Selectivity Index
構造活性相関やリード化合物の評価に最適な、機能選択性およびリガンドバイアスの定量的評価。 β-アレスチ
ン・cAMP・カルシウム・内在化の機能アッセイを使用。
Positive/Negative Allosteric
Modulator Screening
GPCRセルベースアッセイ(β-アレスチンまたはcAMP)を用いた、ポジティブおよびネガティブアロステリックモデュレーターの
定量的評価。
tel | 1.866.448.4864 tel | +44.121.260.6142
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OPPRK11
O RD
OP RM1 1
OP BWR 2
NP BWR
NP TR1
SS TR4
SS TR2
SS R3
SST R5
SST R
GPE P3
RXF P4
RXF L1
AGTR
GPR25
GPR15
AGTR1
AGTR2
BDKRB1
BDKRB2
CXCR7
GPR182
CCBP2
XCR1
CCRL2
CX3CR1
CCR8
CCR4
CCR1
CCR3
CCR2
CCR5
CXC
CXC R1
CXC R2
CCR R5
CX 10
CX CR3
CXCCR4
CC R6
CC RL1
CC R9
CC R6
G R7
G PR1
GPPR1061
G R8 1
M PR5 4
M TN 0
GPTNRR1A
G R 1B
G PR 151
G PR 82
G PR 14
GP PR 160 1
G R 1
G P 1 48
G P R1 49
C A R1 53
G AS BBR 62
PR R 2
C
6A
GPCR創薬研究ポートフォリオ
Class A
Class C
Internalization
Ortholog
Pharmacotrafficking
アッセイ
>135 セカンドメッセンジャー
>345 アレスチン
1
M
R 5
G RM M2 3
G R
G RMM6
G R M7
G R 4
G M 8 1
GRRM BR
G AB CR L
G AL CR
C L 1
CARHRR2
C RH R
C LP2 R
G P1
GLCGR
G IPR 1
G HR
PT HR2
PT RHR P1R1
GH CYA
AD R2
VIP TR
SC R1
VIP R146
GP C
DAR 176
GPR 22
GPR 7
GPR337L1
GPR A
EDNR B
EDNR
BRS3
GRPR
NMBR
GPR103
GPR120
GPR19
GPR45
A O
AD DO RA
R 2
G OR A A
G PR A1 3
P
N R 5
NT TS 21 2
R
M SR 2
L 1
N GH NR
NMMU2SR
GP U1 R
R R
G TR 39
GPPR1 HR
4
R
PP 1392
NP YR
NP Y1R1
PR Y5R
GP LHR
N R83
NP PY2R
NP FFR2
HCRFFR1
HCR TR2
T
TAC R1
TAC R3
TACRR1
CCKB 2
CCKA R
R
OXTR
AVPR1B
AVPR1A
AVPR2
GNRHR
NPSR1
PROKR2
PROKR1
GPR63
1
9
11 2B
RA
Class B
Arrestin
2nd Messenger
>95 内在化
>5
トラフィッキング
種
>225 ヒト
>105 オーソログ
GPCRファミリー
Acetylcholine
Galanin
Neurotensin
Adenosine
Ghrelin
Opioid
Adrenoreceptor
Glucagon
Orexin
Anaphylotoxin
Glutamate
Purinergic Receptor (P2Y)
Angiotensin
Glycoprotein Hormone Receptor
Peptide P518 Receptor
Apelin
Gonadotrophin-releasing Hormone Receptor
Platelet-activating Factor
Bile Acid Receptors
Histamine
Prokineticin
Bombesin
Hydroxycarboxylic Acid Receptors
Prolactin Releasing Peptide Receptor
Bradykinin
KISS1-derived Peptide Receptor
Prostanoid
Calcitonin
Leukotriene
Protease activated
Calcium-sensing Receptors
Lysophospholipid
PTH receptor
Cannabinoid
Melanin-concentrating Hormone Receptor
Relaxin
Chemokine
Melanocortin
Rhodopsin
Cholecystokinin
Melatonin
Serotonin
Class A Orphan
Metabotropic Glutamate
Somatostatin
Corticotropin
Motilin
Tachykinin
Dopamine
Neuromedin U
Trace Amine Receptor
Endothelin
Neuropeptide B and W
Thyrotropin-releasing Hormone Receptor
Formylpeptide
Neuropeptide F
Urotensin
Free Fatty Acid
Neuropeptide S
Vasopressin
GABAB Receptor
Neuropeptide Y
VIP and PACAP
新規ターゲットが随時加わっております。最新のGPCRターゲットリストは、DiscoveRxウェブサイトにてご確認ください。 www.discoverx.com/gpcrs
tel | 1.866.448.4864 tel | +44.121.260.6142
e | [email protected] www.discoverx.com
GPCR創薬研究開発の総合ソリューション
Cholinergic Receptor, Muscarinic 2 (CHRM2)を複数の機能アッセイで評価
セカンドメッセンジャー
β-アレスチンの補充
受容体の内在化
20000
10000
Acetylcholine
Carbachol
Oxo-M
100000
75000
7500
RLU
RLU
10000
125000
RLU
Acetylcholine
Carbachol
Oxo-M
15000
5000
Acetylcholine
Carbachol
Oxo-M
50000
5000
2500
25000
0
10 -10
0
10 -11 10 -10 10 -9 10 -8 10 -7 10 -6 10 -5 10 -4 10 -3
10 -8
10 -6
10 -4
10 -2
0
10 -10 10 -9 10 -8 10 -7 10 -6 10 -5 10 -4 10 -3 10 -2
Agonist [M] + 10 µM Forskolin
[M]
[M]
135種類以上の野生型カップリング
415種類以上の検証済み細胞株
95種類以上のネイティブな受容体を
Gi /Gs /Gq 細胞株
(オーファンおよびオーソログを含む）
発現したセルベースアッセイ
各種製品およびサービス
アッセイキット
安定発現細胞株
受託サービス
カスタムアッセイ
Ready-to-useの凍結細胞
各種GPCR安定発現細胞株
DiscoveRxの経験と専門性
全ての技術に対応
検出試薬
検証済みの培養試薬
多様なサービスの選択肢
R&Dチームとの連携
HTSスクリーニング対応
200プロジェクト以上の実績
培養試薬(培地およびプレート)
製品・サービスの詳細情報および最新のGPCRターゲットリストは、DiscoveRxウェブサイトをご参照ください。
www.discoverx.com/gpcrs
本社所在地: 42501 Albrae Street, Fremont CA 94538 USA
所在地: 〒135-0016 東京都江東区東陽2-2-20東陽駅前ビル
URL: http://www.discoverx.com/
電話: +1-510-979-1415 (内線123 日本語可)　FAX: +1-510-979-1650
Eメール: [email protected]
URL: http://www.cosmobio.co.jp/
DiscoveRx
技術サービス部
電話: 03-5632-9616
FAX: 03-5632-9614
Eメール: [email protected]　GPCR
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